改良抗酸染色和结核与非结核基因检测在结核病病理诊断中的应用比较

目的比较分析改良抗酸染色和结核与非结核基因检测在结核病病理诊断中的差异。方法收集赣州市第五人民医院2020年1-12月确诊肺结核患者96例,组织经病理常规取材、石蜡包埋、切片、苏木精-伊红(HE)染色,之后进行改良抗酸染色与结核与非结核基因检测。结果96例肺结核患者病理中,抗酸染色阳性例数48例,阳性率50%;结核与非结核基因检测结核阳性例数70例,阳性率73%,差异有统计学意义(P<0.05);两种方法联合检测阳性例数75例,阳性率78%,与基因检测相比,差异无统计学意义(P>0.05),与改良抗酸染色相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在结核病病理诊断中,结核与非结核基因检测阳性率显著高于改良抗酸染色法,两种方法联合检测更有利于提高确诊率。

探究结核分枝杆菌耐药基因检测在耐药肺结核治疗中的价值

研究、分析结核分枝杆菌耐药基因检测在耐药肺结核治疗中的价值。方法 抽取2023年1月至2024年1月我院收治的耐药肺结核患者(40例),均分为对照组、研究组,各20例,分别实施常规药敏试验、结核分枝杆菌耐药基因检测。结果 研究组耐药检出准确率较高,反观对照组则相对较低,组间有统计学意义(P<0.05);研究组基因突变检出率高于对照组(P<0.05)。结论 在耐药肺结核的治疗中,结核分枝杆菌耐药基因检测的应用价值明显,可为治疗方案的制定或调整提供可靠依据,值得推广。

超敏结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测技术在结核病诊断中的应用进展

1结核病现状结核病是严重危害人类健康的传染性疾病之一,是仅次于新型冠状病毒感染的第二大传染病杀手,是全球第13大死因[1]。2022年10月27日,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)发布《2022全球结核病报告》[2](以下简称报告)指出,2021年全球新发结核病患者约1060万人,其中儿童约120万人。受新型冠状病毒的影响,全球结核病发病率与2020年相比上升了3.6%,打破了过去20年间每年约2%的下降趋势。2019年至2021年,全球因结核病死亡人数有所增加,2021年全球共有160万人死于结核病,相当于倒退到2017年的水平。2020年至2021年全球耐药结核病负担增加了3%,2021年报告了45万例利福平耐药结核病例,需要治疗的耐药结核患者中仅有36%的人接受了治疗,并且全球耐药结核的成功治疗率只有60%。2021年全球结核病基本医疗服务支出也从2019年的60亿美元下降至54亿美元,而2022年所需的费用为130亿美元[2],资金缺口巨大。

慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因突变分析

目的研究慢性阻塞性肺疾病(COPD,简称慢阻肺)合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变。方法选择经结核分枝杆菌ropB基因检测阳性患者221例,其中慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者94例,单纯初治菌阳肺结核患者127例,对两组患者结核分枝杆菌基因(利福平耐药)进行回顾性研究。结果慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因菌株(利福平耐药)21例,占比22.3%,利福平敏感73例,占比77.7%;单纯初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因菌株(利福平耐药)15例,占比11.8%,利福平敏感112例,占比88.2%;两组对比差异有统计学意义(P<0.05),慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因(利福平耐药)率高于单纯初治菌阳肺结核组;各组不同性别利福平耐药率比较差异无统计学意义(P>0.05);各组不同年龄段基因(利福平耐药)率比较差异无统计学意义(P>0.05),但慢阻肺合并初治菌阳肺结核组在50~59岁及年龄≥70岁年龄段基因(利福平耐药)率较高,分别为33.3%、28.9%。单纯初治菌阳肺结核组以年龄<20岁利福平耐药率较高,占比28.6%。结论肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因突变是导致利福平耐药的原因之一,慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因突变率(利福平耐药)高于单纯初治菌阳肺结核患者;各组患者基因突变率(利福平耐药)与性别无关,慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者年龄越高,利福平耐药率越高。

不同支气管镜介导标本的结核分枝杆菌基因检测对痰涂片阴性肺结核患者的诊断价值

目的:分析不同支气管镜介导标本结核分枝杆菌基因(TB-DNA)检测对痰涂片阴性肺结核患者的诊断价值。方法:选取2022年1—12月聊城市传染病医院痰涂片阴性肺结核患者178例为研究对象,采用奇偶数字法分为对照组和研究组,各89例。对照组采用肺泡灌洗液进行标本提取,研究组采用毛刷刷检进行痰液标本收集,两组均以荧光定量聚合酶链反应检测标本中的TB-DNA,比较两组肺结核诊断、耐药性检测效能以及不良反应。结果:研究组肺结核诊断灵敏度、特异度以及准确率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组耐药性检测灵敏度、特异度以及准确率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在痰涂片阴性肺结核患者的疾病诊断中,以毛刷刷检介导标本的肺结核诊断、耐药性检测效能优于肺泡灌洗液介导标本,两种标本介导方式不良反应均比较少,安全性相当。

结核分枝杆菌耐药基因检测应用于耐药肺结核治疗的价值探讨

剖析耐药肺结核患者在采取相应治疗措施时经结核分枝杆菌耐药基因检测取得的临床价值。方法 研究目标入院治疗时间范围于2020年1月—2023年1月,采取相关检查措施被确诊为耐药肺结核,筛选样本量共计200例,以随机数字表法为分组依据将其划分并命名为对照组(n=100)和观察组(n=100),对照组用药期间给予其常规药敏试验,观察组所用检验方式为结核分枝杆菌耐药基因检测,分析两组诊断方法应用期间的耐药肺结核阳性检出率、诊断效能。结果 耐药肺结核阳性检出率测定结果呈现为,观察组明显高于对照组(P值<0.05)。评估两组检测方式的诊断效能,特异度、敏感度、准确度、阳性预测值、阴性预测值经统计学分析,对比差异显著(P<0.05)。结论 耐药肺结核患者治疗期间应用结核分枝杆菌耐药基因检测有利于提高诊断效能,为合理制定治疗方案提供了参考依据,在临床上具有较高的借鉴价值。

4种检测方法对骨结核的诊断价值比较

目的探讨涂片抗酸染色、TB-DNA、Xpert MTB/RIF、结核菌培养等4种检测方法对骨结核诊断的价值对比。方法对骨外科1 a内住院骨质破坏患者的病灶周围脓液,用4种检测方法进行检测,并对结果进行统计分析,指标包括:灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果研究对象中以临床诊断为金标准,脓液涂片查抗酸杆菌灵敏度为31.75%,特异度为100.00%,阳性预测值100.00%,阴性预测值53.74%,约登指数为0.32;TB-DNA灵敏度为88.89%,特异度为98.00%,阳性预测值98.25%,阴性预测值87.50%,约登指数为0.87;Xpert MTB/RIF灵敏度为95.23%,特异度为68.00%,阳性预测值78.95%,阴性预测值91.90%,约登指数为0.63;脓液结核菌培养灵敏度为41.27%,特异度为100.00%,阳性预测值100.00%,阴性预测值57.47%,约登指数为0.41,(χ^(2)=77.354,P<0.005)4种检测方法差异具有统计学意义。结论4种检测方法中,TB-DNA灵敏度和特异度较好,Xpert MTB/RIF灵敏度较好,TB-DNA和Xpert MTB/RIF的真实性较好,同时阳性预测值和阴性预测值较高,对骨结核的诊断具有较好的价值。

结核分枝杆菌耐药基因检测在耐药肺结核治疗中的效果分析

分析在耐药肺结核临床治疗中应用结核分枝杆菌耐药基因检测的效果。方法 进行回顾性研究,选303择我院2022年3月至2022年12月收治的88例肺结核患者,根据临床检测方式,对患者分组。对照组(44例)接受传统的药敏试验,观察组(44例)接受结核分枝杆菌耐药基因检测。对比分析2组检测效果。结果 两组检出的结核分枝杆菌耐药情况没有显著差异(P>0.05)。但两组在检验时间上存在着显著差异(P<0.05),此外,观察组还可以精确测定结核分枝杆菌突变株数。结论 结核分枝杆菌具有高度的变异性,该菌可通过变异产生明显的耐药性,导致肺结核患者的病情发展成为耐药性肺结核。但是,可以基于结核分枝杆菌高度变异性这一特点,对肺结核患者进行结核分枝杆菌耐药基因检测。通过结核分枝杆菌耐药基因检测,可以及早检出耐药性肺结核,并确定结核分枝杆菌突变株的具体类型,从而帮助医生更快地确定最佳的治疗方案,提高临床治疗效果。

结核分枝杆菌利福平耐药突变基因检测与BD960药敏的对比

目的分析对比结核分枝杆菌利福平PCR-反向点杂交法耐药基因突变位点检测和BACTEC MGIT960 System表型药敏结果的相关性。方法同时对220例住院患者的痰或肺泡灌洗液(BALF)用PCR-反向点杂交法检测利福平耐药基因突变位点与BACTEC MGIT 960 System检测利福平表型药敏结果进行对比分析。结果 2种方法检测利福平药敏结果符合205例,特异度93%(205/220);2种方法检测利福平都敏感的有172例;基因耐药,表型耐药的有33例,其中有3例检出rpo B基因H526位点突变,突变率9%;基因耐药,表型敏感的有15例,其中有11例均检出rpo B基因H526位点突变,突变率73%。结论 PCR-反向点杂交法检测具有快速高效、特异度高等特点,对临床诊断、治疗有指导意义。

结核耐药基因rpoB/katG/inhA早期筛查MDR-TB的临床研究

目的评估结核耐药基因rpo B/kat G/inh A筛查耐多药结核的可行性及临床意义。方法对2016年1月至2017年5月我科住院的228例肺结核患者分别采用结核耐药基因检测法和改良罗氏培养比例法检测利福平、异烟肼是否耐药,比较两种检验方法诊断的一致性。结果以改良罗氏培养比例法为金标准,228例患者中结核耐药基因检测法利福平耐药的灵敏度为88. 24%,特异度为97. 63%,异烟肼耐药的灵敏度为92. 31%,特异度为99. 01%。两法有较高的一致性(无统计学差异)。结论结核耐药基因rpo B/kat G/inh A可早期、快速、准确检测利福平、异烟肼的耐药性,可作为耐多药结核早期筛查的方法,对结核病防与治有重要意义。

差显技术分析结核杆菌H37Rv与H37Ra差异表达的基因

采用差异显示技术比较了结核分支杆菌强毒株H37Rv和弱毒株H37Ra在体外培养条件下的基因表达差异。通过20种引物组合进行mRNA差异显示,克隆到了两菌株间的20余个差异表达基因,经序列分析及杂交鉴定发现其中2个基因仅在H37Rv中表达。其中Rv1894 c基因编码的可能是H37Rv中的一个新蛋白。而在H37Ra的基因组中含有这2个基因的编码序列,但均未检测到基因的表达。

佳木斯地区某院Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌基因及利福平耐药基因阳性率情况分析

目的:分析佳木斯大学附属第一医院Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌基因检出率及利福平耐药率,为结核分枝杆菌的诊断和治疗方案的选择提供依据。方法:选取2018-08~2019-08佳木斯大学附属第一医院送检的标本237例,进行Xpert MTB/RIF检测,对其结核分枝杆菌基因检出率和利福平耐药率进行统计,并进行数据分析。结果:本次研究共检测标本237例,其中男123例,女114例,检出结核分枝杆菌阳性标本共34例,男15例,女19例,阳性率为14.35%;利福平耐药基因检测阳性标本共6例,男3例,女3例,利福平耐药率为17.65%。结核分枝杆菌检出率最高的前两个科室分别为呼吸科(16例,占47.05%),胸外科(9例,占26.47%)。结核分枝杆菌检出率最高的标本种类为痰液(18例,占52.94%),其次为肺泡灌洗液(10例,占29.41%)。结论:本院结核分枝杆菌检出率处于正常水平,利福平耐药率低于全国平均耐药率,应继续做好耐药检测和监测工作,以及耐药防控措施。

结核分枝杆菌glcB基因原核表达载体的构建、表达和纯化

目的构建结核分枝杆glcB基因原核表达载体，并进行表达，纯化。方法用PcR扩增结核分枝杆菌glcB基因，并克隆入pTA2质粒。测序正确后，再亚克隆入pET30a（＋）质粒，构建pET30a（＋）：glcB重组体。结果以重组体转化BL21（DE3）后，经0．4mM异丙基硫代-β．D．半乳糖苷（IPTG）诱导，表达出分子量为92KD重组蛋白。SDS—PAGE分析显示，IPTG诱导4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中，表达量占全菌蛋白质的50％。经Ni-NTA柱纯化，获得纯度为90％的重组蛋白。结论成功地构建原核表达载体pET30a（＋）：glcB，并获得GIcB重组蛋白，为血清学诊断活动性结核病奠定了基础。

北京和非北京基因型结核分枝杆菌生长曲线及mazEF系统的研究

目的研究北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达有无差异。方法测绘上述菌株及其mazEF3,6,9基因缺失和过表达菌株在标准、低氧和营养饥饿培养条件下的生长曲线。使用qRT-PCR技术检测各菌株的mazEF3, 6, 9、mazF3, 6,9和mazE3, 6,9基因mRNA表达水平;利用Western Blot技术检测MazF9蛋白表达水平。结果在标准和低氧条件下培养的第4、6、8、10 d,营养饥饿条件下培养的第2、4、6、8 d,北京基因型菌株的OD值(细菌数量)均高于非北京基因型菌株,差异有统计学意义(P<0.05);在上述3种培养条件下,北京和非北京基因型mazEF3,6,9缺失突变株和过表达株菌数均低于其亲本株。在mRNA、蛋白水平上,与非北京基因型菌株相比,北京基因型菌株mazEF3高表达9.55倍、mazF3高表达4.86倍、mazF6高表达2.64倍、mazF9高表达5.27倍和mazE9低表达0.16倍;mazF9蛋白高表达1.62倍,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达存在差异,mazEF系统与北京基因型菌株流行相关。

结核分枝杆菌喹诺酮类药物耐药与基因突变关系的研究

目的:探讨喹诺酮类药物的耐药性与结核分枝杆菌gyrA基因突变的关系。方法:采用比例法检测结核分枝杆菌中氧氟沙星耐药的菌株,并对氧氟沙星耐药菌株的gyrA基因的耐药决定区域进行序列测定。结果:175株结核分枝杆菌中,耐氧氟沙星菌株为30.9%(54/175),其中81.5%(44/54)的菌株gyrA基因的喹诺酮耐药决定区发生突变。结论:在结核病人中存在着较严重的耐喹诺酮药物情况,因此对结核病人选择喹诺酮药物治疗时,最好先进行喹诺酮药物的耐药检测,gyrA基因突变的检测可预测菌株对喹诺酮类药物的耐药表型。

耐药基因检测和T淋巴细胞斑点试验在老年结核性胸膜炎中的诊断价值

目的 探究结核分枝杆菌/利福平耐药基因检测(Xpert MTB/RIF)、结核感染T淋巴细胞斑点试验(T-SPOT.TB)用于诊断老年结核性胸膜炎的价值。方法 选取2018年3月~2020年12月收治的125例老年结核性胸膜炎患者作为研究对象(结核性胸膜炎组),以同期收治的102例老年非结核性胸膜炎胸腔积液患者为对照组,两组均进行Xpert MTB/RIF、T-SPOT.TB、抗酸染色、腺苷脱氨酶(ADA)、结核菌培养等检测,比较各诊断方法对老年结核性胸膜炎的诊断价值。结果 Xpert MTB/RIF、T-SPOT.TB的灵敏度、特异度和准确度均高于抗酸染色、ADA、结核菌培养的结果(P<0.05);Xpert MTB/RIF联合T-SPOT.TB诊断结核性胸膜炎的灵敏度、准确度高于Xpert MTB/RIF、T-SPOT.TB单独诊断(P<0.05)。结论 Xpert MTB/RIF联合T-SPOT.TB对老年结核性胸膜炎的诊断价值较高。

mazEF系统及生物膜对北京基因型结核分枝杆菌生存能力的影响

目的探索生物膜形成能力、mazEF3,6,9系统的表达与北京基因型结核分枝杆菌生存力的相关性。方法检测北京、非北京基因型菌株与标准毒力株H37Rv在不同培养条件下的生存力、生物膜形成能力。采用PCR技术扩增上述菌株的mazE3,6,9系统,并进行基因测序;使用荧光定量PCR检测所有菌株的mazEF3,6,9基因、mazF3,6,9毒素基因和mazEF3,6,9抗毒素基因的mRNA表达水平;利用WesternBlot技术检测MazF9蛋白表达水平。结果北京基因型菌株在不同培养条件下的生存力、生物膜形成能力高于非北京基因型菌株。北京、非北京基因型菌株mazF3基因193bp处发生碱基突变,由C突变为T。在mRNA表达水平上,与H37Rv相比,北京、非北京基因型菌株中mazE3低表达;非北京菌株中mazE6低表达,mazE9高表达(P<0.05)。与非北京基因型菌株相比,北京基因型菌株中mazEF3高表达、mazE9低表达、mazF3、mazF6、mazF9高表达,mazF9蛋白高表达(P<0.05)。结论北京基因型菌株具有较强的生存力和生物膜形成能力。mazEF系统的差异表达、生物膜成膜能力强可能与北京基因型菌株生存能力强相关。

不同支气管镜介导标本的结核分枝杆菌基因检测对痰涂片阴性肺结核患者的诊断价值

目的:不同支气管镜介导标本的TB-DNA检测痰涂片阴性肺结核价值分析。方法:以随机样本抽样法于痰涂片阴性肺结核患者中抽取60例,对其分别采用肺泡灌洗液提取标本、毛刷刷检收集痰液标本,之后采用荧光定量PCR法对其TB-DNA进行检测,对比两种介导标本的检测结果及不良事件发生率。结果:肺泡灌洗液提取标本阳性41例,阳性率68.33%;黏膜毛刷刷检提取标本阳性55例,阳性率91.67%,两种提取标本方法检测阳性率对比,差异有统计学意义(P<0.05)。两种介导标本方法不良事件发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与肺泡灌洗液提取标本相比,毛刷刷检收集标本TB-DNA诊断痰涂片阴性肺结核效能更显著。