MIRU技术在石河子地区部分结核杆菌基因分型聚类分析中的初步应用

目的采用结核杆菌散在分布重复单位(mycobacterial interspersed repetitive units,MIRU)分型技术,对石河子地区结核杆菌临床分离株进行基因分型及聚类分析,初步筛选可用于石河子地区结核杆菌临床分离株基因分型的MIRU位点。方法以本实验室保存的结核杆菌临床分离株基因组DNA为模板,采用PCR技术与核酸凝胶电泳技术,分别对7个MIRU位点进行检测,计算分辨指数,应用ntsys2.10e软件对菌株基因型进行聚类分析。结果石河子市33株临床分离株有22种基因型,均与结核杆菌标准株(H37Rv)不同;在石河子地区结核杆菌临床分离株的7个MIRU位点中,分辨率高的位点有1个(MIRU26);中等有2个(MIRU10,MIRU16);低的有3个(MIRU23,MIRU39,MIRU40);有一个位点分辨率为0(MIRU27);石河子地区分离株总HGI指数为:0.966。结论本实验选取的7个MIRU位点中有3个(MIRU26,MIRU10和MIRU16)可用于石河子地区结核杆菌临床分离株初步基因分型。

结核分枝杆菌Mtub-39位点多态性与下游基因表达关系的研究

目的分析结核分枝杆菌(MTB)北京型菌株及非北京型菌株5个有明显差异的MTB散在分布重复单位(MIRU)位点,研究其多态性与下游基因表达的关系。方法利用生物信息学方法预测5个MIRU位点(ETR-C、Mtub-30、Mtub-39、MIRU-27、MIRU-40)下游相邻基因启动子区域。通过PCR方法扩增该区域并与分枝杆菌启动子探针载体pMC210连接,重组质粒测序正确后,用电穿孔方法转化耻垢分枝杆菌mc2155。采用Real-Time PCR技术检测报告基因lacZ的转录水平,验证MIRU位点多态性对其下游基因表达的影响。结果 Mtub-39位点核心区域内含有其下游基因的启动子。成功构建了分别带有1、3、5个拷贝重复序列的Mtub-39位点的重组质粒。Real-Time PCR结果显示,有多态性的Mtub-39位点(pMC210-Mtub-39-N158、pMC210-Mtub-39-N139及pMC210-Mtub-39-N146)对报告基因lacZ的转录调控差异有统计学意义(P=0.006 5)。结论 Mtub-39位点的多态性能明显影响下游基因启动子的活性进而调节其表达。

分枝杆菌散在分布重复单位分型法在分辨北京株结核分枝杆菌基因分型中的初步研究

随机按比例抽取武汉市结核病防治所2005年7—12月肺结核病患者的菌株，为评估分枝杆菌散在分布重复单位（MIRU）方法对北京家族株的分辨能力进行分型分析。

2005—2006年奥地利难民中一次耐多药结核病的爆发

背景:2005—2006年奥地利结核病参比室验室确诊了4例菌株基因型相同的耐多药结核病患者。目的:明确耐多药结核菌传播途径。方法:通过查阅结核报告记录和医院出院单进行流行病学病例研究。结果:2004年6月,这个耐多药菌群中的原发病例(38岁),在因非法移民被扣留7个月后,最初被诊断为非耐多药结核病。到2005年3月,他有4个月失访。2005年6月他被诊断为肺和喉部的耐多药结核。出院后,这个病例又出现了失访,直到2006年4月,他因复发耐多药结核再次入院。2006年4月3例和原发病例有相同菌型的耐多药肺结核病例被确诊:原发病例5岁的女儿和25岁的朋友及朋友6个月的儿子。结论:由于奥地利耐多药结核病(MDR-TB)源于HIV阴性群体,显然有必要实施国家指南进行MDR-TB的管理。