2型糖尿病合并肺结核患者空腹血糖水平与痰涂片、T-SPOT.TB结果的关系及结核分枝杆菌rpoB基因检测临床意义

目的探究2型糖尿病(type 2 diabetes nephropathys,T2DM)合并肺结核患者空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)水平与痰涂片、结核分枝杆菌T细胞斑点实验(T-cell spot test for tuberculosis infection,T-SPOT.TB)结果的关系及结核分枝杆菌rpoB基因检测的临床意义。方法选取2022年1月—2023年1月昆明市第三人民医院收治102例T2DM合并肺结核患者作为研究组,另选同期在我院治疗的102例单纯肺结核患者作为对照组。比较2组临床资料、痰涂片和T-SPOT.TB检查结果,并对研究组不同FPG水平患者痰涂片阳性率、T-SPOT.TB阳性率进行比较,分析痰涂片阳性率、T-SPOT.TB阳性率与患者FPG水平的相关性。对2组进行结核分枝杆菌培养,分离利福平(rifampicin,RFP)耐药菌株和敏感菌株,比较2组2种菌株rpoB基因检测结果。结果研究组咳嗽、呼吸困难、厌食、盗汗、胸痛、咯血、发热发生率、痰涂片阳性率、T-SPOT.TB阳性率均高于对照组(P均<0.05)。不同FPG水平患者痰涂片阳性率比较,差异具有统计学意义(P=0.003);T-SPOT.TB阳性率比较,差异无统计学意义(P=0.262);痰涂片阳性率与T2DM合并肺结核患者FPG水平呈正相关(rs=0.386,P=0.015),T-SPOT.TB阳性率与FPG水平无明显相关性(rs=0.127,P=0.326)。研究组RFP耐药菌株多于对照组,研究组RFP耐药菌株rpoB基因突变率高于RFP敏感菌株(P均<0.05)。结论T2DM合并肺结核患者FPG水平与痰涂片结果呈正相关,但与T-SPOT.TB结果无相关性。与单纯肺结核患者相比,T2DM合并肺结核患者更易感染耐药株。通过检测耐药基因rpoB,可快速识别检测结核分枝杆菌对RFP耐药性,为临床治疗提供科学指导。

结核分枝杆菌蛋白TB9.7间接ELISA方法的建立

为获得新的鉴别诊断结核杆菌感染的候选抗原,根据Gene Bank中登录的结核杆菌H37Rv的TB 9.7基因序列设计1对引物,以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增得到TB 9.7基因DNA片段。将该扩增片段克隆于PMD18-T载体中,得到载体PMD18-T-TB9.7。分别将pET32a质粒和PMD18-T-TB 9.7质粒用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,并将纯化的TB 9.7基因亚克隆至pET32a中,获得重组表达质粒pET32a-TB 9.7。将其转化E.coli BL21 IPTG诱导后,经SDS-PAGE、Western blot分析鉴定,可见约30ku的外源蛋白带。表明TB9.7基因在大肠杆菌中得到了表达。用Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的TB9.7融合蛋白,建立间接ELISA诊断方法,检测了30份结核病人的痰检阳性血清,120份健康人的血清,敏感性为56.6%,特异性为97%,与痰检结果的符合率为84%。

T-SPOT.TB法在肺结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨结核感染T细胞检测(T-SPOT.TB)法在肺结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法回顾性分析临床确诊的75例肺结核患者的临床资料。入院时取患者静脉血,采用T-SPOT.TB法检测结核分枝杆菌,并行结核菌素皮肤试验(TST)。比较T-SPOT.TB法、TST法检测结核分枝杆菌的敏感性、特异性,比较两种方法检测结核分枝杆菌的阳性率。结果 T-SPOT.TB法检测肺结核患者结核分枝杆菌的敏感性、特异性分别为84.3%(70/83)、72.9%(27/37)。TST法检测肺结核患者结核分枝杆菌的敏感性、特异性分别为79.8%(67/84)、77.8%(28/36)。采用T-SPOT.TB法、TST法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为93.3%(70/75)、86.7%(65/75),T-SPOT.TB法检测的阳性率高于TST法(P<0.01)。结论 T-SPOT.TB法检测肺结核分枝杆菌的敏感性、特异性均较高,检出率高,是一种较可靠的肺结核分枝杆菌检测方法。

对《关于BCG—PPD与TB—PPD在结核分枝杆菌感染、结核病筛查结果差异的相关意见》一文的几点说明

一项研究不论是项目设计、实施过程还是研究结果及最后形成的论文，很难做到十全十美。只要作者详实、客观地报告研究内容，都会对其他人具有借鉴意义。笔者非常感谢卢锦标等对《BCG-PPD与TB-PPD皮肤试验在大学生结核病筛查中的差异性分析》一文的关注，由于个人工作环境的差异、看问题角度的不同，对于相同的文章自然会有不同的见解和看法。笔者对文中提到的几点意见说明如下。

结核分枝杆菌TB—SA抗体检测在结核病诊断中价值的研究

目的研究结核分枝杆菌TB—SA抗体检测在结核病诊断中的价值。方法对1232例结核病、非结核病的其他呼吸系统疾患患者及健康志愿者同日寸进行抗酸杆菌涂片、培养、PPD皮试及结核分枝杆菌TB—SA抗体检测。结果①结核分枝杆菌TB—SA抗体检测菌阳肺结核的敏感性为75．1％；菌阴肺结核的敏感性为68．9％；肺外结核病的敏感性为71．2％；诊断结核病的总体敏感性为72．0％，特异性为82．1％。②TB—SA血清抗体检测OD405值并不与PPD值成线性关系，结核分枝杆菌TB—SA抗体检测对结核病人的诊断不受患者卡介苗反应的影响。结论结核分枝杆菌TB—SA抗体检测诊断结核病有较好的敏感性和特异性，是结核病诊断和鉴别诊断的可靠手段。

关于BCG—PPD与TB—PPD在结核分枝杆菌感染、结核病筛查结果差异的相关意见

目前国内有经结核分枝杆菌滤液提取的PPD（TB-PPD）与减毒牛分枝杆菌提取的PPD（BCG-PPD）2种产品，TB-PPD还有5IU／人份与2IU／人份2种剂量，使用者对不同品种与剂量产品用途存在疑问。根据由国家药品主管部门批准的PPD规程与使用说明书，TB-PPD与BCG-PPD均以PPD国际标准PPDS标化的同剂量国家标准品进行标化，活性效价完全一致。目前国内使用的主流产品50IU／ml规格的TB-PPD与BCG-PPD用途相同，可用于结核病的临床诊断、卡介苗接种对象的选择及卡介苗接种后的质量监测；而20IU／ml规格的TB-PPD则专供结核病流行病学调查及临床疑似结核病患者诊断使用。建议使用者根据PPD使用说明书及用途选择适用的制品。

结核分枝杆菌Ag85B、TB10.4及Ag85B-TB10.4融合基因的克隆表达及生物信息学分析

目的构建结核分枝杆菌Ag85B、TB10.4及Ag85B-TB10.4融合表达载体,并进行抗原的生物信息学分析,为候选疫苗筛选奠定基础。方法从结核分枝杆菌H37Rv菌株中分别扩增出Ag85B基因,TB10.4基因,Ag85B-TB10.4;将Ag85B克隆入pET-28a(+)表达载体中,将TB10.4和Ag85B-TB10.4分别克隆入pET-SUMO表达载体中。上述重组质粒转化入大肠埃希杆菌BL21菌中(DE3),经IPTG诱导表达,并对其进行生物信息学分析。结果 (1)成功将结核分枝杆菌Ag85B和TB10.4,Ag85B-TB10.4基因分别克隆入pET28a(+)和pET-SUMO表达载体中,经IPTG诱导蛋白表达后,对经超声裂解的菌液上清进行SDSPAGE电泳,表明获得了与预期蛋白大小一致的表达产物,重组融合蛋白pET-SUMO-Ag85B-TB10.4蛋白分子质量约为54kDa。(2)生物信息学分析显示Ag85B-TB10.4融合蛋白具有多个潜在抗原位点。结论成功构建了重组质粒pET-28a-Ag85B,pET-SUMO-TB10.4和pET-SUMO-Ag85B-TB10.4,并获得了Ag85B,TB10.4和Ag85B-TB10.4的可溶性原核表达产物;生物信息学分析在Ag85B与TB10.4蛋白加入一段蛋白linker后蛋白的亲水性增强,抗原决定簇面积增大,为后续的功能实验研究奠定了基础。

结核分枝杆菌PPE36、TB10.4蛋白的研究进展

结核杆菌全称结核分枝杆菌（MTB）,于1882年由德国细菌学家罗伯特科赫发现并证明是结核病的病原菌,其繁殖时有分支生长趋势,故得此名。因为菌体本身含有大量分支菌酸,进行细胞染色时不易着色,加温或者延长着色时间后能抵抗盐酸乙醇的脱色,因此又称为抗酸杆菌[1-2]。这种细菌能够逃避宿主免疫系统的防御,在体内持续多年,感染后几十年被激活引起疾病[3]。

痰TB-DNA、分枝杆菌核酸、涂片找抗酸杆菌及血T-SPOT.TB试验对肺结核的诊断价值研究

目的通过研究统计痰TB-DNA、痰分枝杆菌核酸、痰涂片找抗酸杆菌、血清T-SPOT.TB试验对肺结核的诊断敏感度、特异度、诊断预测值、诊断准确率,进一步探讨不同临床检测方法对肺结核的诊断价值,指导肺结核患者的临床诊治。方法通过回顾性分析我院2017年1月-2019年12月呼吸内科、感染性疾病科诊断为活动性肺结核的患者,以痰结核菌培养结果为对照标准,分别统计出痰TB-DNA、痰分枝杆菌核酸、痰涂片找抗酸杆菌、血T-SPOT.TB试验对肺结核的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断准确率,探讨我院临床上四种实验室方法对诊断肺结核的临床价值。结果通过上述方法统计出痰TB-DNA、痰分枝杆菌核酸、痰涂片找抗酸杆菌、血T-SPOT.TB试验对肺结核的诊断敏感度分别是84.7%、88.1%、74.7%、96.0%,特异度分别是65.3%、69.2%、86.5%、17.8%,阳性预测值分别是83.0%、85.%、92.0%、70.7%,阴性预测值分别是68.1%、73.5%、62.1%、68.4%,诊断准确率分别是78.2%、82.0%、78.5%、70.5%。结论跟传统方法痰结核菌培养、痰涂片找抗酸杆菌比较,TB-DNA、分枝杆菌核酸、TB-SPOT.TB试验在时效、灵敏度方面更具优势,能敏感检测出人体是否感染肺结核,对患者的早期诊断及指导治疗具有重要意义。

结核分枝杆菌TB10.4亚单位疫苗的构建及免疫原性研究

目的构建结核分枝杆菌TB10.4基因的原核表达载体,表达和纯化该蛋白,构建亚单位疫苗,并对其免疫原性进行研究。方法从重组质粒p ET-SUMO-TB 10.4获得基因片断后,将其插入到载体p ET-28a(+),转化Ecoli DH5α感受态细胞,随机筛选阳性克隆,测序正确后并将该重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化并复性。随机将C57BL/6雌性小鼠分为Tris-HCl组、TB10.4组(佐剂为DDA/Poly I∶C)及卡介苗(BCG)3组,每组10只,每只小鼠每次免疫200μL,其中DDA250μg及Poly I∶C 25μg,蛋白量为20μg,而BCG为5×106CFU,分别于1、4、7周皮下免疫小鼠。末次免疫4周后,用特异性抗原TB10.4刺激脾淋巴细胞,检测其分泌IFN-γ水平;用ELISA检测血清特异性抗体Ig G2b、Ig G1。结果构建了原核表达重组质粒p ET-28a-TB10.4,并在分子量约为10.4k Da处观察到蛋白条带;小鼠血清中产生特异性抗体Ig G2b与Ig G1,体外脾淋巴细胞受TB10.4刺激时分泌IFN-γ水平显著高于Tris-HCl组(P<0.05)及BCG组(P<0.05)。结论 TB10.4蛋白与佐剂构建了亚单位疫苗,该疫苗可在C57BL/7小鼠中诱导抗原特异性免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究。

HIV/TB双重感染与HIV阴性结核病结核分枝杆菌耐多药现状研究

目的探讨HIV/TB双重感染与艾滋病病毒(HIV)阴性结核病相关结核分枝杆菌的耐多药情况。方法选取HIV/TB双重感染患者50例(HIV/TB双重感染组),鉴定结核分枝杆菌菌种,并行耐药检测,就多耐药率与同期HIV阴性结核病患者50例(HIV阴性结核病组)比较。结果 HIV/TB双重感染组检测耐药菌株共50株,其中对S、H、E、R均敏感20株,20株对≥1种药物耐药。与HIV阴性结核病组比较,HIV/TB双重感染组初始耐药率居较高水平,差异有统计学意义(P<0.05);两组获得耐药率、总耐药率比较差异无统计学意义(P>0.05)。HIV/TB双重感染组耐多药菌株9株,总耐多药率为18%,HIV阴性结核病组耐多药菌株8株,总耐多药率为16%,差异无统计学意义(P>0.05)。但初始耐多药率HIV/TB双重感染组为18%,明是高于HIV阴性组的8%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HIV/TB双重感染的患者,初始多重耐药株呈增多显示,需依据监测结果 ,指导临床用药,以获得理想预后。

结核分枝杆菌感染与自身免疫病相互关系的研究进展

结核病（ TB ）是一种严重危害人类健康的感染性疾病。目前，全球约有三分之一人口感染结核分枝杆菌（ MTB），每年还有约900万的新发病例，约200万人死于TB［1］。由于MTB本身并不产生内、外毒素，也不产生侵袭性酶类，TB的病理作用主要是由机体自身的免疫应答介导的，因此其致病机制与自身免疫病（ AID）存在一定的相似性。值得关注的是，近年越来越多的临床研究发现，AID患者中TB的发生率较正常人群明显升高，同样，TB患者并发AID的概率也显著上调，而且AID的发生也会促进TB的发生和发展。这些研究提示MTB感染与AID之间可能存在某些紧密的相互作用。而对这种相互关系发生的先后顺序仍存在着较大争议，其作用机制也尚未阐明，国内外对于此类研究仍缺乏系统的综述。为较为全面地理解TB与AID间的相互关系，本文就近年来有关这两者在相互作用关系、机制以及两者的相互作用对临床诊疗的影响等方面的研究进展作一综述。

Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌实验室检查方法中的诊断效能评估

目的:探讨实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在结核分枝杆菌(MTB)实验室检查方法中的诊断效能。方法:选定600例疑似MTB感染患者,并分别对其同一份痰液样本采取Xpert MTB/RIF技术和涂片抗酸染色进行检测,以影像学、病理学结果及其他相关临床检查综合诊断结果为金标准。观察分析两种检测方法对不同性状痰标本中MTB的阳性检出率,并比较其诊断效能。结果:Xpert MTB/RIF技术对唾液痰标本、黏液痰及干酪痰标本的MTB阳性检出率,均较涂片抗酸染色法高,差异有统计学意义(P<0.05);而其血痰标本的MTB阳性检出率与涂片抗酸染色法相比,差异无统计学意义(P>0.05)。Xpert MTB/RIF技术的敏感度、准确性,均较涂片抗酸染色法高,差异有统计学意义(P<0.05);而其特异度与涂片抗酸染色法相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针对疑似MTB感染患者,Xpert MTB/RIF技术在其不同性状痰标本中的阳性检出率较高,且其诊断效能优于涂片抗酸染色法。

联合使用Capilia TB方法和涂片形态学鉴定结核分枝杆菌复合群

背景:台湾许多医院使用全自动BACTEC分枝杆菌生长指示管(MGIT)960系统鉴定临床标本中的分枝杆菌,使用很费劳力的BD ProbeTecET(CTB)系统或生化方法鉴定BACTEC阳性培养物中的结核分枝杆菌复合群(MTC)。目的:评估Capilia TB方法能否在BACTEC阳性培养物中鉴别MTC,从而替代BD ProbeTecET(CTB)或生化方法。实验设计:收集分枝杆菌阳性的BACTEC培养物,用生化方法鉴别培养物中的MTC。然后用涂片观察卷曲索状、Capilia TB方法或BDProbeTecET(CTB)系统进行鉴定,比较各结果。结果:收集了233例BACTEC分枝杆菌阳性培养物,Capilia TB方法的敏感性和特异性分别为96.9%和98.6%,BD ProbeTec ET(CTB)系统为99.4%和97.3%,联合使用Capilia TB和涂片卷曲索状方法,对于交叉结果的特异性达到100%,对于组合结果的敏感性为100%。结论:Capilia TB方法可以用于BACTEC培养物中MTC的鉴定。结合涂片中的卷曲索状可以降低假阳性和假阴性。

经验性治疗肝移植术后非结核分枝杆菌感染1例附文献复习

目的总结肝移植术后非结核分枝杆菌(NTM)感染的诊疗经验。方法对第二军医大学附属长征医院收治的1例肝移植术后NTM成功经验性治疗病例进行研究分析,并对相关文献进行回顾。结果 1例肝移植术后7个月NTM感染患者,临床表现以午后发热为主,动态CT检查提示病情进展时右肺下叶基底段内病灶扩大融合且出现薄壁空洞。采用纤维支气管镜检查(刷检或灌洗)、结核分枝杆菌感染T细胞免疫斑点试验(T-SPOT.TB)、多次痰培养及经验性抗结核治疗支持NTM感染的诊断。该患者诊断性四联抗结核治疗有效,治愈后出院。随访持续至投稿日,患者病情平稳,无再次出现发热、咳喘症状,肝功能正常。结论肝移植术后NTM感染罕见但不可忽视,纤维支气管镜刷检或灌洗可提高阳性发现率,诊断性四联抗结核治疗有效。

结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖尿检用于儿童结核病诊断的研究进展

结核病(tuberculosis,TB),特别是儿童结核病,仍是影响全球健康的重要因素。由于传统的结核病诊断技术灵敏度、特异度较差,结核病病例常因为无法得到准确、及时的诊断而被延误治疗。儿童结核病病灶含菌量低,且患儿常无法咳出痰,因此,儿童结核病诊断较成人结核病诊断更具有挑战性。脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomannan,LAM)是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)细胞壁上的特异性抗原,可以在结核患者的尿液标本中检测到,尿LAM检测有助于快速、准确地诊断结核病。本综述旨在总结LAM检测用于儿童结核病诊断的研究进展。

新型结核分枝杆菌核酸检测试剂盒的临床应用初步评价

目的通过对比实验,对结核分枝杆菌(TB)核酸检测试剂的临床使用效果进行评价。方法用分离培养法与圣湘生物结核分枝杆菌(TB)核酸检测试剂分别对202例临床收集的样本进行结核分枝杆菌的检测并对比其结果,同时,将两种检测方法的检测结果分别与测序法结果进行对比。结果结核分枝杆菌核酸检测试剂与培养法的阳性一致性百分比为100%,阴性一致性百分比为98.61%,总一致性百分比为99.01%;对2例不符样本进行测序复核,并对复核后的结果进行Kappa检验一致性分析,结果 Kappa值为1.000,表明结核分枝杆菌核酸检测试剂结果与金标准分离培养法的结果具有很好的一致性,表现出较好的准确性。结论结核分枝杆菌核酸检测试剂与分离培养法的结果具有很好的一致性,且阳性率较分离培养法更高,所需检测时间大为缩短,具有内标控制假阴性,结果准确,符合临床检测要求,具有较高的临床应用价值。

胸部CT在AIDS合并非结核分枝杆菌肺病与合并肺结核中的影像特征

目的分析胸部CT在艾滋病(AIDS)合并非结核分枝杆菌(NTM)肺病与合并肺结核(TB)中的影像特征。方法选取2016年12月至2017年12月我院50例AIDS合并TB患者作为对照组,同期的50例AIDS合并NTM肺病患者作为研究组,所有患者均行胸部CT检查,采用Fisher确切概率法比较两组的影像学特征。结果对照组的上叶侵犯率显著高于研究组(P<0.05);研究组患者条索影、结节、斑片影、支气管扩张、类圆形GGO占比显著高于对照组(P<0.05);两组粟粒、胸部积液占比及胸腔增大淋巴结分布比较,差异显著(P<0.05)。结论胸部CT检查在AIDS合并TB与AIDS合并NTM肺病诊断鉴别中具有较高的应用价值。