荧光定量聚合酶链反应技术检测结节病肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA

目的探讨结核分枝杆菌感染在结节病发病中的作用;方法荧光定量聚合酶链反应技术检测22例结节病肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA;结果22例肺泡灌洗液中9例检出结核分枝杆菌;结论结核分枝杆菌感染可能是结节病病因之一。

荧光定量聚合酶链反应技术检测痰结核分枝杆菌DNA及其临床应用研究

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)技术在肺结核诊断中的临床价值。方法对144例活动性肺结核的痰及30例健康对照者的痰进行 FQ-PCR 检测,并与痰涂片检查法、改良罗氏培养法结果进行比较。结果 FQ-PCR 检测痰结核分枝杆菌阳性率、痰涂片抗酸检查法阳性率、改良罗氏培养法阳性率分别为61.1%(88/144)、51.4%(74/144)、55.6%(80/144),以 FQ-PCR 检测痰结核分枝杆菌阳性率为最高,FQ-PCR 检测特异性为100%。结论 FQ-PCR 技术检测痰结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,该方法快速、准确,对肺结核的诊断有一定价值。

痰结核分枝杆菌DNA检测诊断肺结核的临床意义

目的评估痰结核分枝杆菌DNA检测诊断肺结核的可行性及临床意义。方法回顾性分析2016年5月—12月在我科住院的经痰结核分枝杆菌培养确诊的136例肺结核患者的临床资料,比较痰涂片找抗酸杆菌和痰结核分枝杆菌DNA检测2种方法的检出率。结果 136例确诊的肺结核患者中,痰涂片阳性的有64例(47.06%),痰结核分枝杆菌DNA检测阳性的88例(64.71%),痰结核分枝杆菌DNA检测阳性率明显高于痰涂片找抗酸杆菌(P<0.05)。72例痰涂片阴性患者中痰结核分枝杆菌DNA检测阳性29例,占痰涂片阴性肺结核患者比例的40.28%。结论痰结核分枝杆菌DNA检测优于痰涂片找抗酸杆菌,能够辅助涂阳肺结核的诊断,并提高涂阴肺结核的诊断水平,是一种快速、敏感的病原学诊断方法。

结核酶联免疫斑点试验、结核分枝杆菌DNA测定和痰涂片检测在肺结核诊断中的比较研究

目的比较结核酶联免疫斑点试验（T—SPOT-TB）、结核分枝杆菌DNA（TB—DNA）测定和痰涂片检测在肺结核诊断中的意义。方法选取2010年5月～2013年1月在本院做结核检测的患者，其中确诊肺结核的患者95例进行T—SPOT-TB、TB—DNA测定和痰涂片检测。结果T—SPOT-TB、痰涂片和TB—DNA测定的敏感性分别为92．22％、24．44％、67．78％，痰涂片的敏感性最低，T—SPOT-TB最高（P〈0．05）。结论T—SPOT-TB较痰涂片、TB—DNA检测对结核病诊断有较高的敏感性。

荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌DNA的应用价值

目的:评价荧光定量PCR技术在痰结核分枝杆菌DNA检测中的应用价值,为临床检测提供依据。方法:对2011年7月-2013年8月在我院住院治疗的78例结核病患者,采取荧光定量PCR、抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养三种方法对患者的同一份痰标本进行检测,比较分析检测差异。结果:荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌的效果明显优于抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养检测,荧光定量PCR检测的阳性率最高,为73.1%。结论:应用荧光定量PCR技术检测痰结核分枝杆菌DNA操作简单、诊断快捷、灵敏度较高,可作为结核病的常规诊断方法,值得在临床推广应用。

结核感染T细胞检测和结核分枝杆菌DNA测定在肺结核感染诊断中的联合应用

探讨痰或灌洗液结核分枝杆菌DNA定性测定(TB-DNA)与结核感染T细胞检测(TB-IGRA)联合应用,对肺结核感染诊断的应用价值。方法 以柳州市人民医院就诊的肺结核患者488例(2019.03月~2020.06)为例。另择性别、年龄匹配的同期入院非肺结核病患者154例为对照组。现通过收集该肺结核患者的TB-DNA定性和TB-IGRA检测结果进行分析.探讨痰或灌洗液TB-DNA定性与TB-IGRA检测方法在肺结核感染诊断中的联合应用。结果 结核病组中痰或灌洗液TB-DNA定性灵敏度、血TB-IGRA灵敏度、TB-DNA定性和TB-IGRA联合检出率分别为40.57%、70.08%、75.56%。结论 与TB-DNA定性检測肺结核比较,TB-IGRA检测诊断简单、灵敏度高,但特异度低;痰液对结核杆菌培养时间长,TB-DNA定性检测快速、准确,联合应用TB-IGRA+痰TB-DNA定性检测诊断肺结核效果更佳。

肉芽肿性炎组织中结核分枝杆菌检出方法的对比分析及应用价值

目的 探讨肉芽肿性炎组织中结核分枝杆菌常用两种检查方法[抗酸染色和荧光定量PCR(FQ-PCR)]检出效能的大小,与其他实验室检测指标的关系及临床应用价值。方法 对373例石蜡包埋的肉芽肿性炎组织行抗酸染色和FQ-PCR检测,比较两者在各种病检组织中的阳性检出率、敏感度和特异度等方面的差异,同时分析它们与其他实验室检测指标的关系。结果 373例肉芽肿性炎的病例组织中,抗酸染色阳性率为19.57%,敏感度和特异度分别为60.38%、96.63%;结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)的阳性率为27.35%,敏感度和特异度分别为94.34%、99.25%;在确诊结核病的病例中,CT影像、涂片抗酸染色、T-SPOT.TB、γ-干扰素释放试验(IGRAs)、TB特异性细胞免疫反应等影像和实验室检查的阳性率分别为82.47%、6.45%、96.00%、80.00%、82.35%。结论 抗酸染色和TB-DNA两者在肉芽肿性炎组织中的联合检测对早期确诊结核病有重要意义,其中TB-DNA有较高的检出率和特异性,与其他实验室检测指标一起可以提高结核分枝杆菌的检出率。

TaqMan—PCR技术定量检测脑脊髓液结核分枝杆菌DNA的研究

为了满足临床上更快、更准确地早期诊断结核性脑膜炎（TBM），以保证及早的、更合理地进行治疗，我们引入了一种荧光定量PCR技术——TaqMan—PCR技术定量检测脑脊髓液（CSF）结核分枝杆菌DNA，并与结核抗体斑点免疫金渗试验（DIGFA）、抗酸染色法及改良罗氏培养法（L—J培养法）进行比较，探讨其在TBM诊断和治疗中的价值。

检测克罗恩病肠组织中副结核分枝杆菌DNA发现的新序列

克罗恩病（CD）目前病因未明，与副结核分枝杆菌（Mycobacterium paratuberculosis，MP）的关系一直是研究的热点。本研究旨在通过采用实时荧光定量聚合酶链反应（fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQ—PCR）TaqMan技术检测CD与肠结核（intestinal tuberculosis，ITB）患者肠道病变组织MP，探索CD病原学诊断的试验方法，为ITB和CD的鉴别诊断提供实验依据。

与GyrA相互作用的GyrB结构域突变对结核分枝杆菌螺旋酶功能的影响

DNA螺旋酶中的GyrA与GyrB亚基只有互作重组后才有酶活性。为寻找GyrB亚基和GyrA亚基相互作用的关键区域,构建了不同的GyrB亚基突变体,分析GyrB各突变体与GyrA亚基的相互作用对全酶活性的影响。结果显示:GyrB亚基C端是其与GyrA相互作用的主要结构域,结合GyrB的二维结构,提出GyrB中第531~550位氨基酸是影响螺旋酶功能的关键区域,并可能是理想的新药设计靶标。

不同样本处理方法对显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的影响

目的:选择一种较为理想的从痰标本中直接抽提结核分枝杆菌DNA的方法,用于显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药基因。方法:选择3份含结核分枝杆菌分别为4.325×103、6.857×104、5.356×105Copies/ml的痰液,分别用Chelex100树脂法、煮沸法、蛋白酶K消化-异丙醇沉淀法、蛋白酶K消化-酚/氯仿抽提法、碱裂解法、异硫氰酸胍裂解法、盐酸胍裂解法、离心柱法抽提结核分枝杆菌DNA作多重聚合酶链反应,显色法芯片检测结核分枝杆菌RFP和INH耐药基因。结果:离心柱法检测结果阳性,其余方法检测结果均为阴性,离心柱法检测灵敏度为2.743×103Copies/ml。结论:离心柱法是一种较为理想的从痰标本中直接抽提结核分枝杆菌DNA的方法,可用于显色法芯片检测结核分枝杆菌RFP和INH耐药基因。

芯片显色法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因实验条件优化研究

目的优化研究芯片显色法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的最佳条件。方法自制DNA芯片,每条寡核苷酸探针片段长度为19bp,点样浓度在15μmol/L,以痰液为待检标本,分别用不同引物、Mg2+、核苷酸、DNA聚合酶浓度等进行多重聚合酶链反应;分别在不同时间、温度下进行杂交,分别在不同酶作用时间和显色时间进行分析,比较不同条件芯片检测结果。结果引物、Mg2+、核苷酸、DNA聚合酶浓度分别为0.2μmol/L、1mmol/L、0.2mmol/L、5U效果最好,杂交时间和杂交温度分别为0.5h、60℃信号最强,酶作用时间和显色时间均为0.5h时得到最佳结果。结论在最佳条件下,该技术的重复性、特异性、灵敏度与可靠性均较好,适合基层医院推广应用。

荧光定量PCR技术检测石蜡包埋组织结核杆菌DNA的应用评价

目的探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测石蜡包埋组织结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)在结核病诊断中的应用价值。方法 233例石蜡包埋组织标本采用实时FQ-PCR技术检测TB-DNA,同时进行抗酸染色和组织病理学检查,以临床诊断结果为金标准,分别计算TB-DNA、抗酸染色和病理学检查的灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值。结果 129例临床诊断为结核病的组织标本中,TB-DNA阳性107例,TB-DNA阴性22例;104例非结核病的标本中,TB-DNA阳性2例,TB-DNA阴性102例。TB-DNA检测的灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为82.95%、98.08%、89.70%、98.17%、82.25%,均高于抗酸染色的63.57%、95.19%、77.68%、94.25%、67.80%和病理学检查的77.52%、96.15%、85.84%、96.15%、77.52%。结论 FQ-PCR技术检测石蜡包埋组织的TB-DNA用于各种结核病的诊断具有灵敏度高、特异性强的优点,与病理学检查相结合可以大大提高结核病的诊断率,适合于临床推广应用。

胸腔积液ADA、IFN-γ、TNF-α与胸腔积液沉渣DNA联合检测在结核性胸膜炎诊断中的价值

目的探讨胸腔积液腺苷脱氨酶(ADA)、γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与胸腔积液沉渣DNA(TBDNA)联合检测在结核性胸膜炎诊断中的价值。方法选取2014年5月至2015年11月经诊断为结核性胸腔积液的62例患者作为结核性胸腔积液组,另选取62例非结核性胸腔积液的患者作为对照(非结核组为恶性胸腔积液),采用酶比色法检测ADA活性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IFN-γ和TNF-α,采用PCR定性检测TB-DNA。计算4项指标单独检测和联合检测结核性胸腔积液的敏感性和特异性。结果结核性胸腔积液组的ADA、IFN-γ和TNF-α水平均明显高于非结核性胸腔积液组(P<0.05)。ADA、IFN-γ、TNF-α和TB-DNA对结核性胸腔积液组的单独检测阳性率均明显高于非结核性胸腔积液组的检测阳性率(P<0.05)。4项指标联合检测结核性胸腔积液组的阳性率显著高于非结核性胸腔积液组(P<0.05)。4项指标联合诊断结核性胸膜炎的敏感性和特异性分别为91.9%和93.5%,均显著高于各指标单独诊断的敏感性和特异性。结论联合检测胸腔积液中ADA、IFN-γ、TNF-α和TB-DNA能够提高诊断的准确性,可以作为早期诊断与鉴别结核性胸膜炎的重要参考指标。

结核感染T细胞斑点试验在结核性浆膜炎中的诊断价值研究

目的探讨浆膜腔积液结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测在结核性浆膜炎诊断中的价值。方法选取2014年8月-2016年3月于湖南省长沙市中心医院住院的152例可疑结核性浆膜炎患者,按最终诊断分为结核组和非结核组,两组行浆膜腔积液的腺苷脱氨酶(ADA)、结核分枝杆菌培养、T-SPOT.TB及结核杆菌脱氧核糖核酸检测(TB-DNA),比较4种方法在结核性浆膜炎诊断中的敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值。结果患者T-SPOT.TB、ADA、TB-DNA及结核分枝杆菌培养的敏感性分别为88.2%、45.2%、9.8%和18.6%,特异性分别为86.0%、80.0%、98.0%和100.0%,阳性预测值分别为92.8%、82.1%、90.9%和100.0%,阴性预测值分别为78.2%、41.7%、34.8%和37.6%。T-SPOT.TB诊断结核性胸膜炎、结核性腹膜炎及结核性心包炎的敏感性比较,差异有统计学意义(P <0.05),T-SPOT.TB与ADA、TBDNA、结核分枝杆菌培养的敏感性和特异性比较,差异有统计学意义(P <0.05),T-SPOT.TB检测ROC曲线面积为0.893(59%CI:0.834,0.952)。结论浆膜腔积液T-SPOT.TB检测比ADA、TB-DNA、结核分枝杆菌培养更适用于诊断结核性浆膜炎。

多项指标联合检测对结核性胸膜炎的诊断价值

目的:评价腺苷脱氨酶(ADA)、结核抗体(TB-Ab)以及结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)联合检测在结核性胸膜炎的诊断价值。方法:分别检测病例组(82例结核性胸膜炎患者)和对照组(80例非结核性胸膜炎患者)胸水中ADA、TB-Ab和TB-DNA指标阳性率,对单一和联合检测结果进行评价。结果:病例组患者ADA、TB-Ab以及TBDNA阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ADA、TB-Ab和TB-DNA联合检测的诊断价值最高,灵敏度为87.80%,特异度为83.75%,约登指数为0.716,阳性预测值为84.71%,阴性预测值为87.01%。结论:ADA、TB-Ab和TB-DNA在结核性胸膜炎患者中的阳性率较高,并且三指标联合检测对结核性胸膜炎具有较高的诊断价值,有助于早期诊断。

结核感染T细胞斑点实验在结核病诊断中的价值

目的探讨结核菌感染T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)在结核病中的诊断价值,比较研究T-SPOT.TB、结核分枝杆菌DNA测定(TB-DNA)和结核菌素试验(TST)检测在肺结核诊断中的作用。方法收集新疆维吾尔自治区胸科医院痰菌阴性肺结核60例(痰菌阴性组),另纳入痰菌阳性肺结核患者(34例)为痰菌阳性组,以及肺癌、慢性阻塞性肺疾病和支气管肺炎患者(35例)为非结核病组。采用T-SPOT.TB、TB-DNA和TST实验方法对痰菌进行检测。结果 3组T-SPOT.TB阳性率经比较差异有统计学意义(P<0.05)。肺结核组(包括痰菌阴性组、痰菌阳性组)的T-SPOT.TB阳性率均明显高于非结核病组(P<0.05)。痰菌阴性组和痰菌阳性组T-SPOT.TB阳性率差异无统计学意义(χ~2=1.207,P>0.05)。单一指标检测肺结核,T-SPOT.TB的敏感性和特异型分别为88.3%和94.3%,其敏感性高于TST和TB-DNA;其特异性低于TST,高于TB-DNA。结论T-SPOT.TB对痰菌阴性肺结核病的敏感性和特异性都有明显的优势,可以作为痰菌阴性和阳性肺结核病早期诊断的一种辅助检查手段,具有快速、准确的诊断价值。

左氧氟沙星联合抗结核化疗方案在复治涂阳肺结核中的应用

临床通常采用抗结核化疗方案治疗复治涂阳肺结核,相关药物包括利福平、吡嗪酰胺、异烟肼及乙胺丁醇等,但整体疗效不尽如人意,且部分药物不良反应较多,不利于患者预后[1]。有报道指出,左氧氟沙星可对结核分枝杆菌DNA旋转酶活性产生抑制作用,达到灭菌的目的[2]。本研究选取84例复治涂阳肺结核患者进行对照研究,分别给予单纯抗结核化疗方案、抗结核化疗方案+左氧氟沙星治疗,旨在为临床治疗复治涂阳肺结核寻找更多依据,报告如下。