药物敏感性试验与全基因组测序检测抗结核药物耐药性的比较研究

目的通过药物敏感性试验(DST)和全基因组测序(WGS)检测结核分枝杆菌(MTB)的耐药情况,比较二者一致性,探讨全基因测序用于MTB耐药性检测的特点。方法选取2018-2020年留存于四川大学华西医院共71例MTB临床分离株,采用DST(氧化还原指示剂法)和WGS两种方法对菌株进行异烟肼(INH)、利福平(RIF)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、莫西沙星(MFX)、氧氟沙星(OFX)、左氧氟沙星(LFX)、卡那霉素(KAN)、阿米卡星(AMK)、卷曲霉素(CPM)、乙硫异烟胺(ETH)、利福布汀(RFB)、对氨基水杨酸(PAS)和氯法齐明(CLO)共14种药物的耐药性检测,并对结果进行Kappa检验分析。结果两种方法对RIF、RFB、SM、MFX、OFX和LFX 6种药物耐药性检测的符合率均超过90.00%,Kappa值均大于0.80,一致性较好;INH和EMB耐药性检测的符合率分别为84.51%,81.69%,Kappa值分别为0.68和0.54,一致性一般;AMK和KAN两种方法检测的耐药株未超过2株,耐药率小于3.00%;CPM、ETH、PAS、CLO耐药性检测的符合率范围为61.97%~91.55%,Kappa值均小于0.40,一致性较差。结论WGS检测不同抗结核药物耐药性的能力存在差异,其检测RIF、RFB、SM、MFX、OFX和LFX 6种药物耐药性效果较佳,而检测其他抗结核药物耐药性与DST相比较仍存在一定差异,需要进一步明确相关药物的详细耐药机制,并对WGS用于耐药性分析的标准化进行探索。

微生物检验对慢性前列腺炎患者的耐药性分析

探究微生物检验对慢性前列腺炎患者的耐药性。方法:以简单随机抽样法选取2022年02月~2023年04月邯郸市第四医院110例慢性前列腺炎患者作为研究对象。采集患者标本进行病原微生物检验,观察病原体分布情况并分析药敏试验结果。结果:110例慢性前列腺炎患者标本中,共检出阳性43例,占39.09%。其中,屎肠球菌(13例)数量多,之后依次为大肠埃希菌(9例)、溶血葡萄球菌(6例)、表皮葡萄球菌(5例)、腐生葡萄球菌(4例)、肺炎克雷伯菌(3例)、普通变形杆菌(3例)。屎肠球菌、溶血葡萄球菌占比明显高于其他菌株(P<0.05)。病原菌药敏试验结果显示,病原菌对替加环素、利奈唑胺、环丙沙星、达福普丁、四环素、左氧氟沙星氯化钠注射液和红霉素均有一定程度的耐药,其中病原菌对替加环素的敏感性为79.07%,耐药性为9.30%,在所有检测的抗生物药物种类中敏感性高,耐药性低。且达福普丁、四环素及左氧氟沙星氯化钠注射液耐药性分别为39.53%、37.21%及37.21,耐药性较高。结论:微生物检验对慢性前列腺炎患者进行耐药性分析,有利于更准确地评估患者病情,确定更适合的用药方案,对治疗效果提升具有积极作用,值得应用推广。

小儿尿路感染的病原微生物分布及其药物敏感性试验分析

目的探讨小儿尿路感染的病原微生物分布及常见抗菌药物的药物敏感性(简称药敏)试验。方法回顾性分析医院儿科收治的132例尿路感染患儿的临床资料,探讨其病原微生物分布情况及抗菌药物药敏试验情况。结果 132例患儿尿液共培养出141株菌株,其中,革兰阴性菌占比最高(85.11%),排前3位的菌株分别为大肠埃希菌(68.79%)、奇异变形杆菌(6.38%)及肺炎克雷伯菌(4.96%);革兰阳性菌共19株(13.48%),排前2位的菌株为粪肠球菌(7.09%)和屎肠球菌(4.26%);同时,在尿菌培养中还培养出真菌2株(1.42%)。革兰阴性菌感染时首选头孢哌酮舒巴坦治疗,病情较严重患儿应尽早采用美罗培南治疗;革兰阳性菌感染时首选阿莫西林克拉维酸钾治疗,美罗培南和万古霉素仅对急危重症感染患儿应用。结论导致小儿尿路感染的病原微生物主要为大肠埃希菌,同时,观察常见抗菌药物的药敏试验可用于指导临床用药的选择。

结核分枝杆菌表型药物敏感性试验临界浓度设定发展历程

结核分枝杆菌表型药物敏感性试验仍是耐药性检测的重要手段,但某些药物结果的准确性和可重复性较差,临界浓度是影响结果的关键因素之一。笔者对结核分枝杆菌表型药物敏感性试验临界浓度的建立及修订过程进行系统总结和介绍,为实验室技术人员和临床医生正确理解药物敏感性试验方法及结果,以及加强更新临界浓度的研究提供借鉴。

同种细菌不同菌株微生物敏感性试验结果的差异分析

目的:分析同种细菌不同菌株微生物敏感性试验结果的差异。方法:选取2014年11月-2015年11月期间临床送检经初步鉴别需行微生物敏感性的试验细菌培养样本50例,从每一例标本培养基上选择形态相同的2个菌落,分别实施分纯培养,然后把分纯培养以后的细菌经BDPHOENIX全自动化微生物鉴定药敏分析系统进行细菌鉴定,并把每一种细菌选用9个临床常用抗菌药采用纸片扩散法(K‐B)实行微生物敏感性试验。结果:50例标本中分离出的细菌主要包含金黄色葡萄球菌(10组)、肺炎克雷伯菌(5组)、粪肠球菌(4组)、阴沟肠杆菌(3组)、铜绿假单胞菌(8组)、大肠埃希菌(14组)、鲍氏不动杆菌(6组)。而存在微生物敏感性试验结果不一致的样本有12组,分别是:金黄色葡萄球菌3组(30.00%)、肺炎克雷伯菌2组(40.00%)、铜绿假单胞菌3组(3.75%)、大肠埃希菌4组(35.71%)。结论:进行分离目的菌单个菌株微生物敏感性的试验,对于临床研究有重要意义。

奶牛乳房炎的微生物学诊断及药物敏感性试验

调查陕西规模化牛场奶牛乳房炎常见病原微生物及其对药物的敏感性，为防治耐久性乳房炎提供参考。从陕西某牛场发病症状典型的乳房炎牛中，无菌操作采乳样20份，经细菌的生物学特性检验和生理生化试验，

同种细菌不同菌株微生物敏感性试验结果差异的研究

目的调查临床送检的细菌培养标本中是否存在同种细菌不同菌株微生物敏感性试验结果不一致的现象,为临床抗菌药的使用提供可靠依据。方法随机选择临床送检的经初步鉴别需要进行微生物敏感性试验的细菌培养样本40例,从每例标本的培养基上选取形态相同的2个菌落分别进行分纯培养,再将分纯培养后的细菌分别经BD PHOENIX全自动微生物鉴定药敏分析系统进行细菌鉴定,同时将每种细菌选用9个临床常用的抗菌药采用纸片扩散法(K-B)进行微生物敏感性试验。结果40例标本中分离出的细菌包括金黄色葡萄球菌(7组)、粪肠球菌(2组)、大肠埃希菌(10组)、阴沟肠杆菌(2组)、肺炎克雷伯菌(6组)、铜绿假单胞菌(9组)、鲍氏不动杆菌(4组)。存在微生物敏感性试验结果不一致的有12组样本,分别是:金黄色葡萄球菌2组(28.6%),铜绿假单胞菌4组(44.4%),大肠埃希菌3组(30.0%)及肺炎克雷伯菌3组(50.0%),组间差异无统计学意义(P>0.05)。革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌的不一致发生率分别为22.2%(2/7)、32.3%(10/21),二者差异也无统计学意义(P>0.05)。结论尽可能分离目的菌单个菌株进行微生物敏感性试验十分必要。

2017—2022年临床微生物室间质量评价结果分析

目的 分析2017—2022年上海市临床检验中心参加国家卫生健康委临床检验中心临床微生物室间质量评价(EQA)数据,探讨存在的问题。方法 按照国家卫生健康委临床检验中心EQA活动要求,使用常规检测方法在规定时间内完成临床微生物培养和鉴定、体外药物敏感性试验,并通过网络形式报告结果。对回报结果进行总结和分析。结果 共培养和鉴定出病原菌91株(革兰阳性球菌24株、革兰阳性杆菌5株、革兰阴性球菌4株、革兰阴性杆菌39株、真菌13株、放线菌5株、分枝杆菌1株),鉴定正确率为100%。对38株病原菌进行212种抗菌药物体外敏感性试验,其中209种结果正确,正确率为98.58%。结论 上海市临床检验中心微生物研究室病原菌的分离培养和鉴定符合率较高,但对部分少见菌的体外药物敏感性试验方法缺乏了解,应加强对相关指南的学习和掌握。

糖尿病合并泌尿系感染患者微生物分布及药物敏感性试验结果

目的探讨糖尿病合并泌尿系感染患者微生物分布及药物敏感性试验结果。方法选择2014年2月—2014年6月该院收治的291例糖尿病合并泌尿系感染患者的尿液标本进行研究。结果 291例标本共分离出296株细菌,296株病原菌中,27株真菌未进行药敏试验,其余269株病原菌中,大肠埃希菌对青霉素类具有较高的耐药性。结论糖尿病合发泌尿系感染病原菌大多为革兰阴性菌和革兰阴性菌,且耐药菌株增加。临床治疗要注意结合病原菌种类和药敏结果选择合理的抗菌药物进行治疗。

梅里埃VITEK 2全自动微生物鉴定药敏分析系统性能评估

评价梅里埃VITEK 2全自动微生物鉴定药敏分析系统的性能。选取卫生部室间质评菌株20株,统计分析鉴定结果的正确性、药敏结果。结果:鉴定重复率为100%,正确率为100%,药敏结果符合率为100%。梅里埃VITEK 2比VITEK 2 COMPACT全自动微生物鉴定及药敏分析系统操作更便捷、更准确率,微生物检测质量更佳。

PCR荧光探针技术对结核分枝杆菌复合群及利福平耐药性检测性能的评价

目的:评价PCR荧光探针技术检测痰液样本中结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)和利福平耐药性效果,为进一步开展“结核分枝杆菌复合群及利福平耐药核酸检测试剂盒”多中心临床试验提供可行性研究数据。方法:采用前瞻性研究方法,参照入组标准收集2021年12月至2022年8月上海市3家结核病定点医院肺科门诊就诊的205例初诊疑似肺结核患者的3份痰液样本(即时痰、夜间痰、晨痰),分别进行痰涂片、BACTEC MGIT 960(MGIT 960)、GeneXpert MTB/RIF(Xpert)和PCR荧光探针法检测,评价PCR荧光探针法对痰液样本中MTBC及利福平耐药性的检测效能。另对随机选取同期上海市疾病预防控制中心结核病实验室菌株库中保存的96株MTBC临床菌株(包括利福平表型耐药菌株47株和利福平表型敏感菌株49株)分别进行PCR荧光探针法和Xpert检测利福平耐药性,分析两种检测方法对利福平耐药相关基因突变的检出情况。结果:205例疑似肺结核患者中,PCR荧光探针法对MTBC的检出率为22.44%(46/205),与MGIT 960[21.95%(45/205)]、Xpert[20.98%(43/205)]和痰涂片[16.10%(33/205)]的差异均无统计学意义(χ^(2)=0.014,P=0.904;χ^(2)=0.129,P=0.719;χ^(2)=2.650,P=0.104)。以临床诊断为参照标准,PCR荧光探针法、Xpert、MGIT 960和痰涂片检测MTBC的敏感度(95%CI)分别为48.10%(36.93%~59.56%)、48.10%(36.93%~59.56%)、50.63%(39.23%~61.97%)和40.51%(29.79%~52.15%),特异度(95%CI)分别为93.65%(87.47%~97.12%)、96.03%(90.52%~98.53%)、96.03%(90.52%~98.53%)和99.21%(95.01%~99.96%),一致率分别为76.10%(156/205)、77.56%(159/205)、78.54%(161/205)和76.59%(157/205),Kappa值分别为0.453、0.482、0.507和0.446。PCR荧光探针法检测痰液样本中MTBC的涂阴和极低级别阳性样本的检出率[10.73%(19/177)]与Xpert检测结果[8.47%(15/177)]的差异无统计学意义(χ^(2)=0.793,P=0.373)。PCR荧光探针法在检出MTBC的46份样本中同时检出6份样本发生利福平耐药基因突变,突变率为13.04%(6/46);而Xpert在检出MTBC的43份样本中仅同时检出1份样本发生利福平耐药基因突变,突变率为2.33%(1/43)。在96株临床菌株中,两种分子检测方法均检测到56株菌株发生利福平耐药基因突变,除2株探针突变类型不一致外,其他探针突变类型均一致,且多发生在probe E(529~533)和FAM通道(531/533突变)。结论:以临床诊断为参照标准,PCR荧光探针法检测MTBC的效能与MGIT 960、Xpert和痰涂片基本相当,且与Xpert检测MTBC临床菌株的利福平耐药性效果一致,认为PCR荧光探针法不仅是一种等同于Xpert检测功能的新技术,还具有操作简单、价格低于Xpert、真正实现一体化和全封闭等优势。建议在临床推广过程中进一步优化PCR荧光探针法以提高MTBC检出率,并开展多中心临床试验验证研究。

比较Epsilometer试验法和琼脂稀释法检测幽门螺杆菌对甲硝唑的敏感性

目的:以琼脂稀释法为金标准,评价Epsilometer试验(Epsilometer test,E-test)法检测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对甲硝唑敏感性的一致性。方法:纳入2018年8月至2020年7月因消化不良症状就诊于北京大学第三医院行胃镜检查的H.pylori感染初治患者,取胃黏膜组织活检行H.pylori培养,分别采用E-test法和琼脂稀释法检测H.pylori对甲硝唑的敏感性,比较两种方法检测结果的一致性和相关性。结果:成功培养105株H.pylori,将最小抑菌浓度≥8 mg/L定义为耐药。琼脂稀释法检测甲硝唑耐药菌株68株,耐药率64.8%,E-test法检测耐药菌株66株,耐药率62.9%,其中,琼脂稀释法和E-test法检测均为耐药的菌株66株,均为敏感的菌株37株,两种方法的一致率为98.1%。2例菌株被琼脂稀释法评价为耐药,而E-test法评价为敏感,非常严重错误率为1.9%。没有菌株被琼脂稀释法评价为敏感,而E-test法评价为耐药(严重错误率为0%)。以琼脂稀释法为金标准,E-test法检测甲硝唑耐药的灵敏度为97.1%(95%CI:0.888~0.995),特异度为100%(95%CI:0.883~1.000)。Cohen’s kappa系数为0.959(95%CI:0.902~1.016,P<0.001),Spearmans相关性检测r=0.807(P<0.001)。采用Bland-Altman法进行一致性评价,结果提示较好,未出现一致性区间外的测值。E-test法比琼脂稀释法的成本更低,平均完成1例试验两者的成本分别为269.8元和356.6元。结论:E-test法检测H.pylori对甲硝唑的药敏试验与琼脂稀释法相比具有较强的一致性,E-test法省时、省力、价廉,可以作为H.pylori药敏试验的优选检测方法。

178例前列腺炎患者前列腺液微生物培养及耐药性试验分析

目的了解近年来前列腺患者前列腺液培养中细菌的分布及对抗生素的耐药情况,为系统、规范地综合治疗前列腺炎提供可靠依据。方法对178例患者的前列腺液进行细菌培养,采用一种鉴定板进行细菌鉴定和药敏试验。结果 178例标本分离出细菌98株,50例标本无菌生长(33.78%)。结论在治疗慢性前列腺炎时,应根据药敏结果合理、规范地使用抗生素,以控制耐药菌株的产生,必需增加一些特殊培养基及设备以提高病原菌的检出率。

基因芯片和比例法药物敏感性试验检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的比较研究

目的比较基因芯片和比例法药物敏感性试验在检测结核分枝杆菌(MTB)对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性中的应用,探讨快速诊断耐多药结核病(MDR-TB)的方法。方法从改良罗氏培养基上分离的327株菌株,分别用基因芯片检测MTB对RFP和INH耐药相关的rpoB、katG和inhA基因上8个位点的基因突变,从而判断其耐药性;同时用比例法药物敏感性试验检测MTB对RFP和INH耐药性,比较2种方法的符合率。进一步从二者RFP或/和INH结果不符的标本中随机选出16株菌株做DNA序列测定,比较二者与DNA测序的符合率。结果基因芯片和比例法药物敏感性试验检测MTB对RFP耐药性符合率为93.27%,对INH耐药性符合率为95.11%,RFP和INH的总符合率为90.52%;二者对MDR-TB的检出率分别为18.65%和18.96%。基因芯片与DNA测序比较,RFP耐药性符合率为81.25%,INH耐药性符合率为100.00%;比例法药物敏感性试验与DNA测序比较,RFP耐药性符合率为50.00%,INH耐药性符合率为37.50%。结论基因芯片检测MTB对RFP和INH的耐药性较比例法药物敏感性试验有更高的敏感性和特异性,对MDR-TB的快速诊断具有重要临床价值。

表型药物敏感性试验与GeneXpert MTB/RIF在耐药脊柱结核诊断中的作用

目的分析表型药物敏感性试验(简称“表型药敏试验”)与GeneXpert MTB/RIF在耐药脊柱结核诊断中发挥的作用。方法回顾性分析2015—2018年首都医科大学附属北京胸科医院514例临床诊断为脊柱结核的患者资料,通过穿刺或外科手术获得病灶中的脓液、肉芽组织及干酪样坏死组织,并以无淀粉改良罗氏培养和浓度法进行结核分枝杆菌培养和表型药敏试验,同时进行GeneXpert MTB/RIF检测。结果 514例患者中,男260例(50.6%),女254例(49.4%);年龄1~86 岁,平均(46.2±18.7)岁;腰椎结核200例(38.9%),胸椎结核186例(36.2%),腰骶椎结核60例(11.7%),胸腰段结核46例(8.9%),颈椎结核14例(2.7%),颈胸段结核8例(1.6%)。109例培养阳性并获得表型药敏试验结果,阳性率为21.2%;检出耐药患者25例(4.9%,25/514),其中耐多药结核病(MDR-TB)和广泛耐药结核病(XDR-TB)患者9例,占阳性患者的8.3%。GeneXpert MTB/RIF阳性383 例(74.5%),其中发现rpoB突变47 例(9.1%,47/514),包括表型药敏试验检出的9例MDR-TB和XDR-TB患者。结论脊柱结核病灶中耐药结核分枝杆菌通过表型药敏试验检出率偏低,不能及早发现耐药结核病患者,通过GeneXpert MTB/RIF方法可尽早发现更多耐药结核病患者。

VITEK2全自动微生物分析系统药敏检测结果准确性探讨

目的评价VITEK2分析系统的药敏结果的准确性,以判断其药敏结果能否满足临床需求。方法用VITEK2试卡法和K-B法同时检测51株肠杆菌科菌、24株鲍曼不动杆菌、27株铜绿假单胞菌以及20株葡萄球菌,并将VITEK2试卡法检测结果与参考方法K-B法进行对照分析。结果通过对1396株细菌-抗生素组合的检测,试卡法与K-B法的标准符合率(CA)为91.47%,严重错误(VME)为2.04%,重大错误(ME)为3.47%,一般错误(MIE)为5.95%。结论VITEK2全自动微生物分析系统的药敏结果具有较高的准确性,与K-B法有较好的关联,能满足临床的要求。该系统具有受人为因素的影响较小、操作简便、快速、重复性高的特性,可作为临床实验室常规药敏检测的选择方法。在进行甲氧苄啶/磺胺甲异噁唑的敏感性检测时,试卡法更为可靠。在进行部分药物(亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦以及苯唑西林)的敏感性检测时建议同时加做K-B法检测。

GeneXpert MTB/RIF检测利福平耐药结核分枝杆菌的表型药物敏感性试验耐药情况

目的分析经GeneXpert MTB/RIF(简称"Xpert")诊断的利福平耐药结核分枝杆菌分离株的表型药物敏感性试验(简称"表型药敏试验")耐药情况及耐药类型。方法采用回顾性研究的方法,搜集2015年1月至2020年12月深圳市第三人民医院经Xpert确诊的346例利福平耐药肺结核患者(初、复治患者分别为142例和204例),分析其结核分枝杆菌临床分离株对10种抗结核药品(利福平、异烟肼、链霉素、利福布汀、乙胺丁醇、左氧氟沙星、对氨基水杨酸、阿米卡星、丙硫异烟胺、卷曲霉素)的表型药敏试验耐药情况及耐药类型。结果 346株利福平耐药结核分枝杆菌分离株对10种抗结核药品的表型药敏耐药率由高至低依次为利福平(95.95%,332/346)、异烟肼(84.68%,293/346)、链霉素(58.38%,202/346)、利福布汀(57.23%,198/346)、乙胺丁醇(50.29%,174/346)、左氧氟沙星(34.39%,119/346)、对氨基水杨酸(11.85%,41/346)、阿米卡星(10.69%,37/346)、丙硫异烟胺(5.78%,20/346)、卷曲霉素(5.20%,18/346)。其中,复治患者分离株对异烟肼、左氧氟沙星、乙胺丁醇、阿米卡星的耐药率[分别为88.24%(180/204)、40.69%(83/204)、55.39%(113/204)、13.73%(28/204)]均明显高于初治患者分离株[分别为79.58%(113/142)、25.35%(36/142)、42.96%(61/142)、6.34%(9/142)],差异均有统计学意义(χ^(2)=4.838,P=0.028;χ^(2)=8.725,P<0.01;χ^(2)=6.372,P=0.012;χ^(2)=4.784,P=0.029)。耐药类型分析显示,菌株的耐多药率为84.68%(293/346),含左氧氟沙星耐药和二线注射剂耐药的准广泛耐药率分别为26.30%(91/346)和5.20%(18/346),广泛耐药率为6.65%(23/346);其中,复治患者分离株的耐多药率[88.24%(180/204)]、准广泛耐药率[37.75%(77/204)]均明显高于初治患者分离株[分别为79.58%(113/142)和22.54%(32/142)],而复治利福平单耐药率[11.76%(24/204)]明显低于初治患者分离株[20.42%(29/142)],差异均有统计学意义(χ^(2)=4.147,P=0.042;χ^(2)=8.976,P<0.01;χ^(2)=4.838,P=0.028)。结论经Xpert诊断的利福平耐药结核分枝杆菌对异烟肼、左氧氟沙星的耐药率也较高,尤其是复治患者,应尽早对Xpert诊断的利福平耐药肺结核患者进行异烟肼及氟喹诺酮类药物的快速耐药检测,以指导临床用药。

MGIT 960系统行二线抗结核药物敏感性试验的实用性评价

目的评价全自动BACTEC MGIT 960系统在结核分枝杆菌二线抗结核药物(second-line anti-TBdrugs,SLD)药敏试验中的实用性。方法本实验纳入患者435例。该纳入患者均通过痰涂片抗酸染色(萋-尼法)镜检,L-J固体和MGIT 960系统液体培养及鉴定,共筛查出阳性菌株212例。212例阳性菌株分别进行一线抗结核药物异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(S)和乙胺丁醇(EMB)的耐药性试验,其中耐药菌株(所有耐药株)118例。以118例耐药株作为SLD药敏试验实验株,应用L-J和MGIT 960两种方法分别进行卷曲霉素(Cm)、卡那霉素(Km)、氧氟沙星(Ofx)和乙硫异烟胺(Eto)的药物敏感性试验,并计算出两方法药敏试验所需的时间和符合率;L-J和MGIT960两种培养方法的比较采用配对设计的卡方检验;两种方法检测结果的一致性用Kappa值检验判别。结果MGIT 960系统药敏试验所需时间平均10.0d(1183/118),L-J固体培养法所需时间平均28.5d(3360/118),两者相差18.5d。MGIT 960与L-J培养法的SLD Cm、Km、Ofx和Eto敏感及耐药符合率和一致性检验Kappa值分别为88.1%(104/118)和0.520;95.8%(113/118)和0.815;91.5%(108/118)和0.824;71.2%(84/118)和0.375。结论MGIT 960系统液体培养法常用SLD药敏试验与金标准(L-J培养)比较除Eto外符合率高、一致性好;该方法检测快速、准确,具有很强的实用性,可作为结核分枝杆菌快速培养和药敏试验的新方法。

利福平耐药结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物表型耐药与其基因突变的一致性研究

目的:研究利福平耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones,FQs)耐药基因突变特征与FQs最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的关系。方法:选取2016—2021年北京市结核病防治机构及定点医院收治的利福平耐药结核病(rifampicin resistant tuberculosis,RR-TB)患者分离培养阳性菌株进行微孔板法药物敏感性检测,总结RR-TB患者菌株对左氧氟沙星(levofloxacin,Lfx)和莫西沙星(moxifloxacin,Mfx)的MIC值;同时进行一代测序。分析FQs耐药相关基因gyrA和gyrB突变特征与FQs MIC之间的关系;以表型药物敏感性试验(phenotypic drug susceptibility testing,pDST)结果为参照标准,评价基因型药物敏感性试验(genotypic drug susceptibility testing,gDST)对FQs耐药的检测效能;探讨RR-MTB对FQs表型耐药与基因型耐药差异的原因。结果:303株RR-TB患者菌株中,FQs pDST耐药率为27.7%(84/303),gyrA基因突变检出率为25.1%(76/303),未检测到gyrB基因突变。以pDST结果为参照标准,gDST检测RR-MTB的FQs耐药性的敏感度和特异度分别为84.5%(71/84;95%CI:74.6.1%~91.2%)和97.7%(214/219;95%CI:94.5%~99.1%)。两种方法结果不一致的菌株有25株,不一致率为8.3%(25/303)。FQs耐药菌株的MIC主要为2μg/ml,最常见的突变位点发生在第94位点(53.9%,41/76),gyrA基因在第88和94位点突变与pDST耐药完全一致,而第90和91位点突变的pDST耐药一致率分别为95.8%(23/24)和3/5。第88位点的突变与Lfx pDST耐药相关,与Mfx pDST高浓度耐药相关;第90位点的突变以丙氨酸转变为缬氨酸为主(92.3%,24/26),该突变发生的Lfx和Mfx最低MIC为临界浓度(1μg/ml和0.25μg/ml)。第94位点天冬氨酸突变为天冬酰胺均为Lfx和Mfx高浓度耐药(1/1),该位点天冬氨酸突变为酪氨酸与Lfx耐药(1/1)相关,与Mfx高浓度耐药相关(1/1)。结论:北京地区RR-MTB的FQs耐药的主要机制是gyrA基因突变,不同gyrA基因突变提示FQs耐药水平存在差异。FQs pDST和gDST检测RR-MTB的结果高度一致,可及早应用gDST检测RR-TB患者的FQs的耐药性,以指导临床制定合理治疗方案。

1819株非结核分枝杆菌行药物敏感性试验的结果分析

目的对广州市1819株非结核分枝杆菌临床分离株行药物敏感度试验的结果进行回顾性分析,为临床第一线治疗非结核分枝杆菌病提供可靠的科学依据。方法按照中国防痨协会制定的《结核病诊断实验室检验规程》,对2009—2011年来自广州市胸科医院门诊就诊和住院患者以及少部分院外单位在实验室中从痰液、支气管冲洗液、胸腹腔积液、尿液以及咽拭子等样品培养出的14 095株分枝杆菌进行菌型鉴定,对确认为NTM的实验菌株3264株,选择没有混合感染的株种1819株采用临床上常用的一、二线药物(包括INH、RFP、S、EMB、Am、Clr、Lfx、Mfx、环丙沙星(CIP)、力克菲蒺、Rfb、Pto和Cm共计13种药物)进行敏感度试验。结果非结核分枝杆菌对INH和力克菲蒺耐药率达96.15%(1749/1819)和95.41%(1248/1308);其他依次为S 76.25%(1387/1819)、Pto 73.94%(817/1105)、Lfx 72.94%(954/1308)、RFP 72.51%(1319/1819)、EMB 70.42%(1281/1819)、Mfx65.29%(854/1308)、CIP 60.13%(543/903)、Rfb 56.87%(236/415)和Cm 50.50%(102/202);而Clr和Am对非结核分枝杆菌的敏感率为88.17%(1163/1319)和67.73%(892/1317)。结论非结核分枝杆菌对一线抗结核药物具有高度的原始耐受性,而大环内酯类的Clr和氨基糖甙类的Am则对非结核分枝杆菌有较强的抑菌效能,因而对实验室中分离出的非结核分枝杆菌有必要进行药物敏感度试验。