结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能分析

目的探讨结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(Xpert)检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能。方法选取河北省胸科医院2021年4月至2022年10月期间行手术治疗的124例肺部空洞疾病患者相关病历资料,其中菌阴空洞肺结核86例(观察组),非结核肺部空洞疾病38例(对照组)。收集患者手术标本Xpert检测和外周血结核感染T细胞斑点(T-SPOT)试验结果,分析二者对菌阴空洞肺结核的诊断效能。结果Xpert检测和T-SPOT试验诊断菌阴空洞肺结核的敏感度为68.6%、75.6%,特异度为97.4%、68.4%。Xpert检测的敏感度低于T-SPOT试验(χ^(2)=5.832,P<0.001),特异度高于T-SPOT试验(χ^(2)=21.469,P<0.001)。2种方法在观察组中的阳性检出率均高于对照组[Xpert检测:68.6%(59/86)比2.6%(1/38);T-SPOT试验:75.6%(65/86)比31.6%(12/38)](均P<0.001)。受试者工作特征曲线分析结果显示,Xpert检测诊断菌阴空洞肺结核的曲线下面积为0.830,T-SPOT试验的曲线下面积为0.729,Xpert检测的准确度高于T-SPOT试验(P<0.001)。结论Xpert检测对菌阴空洞肺结核有比较可靠的诊断效能。

结核感染T细胞斑点试验、结核分枝杆菌核酸恒温扩增检测及腺苷脱氨酶联合检测在结核性胸腔积液诊断中的价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核分枝杆菌核酸恒温扩增检测(TB-SAT)、腺苷脱氨酶(ADA)联合检测对结核性胸腔积液的诊断价值。方法选择2021年1月至2021年12月于新乡医学院第一附属医院就诊的135例胸腔积液患者为研究对象,其中结核性胸腔积液患者83例,非结核性胸腔积液患者52例。135例患者均进行外周血T-SPOT.TB、胸腔积液TB-SAT和胸腔积液ADA检测,比较3种方法单独检测和联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度及特异度。结果T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度、特异度比较差异均无统计学意义(P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=4.990、13.410、14.590,P<0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度与T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测比较差异均无统计学意义(χ^(2)=0.000、2.420、0.060,P>0.05)。T-SPOT.TB+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于ADA单独检测(χ^(2)=4.069,P<0.05),与T-SPOT.TB、TB-SAT单独检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.055、3.384,P>0.05)。T-SPOT.TB+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=4.370、12.511、5.371,P<0.05)。TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度与T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测比较差异均无统计学意义(χ^(2)=0.000、2.604、3.213,P>0.05)。TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于TB-SAT单独检测(χ^(2)=5.765,P<0.05),与T-SPOT.TB、ADA单独检测比较差异均无统计学意义(χ^(2)=0.782、1.251,P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=6.760、15.755、16.966,P<0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于T-SPOT.TB、TB-SAT、ADA单独检测(χ^(2)=4.370、12.511、5.371,P<0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB+ADA、TB-SAT+ADA联合检测(χ^(2)=4.090、4.990,P<0.05);T-SPOT.TB+ADA联合检测与TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.060,P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著高于T-SPOT.TB+ADA联合检测(χ^(2)=4.371,P<0.05);TB-SAT+ADA联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度与T-SPOT.TB+TB-SAT、T-SPOT.TB+ADA联合检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.780、1.490,P>0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度与T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.210,P>0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的灵敏度显著高于T-SPOT.TB+ADA、TB-SAT+ADA联合检测(χ^(2)=5.750、6.760,P<0.05)。T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度显著低于T-SPOT.TB+TB-SAT联合检测(χ^(2)=4.370,P<0.05);T-SPOT.TB+TB-SAT+ADA三者联合检测诊断结核性胸腔积液的特异度与T-SPOT.TB+ADA、TB-SAT+ADA联合检测比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.000、1.490,P>0.05)。结论联合检测较单一检测诊断结核性胸腔积液效果理想,外周血T-SPOT.TB联合胸腔积液TB-SAT诊断结核性胸腔积液的总体效能最好。联合检测能有效降低漏诊率和误诊率,对结核性胸腔积液具有较高的临床应用价值。

结核/非结核分枝杆菌核酸检测对结核性脑膜炎的诊断价值

目的探讨脑脊液中结核/非结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis/nontuberculous mycobacteria,MTB/NTM)核酸检测诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的临床价值。方法收集120例TBM患者的临床资料,采用随机数字表法将患者分为TBM A组(n=67,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测)和TBM B组(n=53,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测),另收集其他中枢神经系统感染患者脑脊液18例为对照组(C组,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测、GeneXpert MTB/RIF检测)。结果TBM A组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测阳性率分别为13.43%(9/67)、10.45%(7/67)、46.27%(31/67);TBM B组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为15.09%(8/53)、11.32%(6/53)、47.17%(25/53),GeneXpert MTB/RIF检测阳性病例中利福平耐药基因检测阳性2例。C组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测和GeneXpert MTB/RIF检测均为阴性。结论MTB/NTM核酸检测与GeneXpert MTB/RIF检测均可辅助早期诊断TBM,相较于后者更经济,并能鉴别非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)感染,及时减少NTM病误诊、误治,值得临床推广。

SPOT.TB联合结核分枝杆菌核酸(PCR-荧光探针法)检测对诊断APTB的临床意义

探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)联合结核分枝杆菌核酸(PCR-荧光探针法)检测对活动性肺结核患者的诊断效能。方法 以2020年1月至2021年6月在我院同时检测了T-SPOT.TB及结核分枝杆菌核酸的129例活动性肺结核(APTB)患者为实验组,同期检测了这两个项目的44例肺部感染患者为对照组,分别计算这两个项目的检测结果在两组患者中的敏感度(真阳性率)与特异度(真阴性率)及其联合检测的敏感度与特异度。结果 以肺部感染患者为对照组,T-SPOT.TB诊断活动性肺结核的敏感度为83.72%(108/108+21),特异度为84.09%(37/7+37),阳性预测值为93.91%(108/108+7),阴性预测值为63.79%(37/21+37),准确度为83.82%(108+37/129+44);PCR-荧光探针法诊断活动性肺结核的敏感度为84.50%(109/109+20),特异度为100%(44/0+44),阳性预测值为100%(109/109+0),阴性预测值为68.75%(44/20+44),准确度为88.44%(109+44/129+44)。虽然两种检测方法的敏感度无显著性统计学差异(2=0.290,P=0.865),但PCR-荧光探针法的特异度优于T-SPOT.TB(2=8.100,P=0.004)。两者联合检测的敏感性为94.57%(122/122+7),特异性为84.09%(37/7+37),阳性预测值为94.57%(122/122+7),阴性预测值为84.09%(37/7+37),准确度为91.91%(129+37/129+44)。结论 PCR-荧光探针法诊断活动性肺结核患者的特异度优于T-SPOT.TB,两者联合检测,有助于临床尽早识别活动性肺结核患者。

4种实验室检测技术对肺外结核病成人患者非呼吸道标本中结核分枝杆菌检出率对比观察

目的 对比观察结核菌荧光染色、环介导等温扩增技术(LAMP)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)、全自动分枝杆菌液体培养检测技术(BACTEC MGIT 960)诊断成人肺外结核病非呼吸道标本结核分枝杆菌(MTB)的效能。方法 收集2019年1月—2021年12月确诊为肺外结核病患者的非呼吸道标本317例份(组织155例份、尿液52例份、胸水47例份、脓液41例份、脑脊液22例份),分别采用荧光染色、LAMP、BACTEC MGIT 960、Xpert MTB/RIF检测,比较各检测技术检测同一种非呼吸道标本的MTB检出率。结果 LAMP、Xpert MTB/RIF、BACTEC MGIT 960、荧光染色的MTB检出率分别为72.6%、70.3%、48.3%、22.7%。在组织标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率最高,其次为BACTEC MGIT960,荧光染色检出率最低;在尿液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率最高,其次为BACTEC MGIT 960和荧光染色;在胸水标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率较高,其次为BACTEC MGIT 960,荧光染色最低;在脓液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率较高,其次为BACTEC MGIT960,荧光染色最低;在脑脊液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP、Xpert MTB/RIF和BACTEC MGIT 960检出率较高,荧光染色最低。245例荧光染色阴性的标本中,LAMP、BACTEC MGIT 960和Xpert MTB/RIF的MTB检出率分别为66.1%、39.2%和63.7%,LAMP和Xpert MTB/RIF在涂阴标本中的检出率差异无统计学意义,但均高于BACTEC MGIT 960(P均<0.05)。126例标本为Xpert MTB/RIF和BACTEC MGIT 960同时阳性,两种方法检测利福平耐药性统计分析发现,Kappa值为0.829,P<0.05。结论 LAMP和Xpert MTB/RIF诊断人肺外结核病非呼吸道标本MTB灵敏度和特异度高,同时具有检测速度快的优势;荧光染色特异度高,但灵敏度低;BACTEC MGIT 960和Xpert MTB/RIF对利福平药敏的一致性强,但培养时间长,后续能得到药物种类多,对临床治疗在药物选择性上高。

结核分枝杆菌膜囊泡RNA表达谱分析及功能研究

目的 描绘结核分枝杆菌膜囊泡(mycobacterium tuberculosis membrane vesicles,MVs)的RNA特征表达谱,分析其主要的生物功能,初步探索其诱导巨噬细胞凋亡的作用。方法 分离结核分枝杆菌MVs,提取总RNA,采用illumina Hiseq 2500-SE50平台进行双端测序。使用BWA软件进行序列比对,通过COG数据库对基因进行功能注释。通过MTT试验检测细胞存活率,采用Annexin-V联合PI染色法检测细胞凋亡。结果 本研究通过RNA测序及生物信息学分析描绘了结核分枝杆菌MVs中RNA的种类及含量,COG数据库功能注释结果显示这些RNA主要富集的生物学功能包括脂质转运代谢、氨基酸转运代谢、能量产生与转化、次级代谢物合成转运与代谢和转录等。生物分析显示富集的主要功能包括脂质转运代谢、氨基酸转运代谢、能量产生与转化、次级代谢物合成转运与代谢和转录等。功能实验表明,结核分枝杆菌MVs可以降低THP-1源巨噬细胞的存活率,促进细胞凋亡。结论 结核分枝杆菌MVs中含有丰富的短片段RNA,具有诱发细胞凋亡的作用。然而其具体作用机制仍需要更深入细致的研究。

结核分枝杆菌DNA检测在结核病中的诊断价值

目的研究结核分枝杆菌(MTB)DNA检测在结核病中的诊断价值。方法选取2021年10月至2022年9月南郑区人民医院收治的102例结核病患者为研究组,另取同期67例其他肺部疾病患者作为对照组。以双盲实验法采集所有患者的痰液标本,以实时荧光定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测所有患者痰液中MTB DNA,以Xpert MTB/RIF检测实施验证性诊断。将细菌学培养结果作为金标准,比较不同检测方式对结核病的诊断效能;比较不同检测方式对肺结核及肺外结核的检出情况;比较不同检测方式对不同类型肺结核的检出情况。结果MTB DNA检测共检出结核病87例,其中3例误诊,18例漏诊;Xpert MTB/RIF检测共检出结核病62例,其中2例误诊,42例漏诊。MTB DNA检测诊断结核病的灵敏度、准确度及阴性预测值高于Xpert MTB/RIF检测(P<0.05);MTB DNA检测、Xpert MTB/RIF检测诊断结核病的特异度及阳性预测值无显著差异(P>0.05)。MTB DNA检测的肺结核检出率、肺外结核检出率高于Xpert MTB/RIF检测(P<0.05)。MTB DNA检测的继发性肺结核检出率高于Xpert MTB/RIF检测(P<0.05)。结论MTB DNA检测对结核病的诊断效能较佳,对肺结核或肺外结核的诊断价值均优于Xpert MTB/RIF检测,值得推广。

结核分枝杆菌游离DNA检测在肺外结核诊断中的价值

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)游离DNA(cfDNA)检测技术在肺外结核诊断中的应用价值。方法选取2021年7月至2022年12月该院收治的高度疑似肺外结核患者266例作为研究对象,根据临床诊断结果,分为肺外结核组117例和非结核组149例。所有患者均采集脑脊液、胸腔积液、尿液及血液标本,并同时进行MTB cfDNA检测、结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测(GeneXpert MTB/RIF)、涂片抗酸染色及血液标本结核感染T细胞γ干扰素释放试验(TB-IGRA)。通过分析4种检测方法的效能指标评估MTB cfDNA检测技术在肺外结核病诊断中的临床价值。结果MTB cfDNA检测法对脑脊液、胸腔积液、尿液中MTB的检出率均显著高于涂片抗酸染色(χ^(2)=5.714、9.289、9.226,P=0.017、0.002、0.002)。虽然MTB cfDNA检测法对脑脊液、尿液中MTB的检出率高于GeneXpert MTB/RIF,但差异无统计学意义(χ^(2)=0.143,P=0.705;χ^(2)=0.648,P=0.421);MTB cfDNA检测法对胸腔积液中MTB的检出率显著高于GeneXpert MTB/RIF(χ^(2)=4.222,P=0.040)。在肺外结核组,MTB cfDNA检测法的MTB检出率为26.50%(31/117),显著高于GeneXpert MTB/RIF[15.38%(18/117)]和涂片抗酸染色[3.42%(4/117)],差异均有统计学意义(χ^(2)=4.362,P=0.037;χ^(2)=24.492,P<0.05);而TB-IGRA的MTB检出率为72.65%(85/117),显著高于MTB cfDNA检测(χ^(2)=49.850,P<0.001)。MTB cfDNA检测法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为26.50%、100.00%、100.00%、63.40%,其灵敏度显著高于GeneXpert MTB/RIF(15.38%)和涂片抗酸染色(3.42%),但低于TB-IGRA(72.65%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较高的灵敏度及特异度,故MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较好的应用前景。

以肺泡灌洗液行结核/非结核分枝杆菌检测对菌阴肺结核的诊断价值

目的评估取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行结核/非结核分枝杆菌(MTB/NTM)检测对菌阴肺结核的诊断价值。方法收集临床诊断为菌阴肺结核的324例患者资料,对上述患者进行支气管镜检查,所有患者取BALF标本,根据检测方法分为MTB/NTM组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、MTB/NTB检测)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、GeneXpert MTB/RIF检测)、结核分枝杆菌环介导等温扩增技术(TBLAMP)组(进行罗氏培养、涂片抗酸染色、TB-LAMP检测)。结果MTB/NTM组罗氏培养、涂片抗酸染色、MTB/NTM检测阳性率分别为14.04%、1.75%、43.86%;GeneXpert MTB/RIF组罗氏培养、涂片抗酸染色、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为16.77%、3.73%、54.66%;TB-LAMP组罗氏培养、涂片抗酸染色、TB-LAMP检测阳性率分别为18.87%、4.72%、49.06%。MTB/NTM、GeneXpert MTB/RIF、TB-LAMP检测分别与罗氏培养、涂片抗酸染色阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。MTB/NTM检测与GeneXpert MTB/RIF检测、TB-LAMP检测比较,差异无统计学意义(χ^(2)=2.185,P=0.335)。结论MTB/NTM检测具有较好诊断效能,相对简单、快捷,相较于TB-LAMP检测、GeneXpert检测更经济,并能鉴别NTM,及时减少NTM病患者误诊后使用结核药引起身体损害及经济损失。

核酸基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在结核病和非结核分枝杆菌病诊断中的临床应用专家共识

核酸基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术在结核病与非结核分枝杆菌病病原学和耐药性诊断中的应用越来越多,为早期诊断、鉴别诊断和耐药鉴定提供了快速、准确的依据。然而,在实际应用中,临床医生对标本的选择、留取、送检时机及注意事项、报告结果的解读等的理解和掌握参差不齐,尚需规范化。本共识总结了核酸MALDI-TOF MS检测技术应用于结核病和非结核分枝杆菌病诊断的临床适应证和标本采集注意事项,介绍了如何正确解读核酸MALDI-TOF MS技术鉴定分枝杆菌菌种和耐药性的报告结果,以进一步规范核酸MALDI-TOF MS技术在结核病和非结核分枝杆菌病诊断中的临床应用,提高临床诊断水平,指导临床开展早期精准有效的治疗。

核酸适配体荧光探针法和液基夹层杯法检测结核分枝杆菌临床应用价值比较

目的 比较核酸适配体荧光探针法和液基夹层杯法检测结核分枝杆菌(MTB)的临床应用价值。方法 采集175例肺结核患者和80名健康体检者的痰液样本,分别采用液体培养法、固体培养法、抗酸染色镜检法、液基夹层杯法、核酸适配体荧光探针法检测MTB。以液体培养法结果为标准,评价核酸适配体荧光探针法、液基夹层杯法与液体培养法结果的一致性。结果 与液体培养法结果比较,液基夹层杯法的敏感性为78.08%、特异性为98.04%;核酸适配体荧光探针法的敏感性为54.79%、特异性为50.98%。结论 液基夹层杯法与液体培养法一致性较好,具有较好的临床诊断价值;核酸适配体荧光探针法性能尚需优化。

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测及结核感染T细胞检测在肺结核诊断中的应用价值

目的探讨不同检测方法在肺结核诊断中的应用价值。方法回顾性选取2022年1月至12月简阳市人民医院收治的呼吸系统疾病患者272例,依据最终临床诊断分为肺结核组145例,非结核肺病组127例。所有患者均采集痰液、肺泡灌洗液、全血样本,进行涂片抗酸染色、结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)、外周全血γ-干扰素释放试验检测(TB-IGRA),比较3种方法的诊断价值。结果272例患者中,痰涂片阳性37例(13.6%),Xpert MTB/RIF阳性122例(44.8%),TB-IGRA阳性158例(58.1%)。痰涂片、Xpert MTB/RIF、TB-IGRA检测的敏感度分别是25.5%、82.1%、77.2%;特异度分别是100%,97.6%,63.8%;Kappa系数分别为0.242、0.788、0.413。Xpert MTB/RIF检测中利福平耐药基因突变结果显示,有6例患者利福平耐药,rpoB基因突变主要是ProbeE突变和ProbeA、B联合突变。结论在3种检测方法中,Xpert MTB/RIF检测在诊断肺结核中诊断价值最高,可以为临床提供较好的参考价值。

交叉引物恒温扩增技术快速检测结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌系统的建立

目的:建立一种快速检测结核分枝杆菌复合群(MTBC)和非结核分枝杆菌(NTM)的分子交叉引物恒温扩增技术(CPA)检测系统。方法:针对分枝杆菌高度保守的16S rRNA基因序列设计6套CPA引物和3个探针。以含16S rRNA基因序列质粒(浓度为1000拷贝/μl)为阳性模板,筛选确立最佳引物探针组合,并对建立的最佳反应体系进行敏感度、特异度和包容性分析。收集福建省龙岩市第二医院2022年2月8日至2023年3月14日具有肺结核症状或体征的125例疑似肺结核患者的标本,采用分枝杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)和建立的CPA法对收集到的标本进行检测,并对两种方法间的检测结果一致性进行统计分析,采用Kappa值评估。Kappa值≥0.75,说明一致性好。结果:筛选出MTBC/NTM-16S-6引物和MTBC/NTM-16S-LR-FAM-3为分枝杆菌检测系统最佳引物探针组合,检测体系最低检测限为100拷贝/μl,检测时间为40 min,能检出MTBC和临床常见NTM,且与常见呼吸道细菌无交叉反应。与实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法相比,阳性预测值为95.65%(66/69),阴性预测值为85.71%(48/56),符合率为91.20%(114/125),Kappa值为0.82。结论:成功建立了一种基于CPA技术的快速检测MTBC和NTM的检测系统,能够为基层医院结核病疫情防控提供一种新的检测方法。

两种结核分枝杆菌氟喹诺酮类药物耐药性检测方法比较及不一致原因初探

目的:评估荧光PCR熔解曲线法(简称“熔解曲线法”)对结核分枝杆菌氟喹诺酮类药物(FQs)耐药性的诊断价值,分析其与表型药物敏感性(简称“药敏”)试验结果不一致的原因。方法:采用简单随机抽样的方法,随机选取2019年1月至2020年6月期间来自重庆市39个区(县)经菌种鉴定和比例法药敏试验确定为耐多药结核病的126例患者的临床分离株,分别采用微量肉汤稀释法和熔解曲线法对左氧氟沙星(Lfx)和莫西沙星(Mfx)进行表型药敏及分子药敏试验。以表型药敏试验结果为标准,评价熔解曲线法对FQs耐药的检测效能,并采用全基因组测序(WGS)对表型药敏和分子药敏试验不一致的结果进行分析。结果:以表型药敏试验结果为标准,熔解曲线法对FQs耐药检测的敏感度和特异度分别为94.5%(86/91;95%CI:87.1%~98.0%)和100.0%(35/35;95%CI:87.7%~100.0%)。两种方法结果不一致者有12株,不一致率为9.5%(12/126)。表型药敏试验耐药而熔解曲线法敏感者5株,WGS显示2株未见gyrA耐药基因相关突变,2株存在gyrB基因突变(该4株菌的最低抑菌浓度值,Lfx为1~2μg/ml,Mfx均为0.5μg/ml),1株发现gyrA基因Asp94Ala突变,突变频率为15.3%。表型药敏试验敏感而熔解曲线法耐药7株,其中5株发现gyrA基因Ala90Val突变,1株发现gyrA基因Asp94Ala突变,1株发现gyrA基因Asp94Asn突变,该7株菌对Lfx和Mfx的最低抑菌浓度范围分别为1~2μg/ml和0.25~0.5μg/ml。结论:熔解曲线法对FQs耐药的检测效能较好,FQs异质性耐药菌的比例及低水平耐药相关突变是影响FQs熔解曲线法检测效能及导致其与表型药敏试验结果不一致的主要原因。

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究

目的评估利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)对结核病及利福平耐药性的检测效能。方法选取588例初诊患者痰标本,分别进行涂片镜检、固体培养、传统比例法药敏试验和XpertMtb/RIF检测,分析Xpert Mtb/RIF方法检测痰标本中Mtb及其耐药性的敏感度和特异度。结果以固体培养试验结果作为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测痰标本Mtb的敏感度和特异度为95.0%(345/363)和89.6%(147/164),以传统比例法药敏试验结果为金标准,Xpert Mtb/RIF方法检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为89.1%(41/46)和96.3%(289/300)。结论Xpert Mtb/RIF检测敏感度和特异度较高,在Mtb及其利福平耐药快速检测方面具有比较好的应用前景。

结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法临床应用价值

目的评价结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测方法的临床应用价值。方法应用实时荧光PCR技术对420例标本进行临床试验研究,并与抗酸杆菌涂片和分枝杆菌培养方法对照比较。结果结核分枝杆菌核酸检测灵敏度为48.5%(其中菌阳标本灵敏度为95.8%,菌阴标本灵敏度为14.5%),特异度99.3%,阳性预测值为99.1%,阴性预测值为55.5%;临床试验388例痰标本中检测出1例非结核分枝杆菌核酸阳性,经测序确认,准确率100%;同时对32例非结核分枝杆菌临床分离株进行核酸检测,并经测序确认,准确率100%。结论应用实时荧光PCR技术,能实现在1支管内同时进行结核分枝杆菌/非结核分枝杆菌的核酸检测。该方法具有简单快速、特异性好污染性少的特点。可作为实验室辅助检测结核/非结核分枝杆菌核酸方法之一。

结核分枝杆菌及利福平耐药核酸扩增检测成本分析

目的比较固体培养、比例法药敏和结核分枝杆菌及利福平耐药核酸扩增（XpertMtb／RIF）（简称“Xpert”）检测在中国基层实验室应用的检测成本。方法选取4个县（区）级结核病防治机构收集3次固体培养和Xpert检测成本数据，2个省参比实验室收集3次对硝基苯甲酸（PNB）菌群鉴定和比例法利福平药敏试验成本数据。采用要素法计算每种方法单位检测成本，计算每例患者不同检测方法的检测成本。在不同结核病患病率人群中，以固体培养试验为金标准，比较Xpert检测在不同检测效能下检出1例结核病患者的成本。在不同利福平耐药率的可疑人群中，以传统药敏试验为金标准，比较Xpert检测在不同检测效能下检出1例利福平耐药结核病患者的成本。调整Xpert检测设备和试剂价格后，分析Xpert检测的单位成本。结果固体培养、菌群鉴定、利福平药敏试验和Xpert检测的单位检测成本分别为47．87、46．73、82．86和118．62元。传统方法检测每例结核病患者所需成本（2份培养，1份传代，1份PNB鉴定试验）为172．57元。传统方法检测每例耐药结核病患者的平均成本（2份固体培养，1份传代，1份PNB鉴定及药敏试验）为208．84元。当Xpert检测结核病或利福平耐药特异度为85％时，如果检测敏感度大于70％，在结核病患病率或利福平耐药结核病患病率1％～70％的任何人群中，Xpert检出1例结核病或利福平耐药结核病患者的成本均低于传统方法。试剂价格变化对于检测成本的影响远远大于设备价格变化的影响。结论Xpert检测是一种比传统方法更经济并快速的检测方法，适合在中国基层实验室推广。

结核分枝杆菌核酸检测在矽肺结核患者中的应用价值

目的评价核酸检测法在矽肺结核患者中的临床应用价值。方法选取2015年112月在北京京煤集团总医院尘肺与结核病科住院的165例诊断为矽肺结核患者作为病例组；以同时期住院的90例矽肺患者作为对照组。留取研究对象痰标本用于检测。分别应用痰涂片显微镜检法、固体培养法和核酸检测法对研究对象的痰液标本进行检测，并对检测结果进行比较。结果以固体培养检测结果作为标准，核酸检测法检测病例组的敏感度为94．7％（36／38），特异度为81．1％（103／127），阳性预测值为60．0％（36／60），阴性预测值为98．1％（103／105）；以痰涂片法为标准，核酸检测法检测病例组的阳性预测值为55．0％（33／60），阴性预测值为i00．0Voo（105／105），敏感度为100．0％（33／33），特异度为79．5％（105／132）。与固体培养法和痰涂片法为标准，核酸检测法检测对照组的特异度均为96．7％（87／90）。病例组中，核酸检测法检测阳性率为36．4％（60／165），高于固体培养法的23．O％（38／165）和痰涂片法的20．O％（33／165），差异有统计学意义（X2=12．85，P〈0．05）；对照组中，核酸检测法检测阳性率为3．3％（3／90），其他方法检测阳性率为0．0％。结论在矽肺结核患者中，核酸检测对Mtb有较高的敏感度和特异度，对Mtb快速检测及辅助诊断具有较高的临床应用价值。

荧光定量聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液中结核分枝杆菌脱氧核糖核酸诊断肺结核的价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(TbDNA)诊断肺结核的临床价值。方法选取51例肺结核患者作为肺结核组,另选60例非肺结核患者作为对照组。所有患者均完善BALF TbDNA检测及毛刷涂片抗酸染色镜检、痰涂片抗酸染色镜检。以评价BALF中TbDNA检测对诊断肺结核的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。结果荧光定量PCR检测BALF中的TbDNA,其阳性对肺结核诊断的敏感性、特异性、PPV、NPV分别为74.51%、96.67%、95.00%、81.69%,肺结核组毛刷涂片抗酸染色镜检的敏感性为13.73%,痰涂片抗酸染色镜检敏感性为15.69%。对照组中,荧光定量PCR检测BALF中的TbDNA的特异性为96.67%,毛刷涂片抗酸染色镜检及痰涂片抗酸染色镜检的特异性均为100.00%。肺结核组荧光定量PCR检测BALF中的TbDNA与痰涂片抗酸染色镜检及毛刷涂片抗酸染色镜检敏感性比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组荧光定量PCR检测BALF中的TbDNA与毛刷涂片抗酸染色镜检及痰涂片抗酸染色镜检的特异性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论荧光定量PCR检测BALF中的TbDNA有良好的特异性和敏感性,有望辅助传统的检查来早期诊断肺结核。

牛结核分枝杆菌特异性核酸探针的克隆与分析

牛结核分枝杆菌是引占结核病的致病源，其染色体ＤＮＡ中含有插入序列ＩＳ１０８１，属于结核杆菌类特异性基因片段，在牛结核杆菌染色体中含有６个拷贝。目前国外普遍有杉该片段作为探针对牛结核病进行鉴定和诊断。本试验采用牛结核分枝杆菌染色体Ｄ避的特民插入片段即ＩＳ１０８１为模闰于ＩＳ１０８１中４３８－４５９和６６４－６８５碱基 的两个片段为引物。利用ＰＣＲ技术扩增出一段２４８ｂｐ的特异性片段。