结核菌培养联合结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核诊断效能的研究

目的探究结核菌培养联合结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核的诊断效能。方法选取2021年9月至2022年9月阳江市公共卫生医院收治的188例疑似菌阴肺结核患者,均进行结核菌培养、结核分枝杆菌-DNA检测。以组织培养及病理检查为“金标准”。比较结核菌培养、结核分枝杆菌-DNA检测单独检测、联合检测菌阴肺结核的诊断结果以及诊断效能。结果188例疑似菌阴肺结核患者中132例确诊为阳性,结核菌培养检测检出阳性115例,阴性73例;结核分枝杆菌-DNA检测检出阳性107例,阴性81例;联合检测检出阳性134例,阴性54例。结核菌培养联合结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核的灵敏度、阴性预测值、准确率(91.67%、79.63%、87.23%)高于结核菌培养检测(78.79%、61.64%、79.26%)、结核分枝杆菌-DNA检测(75.00%、59.26%、78.19%),差异有统计学意义(P<0.05)。结核菌培养联合结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核的特异度、阳性预测值(76.79%、90.30%)与结核菌培养检测(80.36%、90.43%)、结核分枝杆菌-DNA检测(85.71%、92.52%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论结核菌培养联合结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核进行诊断,有利于提升诊断灵敏度、阴性预测值、准确率,诊断效能较高。

肺组织结核菌培养和结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核患者的诊断价值

目的:探讨肺组织结核菌培养、结核分枝杆菌-DNA(TB-DNA)检测在菌阴肺结核诊断中的应用价值。方法:选取南宁市第四人民医院2015年9月—2020年1月收治的68例疑似菌阴肺结核患者作为研究对象,所有患者采用全胸腔镜或胸腔镜辅助小切口行肺切除术,将手术切除的肺病灶组织浸泡在福尔马林溶液中固定,取部分组织进行肺组织结核菌培养和TB-DNA检测,剩余肺病灶组织进行病理检查。同时对患者痰液样本进行痰涂片检查。以病理检查结果为金标准,比较单独采用肺组织结核菌培养、TB-DNA检测及二者联合检测对菌阴肺结核的诊断价值。结果:68例患者痰涂片及病理检查诊断结果显示,菌阴肺结核42例,肺部其他疾病26例。肺组织结核菌培养检出菌阴肺结核与痰涂片及病理检查诊断一致性较高(Kappa=0.646,P<0.05),TB-DNA检测检出菌阴肺结核与痰涂片及病理检查诊断中度一致(Kappa=0.529,P<0.05),肺组织结核菌培养联合TB-DNA检测检出菌阴肺结核与痰涂片及病理检查诊断一致性极好(Kappa=0.816,P<0.05)。肺组织结核菌培养联合TB-DNA检测诊断菌阴肺结核的敏感度、正确率高于肺组织结核菌培养、TB-DNA单独检测,漏诊率低于肺组织结核菌培养、TB-DNA单独检测,差异有统计学意义(P<0.05);肺组织结核菌培养联合TB-DNA检测诊断菌阴肺结核的特异性、阳性预测值、阴性预测值高于二者单独检测,误诊率低于二者单独检测,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肺组织结核菌培养、TB-DNA检测均是诊断菌阴肺结核的有效指标,且与二者单独检测相比,联合检测的检出率、敏感度和特异性更高。

实时荧光定量聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液中结核分枝杆菌-DNA对肺结核的诊断价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中结核分枝杆菌-DNA(TB-DNA)对肺结核的诊断价值。方法肺结核52例(菌阳20例,菌阴32例),肺炎35例,采用FQ-PCR法检测其支气管肺泡灌洗液中TB-DNA水平。结果52例肺结核组的阳性率为65.4%(菌阳19例,菌阴15例),35例非肺结核组的阳性率为5.7%,经统计学比较,FQ-PCR法检出结核杆菌阳性率显著高于痰涂片抗酸染色和培养法(P均<0.05),FQ-PCR法特异性高。结论FQ-PCR法检测BALF中TB-DNA为痰涂片阴性及无痰患者提供良好的诊断依据。

肺组织结核菌培养、结核分枝杆菌-DNA检测对菌阴肺结核的诊断价值

【目的】探讨肺组织结核菌培养、结核分枝杆菌-DNA(TB-DNA)检测对菌阴肺结核的诊断价值。【方法】选取2015年9月至2020年1月在延安大学附属医院诊治的68例疑似菌阴肺结核患者为研究对象,胸腔镜辅助小切口对患者行肺切除术,根据病理结果将患者分为菌阴肺结核(n=42)和肺部其他疾病(n=26)。对所有患者肺病灶组织均行肺组织结核菌培养、TB-DNA检测,分析两种方法及二者联合对菌阴肺结核的诊断价值。【结果】肺组织结核菌培养检出菌阴肺结核与病理诊断一致性较高(Kappa=0.670),TB-DNA检测检出菌阴肺结核与病理诊断中度一致(Kappa=0.529),肺组织结核菌培养联合TB-DNA检测检出菌阴肺结核与病理诊断一致性极好(Kappa=0.816)。肺组织结核菌培养、TB-DNA检测及二者联合诊断菌阴肺结核的曲线下面积(AUC)分别为0.890(95%CI:0.837~0.943)、0.841(95%CI:0.779~0.902)、0.945(95%CI:0.906~0.983);肺组织结核菌培养联合TB-DNA诊断菌阴肺结核的敏感度、准确度高于TB-DNA检测,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】肺组织结核菌培养、TB-DNA检测均是诊断菌阴肺结核的有效方法,且二者联合的检出率、敏感度和特异性显著高于二者单独检测。

支气管肺泡灌洗液实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌-DNA对肺结核的诊断价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对肺结核患者支气管肺泡灌洗液(BALF)结核分枝杆菌-DNA(TB-DNA)检出的临床意义。方法肺结核病122例,采用FQ-PCR对其BALF中TB-DNA进行检测,并与痰涂片法、痰FQ-PCR法和BALF沉淀涂片法作比较分析。结果 122例肺结核患者BALF中FQ-PCR法阳性率72.9%(涂阳19例、涂阴70例),与痰涂片(15.6%)、痰FQ-PCR(39.3%)和BALF沉淀涂片(31.1%)比较,具有显著性差异(P<0.05)。结论 FQ-PCR对BALF中TB-DNA的检测具有敏感度高、特异性强等特点,对结核病的确诊率高于常规方法,在痰涂阴和不典型结核患者的诊断方面提供了良好的依据。

四川省2022年入学新生结核分枝杆菌潜伏感染与肺结核患病情况分析

目的:对2022年四川省入学新生结核病体检情况进行汇总和分析,了解全省入学新生结核分枝杆菌潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)与结核病患病情况,为学校新生入学结核病检查工作开展提供理论依据。方法:从四川省学籍管理系统中获得2022年全省各级各类学校入学新生基本信息,制作《2022年秋季新生入学结核病体检信息表》,建立数据库,采用描述性统计分析方法,分析新生入学结核病检查中结核病患者及LTBI者检出情况及其流行病学特征,追踪LTBI者接受预防性治疗及完成情况。结果:2022年四川省各级各类学校入学新生2787900名规范开展结核病体检,占全部新生的97.69%(2787900/2853817),发现活动性肺结核患者247例,检出率为8.86/10万(247/2787900)。其中,女性患病率为10.11/10万(145/1434131),高于男性[7.18/10万(102/1419686)],差异有统计学意义(χ^(2)=7.058,P<0.01)。四川省1790830名入学新生开展了LTBI检测,感染率为3.09%(55313/1790830)。符合预防性治疗条件的单纯结核菌素皮肤试验强阳性/重组结核分枝杆菌融合蛋白(EC)或γ-干扰素释放试验阳性者8104例中,13.73%(1113/8104)接受了预防性治疗,925例完成了全疗程,完成治疗率为83.11%,未完成治疗的新生中有2例在治疗期间转为活动性结核病。结论:四川省2022年入学新生体检率高,但LTBI检出率较低,接受预防性治疗率不高。

风湿免疫病患者结核分枝杆菌潜伏感染率及相关影响因素的多中心横断面研究

目的:以结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测作为筛查结核分枝杆菌潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)的工具,调查我国风湿免疫病患者结核分枝杆菌潜伏感染率,并分析影响T-SPOT.TB检测结果的相关因素。方法:纳入自2014年9月至2016年3月我国东、中、西部13家三级甲等综合医院接诊的风湿免疫病患者作为研究对象,共计3715例。应用T-SPOT.TB对研究对象进行LTBI筛查。收集研究对象的基本信息,包括性别、年龄、地区、体质量指数、病程、吸烟史、基础疾病、结核病患者密切接触史、结核病既往史,以及糖皮质激素、免疫抑制剂及生物制剂的使用情况,实验室化验结果,风湿免疫病诊断结果等。采用单因素及多因素logistic回归模型分析影响T-SPOT.TB检测结果的因素。结果:3715例研究对象T-SPOT.TB检测阳性者有672例(18.1%,95%CI:16.9%~19.3%)。不同风湿免疫病病种患者T-SPOT.TB检测阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=79.003,P<0.001),白塞综合征患者检测阳性率最高(44.4%,32/72),混合性结缔组织病患者检测阳性率最低(8.9%,4/45)。男性风湿免疫病患者T-SPOT.TB检测阳性率为23.6%(168/711),明显高于女性(16.8%,504/3004),差异有统计学意义(χ^(2)=18.213,P<0.001)。不同年龄组风湿免疫病患者T-SPOT.TB检测阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=67.189,P<0.001),51~60岁组检测阳性率最高(24.8%,143/577),16~20岁组检测阳性率最低(8.1%,13/160)。多因素logistic回归分析显示:年龄≥41岁(aOR=1.81,95%CI:1.48~2.23),吸烟≥21支/d(aOR=1.66,95%CI:1.15~2.40),有结核病既往史(aOR=3.88,95%CI:2.71~5.57),患白塞综合征(aOR=3.00,95%CI:1.70~5.28)是T-SPOT.TB检测阳性结果的独立相关因素;使用大剂量激素(aOR=0.67,95%CI:0.47~0.96)或生物制剂(aOR=0.55,95%CI:0.36~0.84),淋巴细胞计数偏低(aOR=0.39,95%CI:0.25~0.62),低蛋白血症(aOR=0.72,95%CI:0.52~0.99),以及患多发性肌炎/皮肌炎(aOR=0.54,95%CI:0.29~0.99)、系统性红斑狼疮(aOR=0.75,95%CI:0.57~0.99)是T-SPOT.TB检测阴性结果的独立相关因素。结论:风湿免疫病患者总体结核分枝杆菌潜伏感染率为18.1%,各病种T-SPOT.TB检测阳性率差异明显。当患者有大剂量糖皮质激素、生物制剂的使用,淋巴细胞计数偏低,低蛋白血症,以及罹患系统性红斑狼疮时警惕假阴性结果。

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能分析

目的探讨结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(Xpert)检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能。方法选取河北省胸科医院2021年4月至2022年10月期间行手术治疗的124例肺部空洞疾病患者相关病历资料,其中菌阴空洞肺结核86例(观察组),非结核肺部空洞疾病38例(对照组)。收集患者手术标本Xpert检测和外周血结核感染T细胞斑点(T-SPOT)试验结果,分析二者对菌阴空洞肺结核的诊断效能。结果Xpert检测和T-SPOT试验诊断菌阴空洞肺结核的敏感度为68.6%、75.6%,特异度为97.4%、68.4%。Xpert检测的敏感度低于T-SPOT试验(χ^(2)=5.832,P<0.001),特异度高于T-SPOT试验(χ^(2)=21.469,P<0.001)。2种方法在观察组中的阳性检出率均高于对照组[Xpert检测:68.6%(59/86)比2.6%(1/38);T-SPOT试验:75.6%(65/86)比31.6%(12/38)](均P<0.001)。受试者工作特征曲线分析结果显示,Xpert检测诊断菌阴空洞肺结核的曲线下面积为0.830,T-SPOT试验的曲线下面积为0.729,Xpert检测的准确度高于T-SPOT试验(P<0.001)。结论Xpert检测对菌阴空洞肺结核有比较可靠的诊断效能。

重组结核杆菌融合蛋白在肺结核密切接触者中筛查结核分枝杆菌感染效果分析

目的:探讨重组结核杆菌融合蛋白(recombinant mycobacterium tuberculosis fusion protein,EC)皮肤试验在筛查肺结核患者密切接触者结核分枝杆菌感染中的实用性和有效性,为进一步优化结核感染检测提供技术建议,了解密切接触者结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)现状。方法:2023年10月23日至11月14日在上海市奉贤区和金山区共选取140名肺结核密切接触者作为研究对象,对每名研究对象同时采用γ-干扰素释放试验(IGRA)和EC皮肤试验进行结核感染检测,采用Kappa值检验两种方法结果一致性,采用χ^(2)检验比较两组检测方法之间的差异,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:140名研究对象,包括男性55例,女性85例;IGRA阳性率为15.00%(21/140),EC皮肤试验阳性率为14.29%(20/140),两种试验方法一致性检验Kappa值为0.857,差异无统计学意义(χ^(2)=0.029,P=0.866),两种检测方法检测结果为高度一致性;以IGRA作为结核感染的参考标准,EC皮肤试验的敏感度为85.71%(18/21)、特异度为98.32%(117/119)、阳性预测值为90.00%(18/20)、阴性预测值为97.50%(117/120);男性EC阳性率(32.73%,18/55)明显高于女性(2.35%,2/85),差异有统计学意义(χ^(2)=17.983,P<0.001)。结论:EC皮肤试验具有较强的特异性,可用于肺结核密切接触者结核分枝杆菌感染筛查,但受限于使用年龄和接种禁忌证,可采用IGRA对无法进行EC皮肤试验者进行补充检测。

β-内酰胺酶抑制剂联合不同β-内酰胺类抗生素对耐多药结核分枝杆菌临床菌株体外活性研究

目的体外评估5种β-内酰胺类抗生素和不同β-内酰胺酶抑制剂组合对耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)活性的影响,以期发现针对耐多药结核病最有效的β-内酰胺类抗生素和β-内酰胺酶抑制剂组合。方法选取2021年河南省耐药监测项目收集的MDR-TB菌株,使用最小抑菌浓度(MIC)法测定5种β-内酰胺类抗生素或联合β-内酰胺酶抑制剂对临床MDR-TB的MIC值,并采用聚合酶链式反应(PCR)和DNA测序法分析菌株的bla C突变情况。结果共纳入105株MDR-TB,MIC检测结果显示,多尼培南对MDR-TB抗菌活性最高,其MIC 50值为16μg/mL。与β-内酰胺酶抑制剂联合后,大部分β-内酰胺类抗生素的MIC值明显下降。共有13.33%(14株)的菌株存在bla C基因的突变,主要为3种核苷酸替代突变,分别为AGT333AGG、AAC638ACC、ATC786ATT。BlaC蛋白Ser111Arg和Asn213Thr与同义单核苷酸突变相比,增强了克拉维酸/舒巴坦与美罗培南对MDR-TB的协同作用。结论多尼培南和舒巴坦组合对MDR-TB具有最强的抗菌活性。而BlaC蛋白Ser111Arg和Asn213Thr的替代突变使MDR-TB对美罗培南的敏感性在克拉维酸/舒巴坦协同时增强。

监狱羁押人群中两种结核分枝杆菌潜伏感染检测结果不一致原因及预防性治疗效果分析

目的:分析羁押人群中γ-干扰素释放试验(IGRA)和结核菌素皮肤试验(TST)结果差异的相关因素,以及预防性治疗对肺结核发病的效果。方法:采用社区随机对照试验,选取某市5所监狱,每所监狱以监区为单位分为对照组和干预组。结核分枝杆菌检测于2016年7—8月进行,对照组981例,采用常规结核病防治措施;干预组981例,在常规措施基础上采用IGRA和TST检测结核分枝杆菌潜伏感染,并对IGRA阳性者实施自愿的预防性治疗。收集所有研究对象的流行病学资料,每年定期开展X线胸片检查。分析IGRA和TST结果的一致性及相关因素;对比干预组和对照组3年内肺结核发病情况。结果:IGRA和TST两种方法判读结果一致率为77.93%(745/956)。BCG卡痕(OR=1.477,95%CI:1.068~2.043)是两种检测方法结果差异的相关因素。共计157例IGRA阳性者接受并均完成了预防性治疗,随访3年中发病率为0.00%(0/157),其他未预防性服药者发病率为2.05%(7/342),差异无统计学意义(χ^(2)=3.259,P=0.071);IGRA阴性者中,发病率为0.00%(0/460),低于IGRA阳性未服药者的发病率[2.05%(7/342)],差异有统计学意义(χ^(2)=9.498,P=0.002);最终干预组肺结核发病率为0.71%(7/981),对照组发病率为1.22%(12/981),差异无统计学意义(χ^(2)=1.329,P=0.249)。结论:在羁押人群中,BCG接种史是IGRA和TST差异的主要影响因素;应用IGRA进行结核分枝杆菌潜伏感染检测并对阳性者开展预防性治疗可有效减少狱内肺结核的发病。

4种实验室检测技术对肺外结核病成人患者非呼吸道标本中结核分枝杆菌检出率对比观察

目的 对比观察结核菌荧光染色、环介导等温扩增技术(LAMP)、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)、全自动分枝杆菌液体培养检测技术(BACTEC MGIT 960)诊断成人肺外结核病非呼吸道标本结核分枝杆菌(MTB)的效能。方法 收集2019年1月—2021年12月确诊为肺外结核病患者的非呼吸道标本317例份(组织155例份、尿液52例份、胸水47例份、脓液41例份、脑脊液22例份),分别采用荧光染色、LAMP、BACTEC MGIT 960、Xpert MTB/RIF检测,比较各检测技术检测同一种非呼吸道标本的MTB检出率。结果 LAMP、Xpert MTB/RIF、BACTEC MGIT 960、荧光染色的MTB检出率分别为72.6%、70.3%、48.3%、22.7%。在组织标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率最高,其次为BACTEC MGIT960,荧光染色检出率最低;在尿液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率最高,其次为BACTEC MGIT 960和荧光染色;在胸水标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率较高,其次为BACTEC MGIT 960,荧光染色最低;在脓液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP和Xpert MTB/RIF检出率较高,其次为BACTEC MGIT960,荧光染色最低;在脑脊液标本中的MTB检出率差异具有统计学意义(P均<0.05),表现为LAMP、Xpert MTB/RIF和BACTEC MGIT 960检出率较高,荧光染色最低。245例荧光染色阴性的标本中,LAMP、BACTEC MGIT 960和Xpert MTB/RIF的MTB检出率分别为66.1%、39.2%和63.7%,LAMP和Xpert MTB/RIF在涂阴标本中的检出率差异无统计学意义,但均高于BACTEC MGIT 960(P均<0.05)。126例标本为Xpert MTB/RIF和BACTEC MGIT 960同时阳性,两种方法检测利福平耐药性统计分析发现,Kappa值为0.829,P<0.05。结论 LAMP和Xpert MTB/RIF诊断人肺外结核病非呼吸道标本MTB灵敏度和特异度高,同时具有检测速度快的优势;荧光染色特异度高,但灵敏度低;BACTEC MGIT 960和Xpert MTB/RIF对利福平药敏的一致性强,但培养时间长,后续能得到药物种类多,对临床治疗在药物选择性上高。

切取活检法在皮肤非结核分枝杆菌检测中的应用

目的:明确规范应用切取活检法对提高皮肤NTM病原体检出率的意义。方法:对2021-2024年采用切取活检法进行感染皮肤组织取材临床诊断为非结核分枝杆菌感染的9例患者资料进行回顾性分析,分析内容包括皮肤组织抗酸涂片、组织病理抗酸染色及细菌培养。结果:9例患者中,皮损脓液或皮下组织直接抗酸涂片阳性8例,组织培养6例培养出分枝杆菌,培养阳性率75%,病理抗酸涂片阳性1例。结论:切取活检法可用于皮肤非结核分枝杆菌感染的病原学取材,且取脓液和皮下坏死组织培养阳性检出率更高。

转染miR-223模拟物的巨噬细胞结核分枝杆菌清除能力、凋亡、炎症反应变化及miR-223与NLRP3靶向关系

目的 观察肺结核患者血清微小RNA-223(miR-223)水平变化,以及转染miR-223模拟物的巨噬细胞结核分枝杆菌(MTB)H37Rv清除能力、凋亡、炎症反应变化,并分析miR-223与NLRP3靶向关系。方法 选取37例份活动性肺结核患者血清标本(肺结核组)和同期40例健康体检者血清标本(健康组),采用RT-PCR法检测两组血清标本中miR-223。体外培养人单核细胞株THP-1,经佛波脂刺激24 h后分化为巨噬细胞,将巨噬细胞随机分为健康组、MTB组、MTB+mimics-NC组、MTB+miR-223 mimics组,健康组细胞常规培养,MTB组、MTB+mimics-NC组、MTB+miR-223 mimics组均用MTB标准株H37Rv感染巨噬细胞,感染后MTB+mimics-NC组和MTB+miR-223 mimics组应用脂质体转染法分别将mimics-NC、miR-223 mimics转染至细胞中,采用RT-PCR法检测各组细胞miR-223及NLRP3、TNF-α、IFN-γ mRNA,流式细胞术测算各组细胞凋亡率,菌落形成单位(CFU)计数法检测各组H37Rv细菌负荷量。取对数生长期THP-1细胞,随机分为miR-223 mimics+NLRP3-WT组、mimics-NC+NLRP3-WT组、miR-223mimics+NLRP3-MUT组、mimics-NC+NLRP3-MUT组,用Lipofectamine 2000按照试剂盒说明书操作分别将miR-223mimics和NLRP3-WT、mimics-NC和NLRP3-WT、miR-223 mimics和NLRP3-MUT、mimics-NC和NLRP3-MUT共转染至各组细胞,转染后24 h检测各组细胞的相对荧光素酶活性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-223与NLRP3是否存在靶向关系。结果 与健康组比较,肺结核组血清miR-223表达降低(P<0.05)。与健康组比较,MTB组miR-223表达、细胞凋亡率降低,NLRP3、TNF-α、IFN-γ mRNA表达及H37Rv细菌负荷量升高(P均<0.05);与MTB+mimics-NC组比较,MTB+miR-223 mimics组miR-223表达、细胞凋亡率升高,NLRP3、TNF-α、IFN-γ mRNA表达及H37Rv细菌负荷量降低(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,NLRP3是miR-223的靶向基因。结论 肺结核患者血清miR-223表达降低,转染miR-223模拟物能够促进巨噬细胞凋亡,增强MTB感染的巨噬细胞的除菌能力,减轻炎症反应,其机制可能与靶向调控NLRP3有关。

非结核分枝杆菌肺病的临床病理特征及分子病理诊断

目的 分析非结核分枝杆菌(NTM)肺病的临床病理特征及分子病理诊断,提高病理医生的诊断及鉴别诊断能力。方法 回顾性分析2016年11月至2022年4月首都医科大学附属北京胸科医院收治的57例NTM肺病患者的临床病理资料,光镜下观察组织学形态,行抗酸染色法查找抗酸杆菌,并进一步应用荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术检测结核分枝杆菌(MTB)DNA和探针熔解曲线法进行分枝杆菌菌种鉴定。结果 57例NTM肺病的分枝杆菌菌种鉴定结果:胞内分枝杆菌23例,蟾蜍分枝杆菌14例,堪萨斯分枝杆菌8例,鸟分枝杆菌7例,脓肿分枝杆菌3例,龟分枝杆菌2例。27例手术标本组织学特征主要表现为典型肉芽肿伴坏死13例,不典型肉芽肿伴坏死8例,纤维包裹性坏死3例,支气管扩张2例,非坏死性肉芽肿1例,脓肿分枝杆菌感染灶可见小脓肿形成。57例标本抗酸染色均查找到抗酸杆菌。抗酸杆菌分布在坏死、纤维素样渗出及组织细胞胞质;胞内分枝杆菌较易形成菌团;堪萨斯分枝杆菌可见异型菌。FQ-PCR技术均未检测到MTB DNA。结论 NTM肺病的临床病理学特征表现多样,没有特异性,分子病理技术能够显著提高明确诊断率。

PCR荧光探针技术对结核分枝杆菌复合群及利福平耐药性检测性能的评价

目的:评价PCR荧光探针技术检测痰液样本中结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)和利福平耐药性效果,为进一步开展“结核分枝杆菌复合群及利福平耐药核酸检测试剂盒”多中心临床试验提供可行性研究数据。方法:采用前瞻性研究方法,参照入组标准收集2021年12月至2022年8月上海市3家结核病定点医院肺科门诊就诊的205例初诊疑似肺结核患者的3份痰液样本(即时痰、夜间痰、晨痰),分别进行痰涂片、BACTEC MGIT 960(MGIT 960)、GeneXpert MTB/RIF(Xpert)和PCR荧光探针法检测,评价PCR荧光探针法对痰液样本中MTBC及利福平耐药性的检测效能。另对随机选取同期上海市疾病预防控制中心结核病实验室菌株库中保存的96株MTBC临床菌株(包括利福平表型耐药菌株47株和利福平表型敏感菌株49株)分别进行PCR荧光探针法和Xpert检测利福平耐药性,分析两种检测方法对利福平耐药相关基因突变的检出情况。结果:205例疑似肺结核患者中,PCR荧光探针法对MTBC的检出率为22.44%(46/205),与MGIT 960[21.95%(45/205)]、Xpert[20.98%(43/205)]和痰涂片[16.10%(33/205)]的差异均无统计学意义(χ^(2)=0.014,P=0.904;χ^(2)=0.129,P=0.719;χ^(2)=2.650,P=0.104)。以临床诊断为参照标准,PCR荧光探针法、Xpert、MGIT 960和痰涂片检测MTBC的敏感度(95%CI)分别为48.10%(36.93%~59.56%)、48.10%(36.93%~59.56%)、50.63%(39.23%~61.97%)和40.51%(29.79%~52.15%),特异度(95%CI)分别为93.65%(87.47%~97.12%)、96.03%(90.52%~98.53%)、96.03%(90.52%~98.53%)和99.21%(95.01%~99.96%),一致率分别为76.10%(156/205)、77.56%(159/205)、78.54%(161/205)和76.59%(157/205),Kappa值分别为0.453、0.482、0.507和0.446。PCR荧光探针法检测痰液样本中MTBC的涂阴和极低级别阳性样本的检出率[10.73%(19/177)]与Xpert检测结果[8.47%(15/177)]的差异无统计学意义(χ^(2)=0.793,P=0.373)。PCR荧光探针法在检出MTBC的46份样本中同时检出6份样本发生利福平耐药基因突变,突变率为13.04%(6/46);而Xpert在检出MTBC的43份样本中仅同时检出1份样本发生利福平耐药基因突变,突变率为2.33%(1/43)。在96株临床菌株中,两种分子检测方法均检测到56株菌株发生利福平耐药基因突变,除2株探针突变类型不一致外,其他探针突变类型均一致,且多发生在probe E(529~533)和FAM通道(531/533突变)。结论:以临床诊断为参照标准,PCR荧光探针法检测MTBC的效能与MGIT 960、Xpert和痰涂片基本相当,且与Xpert检测MTBC临床菌株的利福平耐药性效果一致,认为PCR荧光探针法不仅是一种等同于Xpert检测功能的新技术,还具有操作简单、价格低于Xpert、真正实现一体化和全封闭等优势。建议在临床推广过程中进一步优化PCR荧光探针法以提高MTBC检出率,并开展多中心临床试验验证研究。

广州地区利奈唑胺耐药结核分枝杆菌耐药基因特征分析

目的分析广州地区利奈唑胺(linezolid,LZD)耐药结核分枝杆菌临床分离株耐药基因的突变特征,为控制广州地区耐利奈唑胺结核病提供一定的研究基础和依据。方法选取2012年1月~2022年1月广州市胸科医院住院患者的60株利奈唑胺耐药结核分枝杆菌的临床分离株,分为耐多药组和广泛耐药组。采用微孔板稀释法对60株菌株进行利奈唑胺最低抑菌浓度(MIC)检测,并对60株菌株的利奈唑胺耐药基因23S rRNA、rplC、rplD进行测序,分析其突变特征。结果60株LZD耐药株对LZD的MIC值分布于2~32μg/ml之间。耐多药组的MIC50和MIC90分别为2μg/ml、32μg/ml,广泛耐药组的MIC50和MIC90分别为8μg/ml、32μg/ml。60株菌株中发现有12株23S rRNA基因发生突变,其中有1株发生两个基因位点突变;有11株rplC基因发生突变,其中有1株发生双位点突变;发现2株rplD基因发生突变。23S rRNA、rplC基因突变发生率在不同性别和年龄患者中差异无统计学意义(P>0.05)。结论广州地区利奈唑胺耐药结核分枝杆菌耐药基因23S rRNA、rplC突变发生率明显高于rplD,在不同性别和不同年龄患者中的发生率无显著差异。

肺结核患者结核分枝杆菌耐药的影响因素

目的:分析肺结核患者结核分枝杆菌耐药的影响因素。方法:回顾性分析2020年4月至2023年4月于泉州市第一医院就诊的100例肺结核患者的临床资料,采集患者入院24 h内的晨痰行细菌培养和药敏试验,根据结核分枝杆菌是否耐药分为耐药组(n=40)和敏感组(n=60),分析结核分枝杆菌耐药的影响因素。结果:100例肺结核患者中结核分枝杆菌耐药40例,耐药率为40.00%,其中耐多药结核病占80.00%;两组性别、年龄、体质量指数、婚姻、病程、饮酒史、高血压、长期应用糖皮质激素、侵入性操作、病变累及肺叶数比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组居住地、吸烟史、糖尿病、空洞肺结核、复治肺结核情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,居住农村、吸烟、合并糖尿病、空洞肺结核、复治肺结核均为肺结核患者结核分枝杆菌耐药的危险因素(OR>1,P<0.05)。结论:居住农村、吸烟、合并糖尿病、空洞肺结核、复治肺结核均为肺结核患者结核分枝杆菌耐药的危险因素。

国外非结核分枝杆菌医院感染暴发的研究现状:1985—2023年

非结核分枝杆菌在环境中广泛存在,可因医疗用水、器械污染等引起血流、皮肤和软组织感染,并导致感染暴发。本文通过在PubMed检索非结核分枝杆菌暴发事件相关的文献,总结分析1985—2023年国外非结核分枝杆菌医院感染暴发情况,以期为今后非结核分枝杆菌感染防控措施的制定和监管提供参考。

云南省昭通地区结核分枝杆菌临床分离株遗传多样性和耐药分子特征

目的调查云南省昭通地区结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株的遗传多样性和耐药分子特征。方法2022年9月—2023年8月从昆明医科大学附属昭通医院收治的298例涂阳肺结核患者中共采集了MTB 298株,用MeltPro TB测定法通过荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)熔解曲线法鉴定所有分离株。用多色熔解曲线分析技术进行间隔区寡核苷酸分型(interval oligonucleotide typing,Spoligotyping)。用分枝杆菌散布重复单元(mycobcterial interspersed repetitive units,MIRU)-可变数目串联重复序列分型(variable number of tandem repeat typing,VNTR)(MIRU-VNTR)24位点分型法进行基因分型。使用PCR和靶向测序检测耐药基因突变。结果北京菌株占所有MTB菌株的69.80%(208/298)。其他谱系包括T、LAM、MANU2、CAS、NEW-1和SITVITWEB数据库中未发现的孤儿型,分别占5.70%(17/298)、3.36%(10/298)、0.67%(2/298)、0.34%(1/298)、8.39%(25/298)及11.74%(35/298)。北京菌株对左氧氟沙星的耐药率略高于非北京菌株(P=0.042),而北京菌株与非北京菌株2种基因型菌株对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素、吡嗪酰胺、卡那霉素耐药率差异无统计学意义(P>0.05)。MIRU-VNTR 24位点分型分析结果显示,33个菌株可分为13株聚类,其聚类率为39.39%。每个等位基因的Hunter-Gaston指数在0~0.814之间,其中18个位点对非北京菌株具有中高鉴别能力。但只有10个位点对北京菌株具有中高鉴别能力。结论MTB菌株在中国云南省昭通地区表现出较高的遗传多样性,北京菌株是MTB和耐药结核病菌株的优势谱系。