结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径

目的 :探讨Ras Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径。方法 :分离获取PBMC ,用佛波醇酯 (PMA)和离子霉素 (IM) ,CD3mAb或Mtb Ag刺激不同时间 ,或PBMC先经PD980 5 9处理后再刺激培养 ;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD6 9分子的表达 ;计数培养扩增 10天的细胞数量。结果 :PBMC用PMA +IM刺激 6小时 ,总T细胞和γδT细胞中的CD6 9表达均达高峰 (均 >99% ) ,用CD3mAb刺激 2 4小时 ,均达高峰 (均在 5 5 %左右 ) ,用Mtb Ag刺激 2 4小时 ,亦均达高峰 ,但总T细胞和γδT细胞中CD6 9分别为 16 .0 %和 75 2 % ;用PD980 5 9预处理PBMC ,可明显抑制Mtb Ag激活的γδT细胞CD6 9表达和γδT细胞的增殖。结论 :Mtb Ag可特异性激活γδT细胞 ,其活化信号转导需通过Ras Erk通路。

结核杆菌特异性抗原对结核病诊断价值研究

目的评价结核杆菌特异性抗原对结核病的诊断价值。方法分别以CFP10-ESAT6、38k Da、Ag85B、Hsp X单一或联合采用ELISA实验,计算敏感度、特异度、符合率、Youden指数。结果 38KDa+CE、38k Da+Hsp X、38k Da+CE+Hsp X,灵敏度、特异度、符合率均在72%以上;38k Da+CE+Hsp X联合诊断,实测敏感度达80.39%、特异度18.99%,X线片结核空洞影敏感度97.06%(33/34)。结论单一与联合结核杆菌特异性抗原效用存在一定差异,38k Da+CE+Hsp X诊断效用相对较好。

结核杆菌特异性抗原对结核病诊断价值的研究

目的评价结核杆菌特异性抗原诊断结核病(TB)的价值。方法对125例疑似TB患者,均进行完整的检查,评价痰涂片、结核菌素(PPD)皮试、抗酸染色阳性、X线诊断效用,并以t-spot-tb检测人培养滤液蛋白10(CFP-10),评价CFP-10在辅助诊断中的应用价值。结果确诊TB患者74例,抗酸染色阳性率63.51%(47/74)、痰细菌培养阳性率68.92%(51/74)、PPD皮试阳性率50.00%(37/74)、X线片阳性率50.00%(37/74),抗酸染色阳性、痰细菌培养阳性患者中抗CFP-10阳性率分别为83.98%(39/47)、90.20%(46/51),低于PPD皮试阳性中抗CFP-10阳性率100.00%(37/37)、X线片阳性中抗CFP-10阳性率100.00%(37/37),差异具有统计学意义(P<0.05);据痰涂片、PPD皮试、抗酸染色阳性、X线诊断未明确诊断11例,CFP-10诊断阳性率100.00%(11/11)。结论结核杆菌特异性抗原血清学诊断,可作为TB常规诊断辅助技术,有助于诊断常规方法诊断不明者,且不易受其他因素干扰,在早期活动性TB诊断中具有较高应用价值。

特异单克隆抗体检测结核杆菌抗原的研究

特异单克隆抗体检测结核杆菌抗原的研究王春俭，李登旭，彭义利，朱宝玉，姚党生，马士文，韩国兴目前，对结核病免疫学诊断研究较少。本文研制的结核菌特异性单克隆抗体，应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测患者分泌物中结核菌抗原，以进行结核病的诊断和鉴别诊断。１材料与方...

问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定

目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增候选T/B联合表位片段,采用噬菌体展示及SDS-PAGE等技术获得含不同T/B联合表位的重组P。分别以rLipL41/1和rLipL41/2抗血清、黄疸出血群赖型赖株全菌抗血清和钩体患者血清为一抗,采用Western Blot检测各抗血清与各重组P免疫杂交反应性。结果:根据预测结果选择了LipL41s中8个共有或差异T/B联合表位。经PCR扩增获得了上述T/B联合表位片段。各T/B联合表位片段均准确插入噬菌体P蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述8个T/B联合表位,但其WesternBlot杂交信号强度存在差异,其中共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233与不同抗血清的信号较强且稳定。结论:所选择的8个T/B联合表位均为LipL41的有效抗原表位。共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233可作为钩体MAP疫苗的首选抗原表位。差异T/B联合表位LipL41s-89和LipL41s-299与不同抗血清有免疫交叉现象。

FD结核病诊断试剂盒检测结核杆菌杭体

目前用于结核病检验的常规方法,由于灵敏度差,如痰涂片(AFB)法,一次检查阳性率仅为30％～40％,结核杆菌培养,需6～8周才获得结果,结核菌素皮试法及ELISA法,其特异性尚不能令人满意,PCR法价格昂贵,操作复杂,需一定的设备条件方可开展,FD结核病诊断盒将结核杆菌特异性抗原(LAM)固相在特制的载体上,当被检样品中含有一定量的结核杆菌的抗体(LAM抗体)时,使以载体上的特异性抗原(LAM)结合成抗原抗体复合物,复合物再与标记有相应“二抗”的胶体金试剂作用,而形成红色或紫红的圆形斑点,故呈现红色或紫红色斑点为阳性结果。结核杆菌抗体,结核病患者和大多数健康人的血液中都含有抗结核杆菌抗体、但其含量,前者显著高于后者。

结核杆菌热休克蛋白70-乙型肝炎表面抗原诱导特异性免疫反应

目的 研究体外构建结核杆菌热休克蛋白和乙型肝炎表面抗原复合物(HSP70-HBsAg)诱导针对乙型肝炎表面抗原特异性免疫反应能力,为该复合物的临床应用奠定基础。 方法 考察体外构建HSP70-HBsAg复合物是否能引起小鼠的体液和细胞免疫;将复合物负载树突状细咆(D C),D C激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL),检测其杀伤HepG2-S细胞的能力。 结果 HSP70-HBsAg复合物能引起小鼠的体液免疫和细胞免疫;HSP70-HBsAg和HBsAg均可诱导CD 81 T淋巴细胞的特异性CTL,而前者的诱导效果更强。 结论 体外构建的HSP70-HBsAg蛋白复合物具有免疫原性,HSP70可以增强抗原蛋白诱导特异性免疫反应的能力,HSP70～HBsAg有望作为蛋白疫苗用于临床慢性乙型肝炎的免疫治疗。

人γδT细胞TCR分子与结核杆菌多肽抗原特异性结合的证据

目的 探讨γδT细胞对结核杆菌抗原 (Mtb Ag)识别的分子机制。方法 采集人外周血 (PB) ,分别经抗TCRγδ PE和FITC标记的Mtb Ag及其纯化的不同组分 ,结核杆菌高分子量蛋白组分 (Mtb HW Ag)、低分子量多肽组分 (Mtb LW Ag)或Mtb Ag峰 3单一主肽抗原 (Mtb Ag Pk3)进行双标记染色 ,或使用过量Mtb Ag先与细胞预处理 ,然后再做上述染色 ,用流式细胞仪检测γδT细胞上结合的抗TCRγδ PE荧光强度变化。将人外周血PBMC经Mtb Ag刺激 2 4h后 ,使用抗TCRγδ PE和Mtb Ag FITC染色 ,用激光共聚焦显微镜观察γδT细胞表面TCRγδ分子的聚集。结果 经流式细胞仪分析 ,Mtb Ag及其纯化的Mtb LW Ag、Mtb Ag Pk3均可与γδT细胞发生特异性直接结合 ,而且Mtb Ag可有效阻断抗TCRγδ单抗与γδT细胞的结合。而Mtb HW Ag与γδT细胞并无特异性结合效应。经激光共聚焦显微镜观察 ,Mtb Ag可显著激活γδT细胞而诱导TCRγδ分子发生功能性聚集化。结论 γδT细胞通过其表面的TCRγδ分子可直接结合Mtb Ag ,而Mtb Ag Pk3多肽可能是Mtb Ag发挥其结合效应的有效成分。Mtb Ag可激活γδT细胞并诱导TCRγδ分子聚集 ,而可能参与功能性脂筏 (raft)的形成。

结核特异性抗原γ-干扰素释放试验在结核杆菌感染诊断中的应用

结核病是由结核分支杆菌引起的一种慢性传染病,可侵及全身各系统及器官,肺结核为最常见类型,约占结核病的85%。世界卫生组织报告,目前全球有20亿人感染结核菌,每年新增病例800万～1000万。结核病严重危害人类健康,是全球关注的公共卫生问题和社会问题,

一种新的ELISA无毒底物TMBS在血清结核菌抗原检测中的应用

通过实验室操作,介绍3,3,5,5,一四甲基联苯胺硫酸盐(TMBS)作为ELISA底物,应用于血清结核抗原的检测;TMBS的主要优点是无致癌性,敏感性高,显色结果终止后稳定。通过实验确定了TMBS在ELISA中的最佳反应条件;经试用于Ⅲ例各种结核病人血清结核抗原检测,结果敏感性是目前最常用的底物邻苯二胺(OPD)的2.3倍,阳性检出率增加10.81%差异显著(P<0.05)。

结核分枝杆菌培养阳性患者T-SPOT.TB检测结果分析

目的探讨结核分枝杆菌(TB)感染T淋巴细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测对活动性结核病的诊断价值。方法使用T-SOPT.TB试剂盒对73例TB培养阳性患者和61例健康者外周血标本进行检测。结果 73例患者外周血中释放γ-干扰素的T淋巴细胞数量平均值为361(中位数为153),61例健康检测结果平均值为21(中位数为11)。结论 T-SPOT.TB检测对活动性结核病具有较高诊断灵敏度和特异度,在疾病诊断方面具有重要临床意义。

结核分枝杆菌的实验室诊断进展

本文从实验室常规细菌学检查、噬菌体裂解法、免疫学诊断法及分子生物学技术等方面概述了结核分枝杆菌感染的实验室诊断进展 。

问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白OmpL1和LipL21抗原表位预测及鉴定

目的筛选问号钩端螺旋体（简称钩体）属特异性外膜蛋白OmpL1和LipL21有效T和B细胞联合抗原表位，为研制多抗原肽（multiple antigenic peptide，MAP）疫苗提供基础。方法采用生物信息学方法预测OmpL1和LipL21分子中T和B细胞联合抗原表位。采用PCR扩增候选联合抗原表位片段并分别构建其噬菌体展示系统。分别以rOmpL1或rLipL21、黄疸出血群赖株、钩体患者抗血清为一抗，采用Western blot检测各抗血清与目的表位的免疫反应性及其强度。结果通过抗原表位预测，选择了高分值的4个OmpL1和2个LipL21联合表位。经扩增获得了预期的各抗原表位片段，各目的表位序列均准确插入噬菌体PⅢ蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述6个联合表位。其中LipL21的97-112和176-184表位对任-抗血清均显示相似强度的杂交条带。综合4个OmpL1表位对3种抗血清的不同Western blot结果及其实际意义，杂交信号从强到弱依次为173-191、87-98、297-320和59-78表位。结论所研究的6个联合表位均分别为LipL21和OmpL1的有效抗原表位，其中LipL21的97-112、176-184和OmpL1的87-98、173-191表位可应用于钩体MAP疫苗研制。

脊柱结核影像学表现及实验室检测分析

目的分析脊柱结核患者的影像学及实验室检查特点。方法收集新乡医学院第一附属医院(河南省结核病医院)骨外科2015年5月至2016年6月收治的经病理学和细菌学检查确诊为脊柱结核的患者65例,所有患者均接受X线、CT、MRI检查以及血沉、C反应蛋白、结核菌素(PPD)皮肤试验、血清抗结核抗体、结核杆菌抗原特异性γ干扰素释放试验(T-SPOT.TB)等实验室检查。收集每例患者的基本临床信息、影像学资料及实验室化验结果,分析并比较各种检测方法对脊柱结核的诊断价值。结果 65例患者中,60例在3种影像学检查中均表现出椎间隙狭窄征象,占92.3%;23例患者X线显示有不同程度的后凸畸形,占35.4%;53例患者CT显示有死骨形成,占81.5%;64例患者MRI表现出椎间盘受累,占98.5%;54例MRI表现出椎旁脓肿征象,占83.1%。PPD皮肤试验、血清抗结核抗体、T-SPOT.TB的阳性率分别为61.5%、41.5%、86.1%。T-SPOT.TB的阳性率高于PPD皮肤实验(P<0.05)和血清抗结核抗体(P<0.05)。结论脊柱结核的3种影像学表现各具特点,3种影像学检查结合起来更有助于脊柱结核的诊断。与传统的结核病检测方法相比,T-SPOT.TB具有较高的敏感性,可以作为脊柱结核的辅助诊断方法。

钩端螺旋体主要属特异性蛋白抗原分布及其免疫性研究

目的确定致病性问号钩端螺旋体(钩体)属特异性外膜蛋白的抗原性和交叉免疫反应性,为研制通用性钩体基因工程疫苗及检测试剂盒提供依据。方法采用Ni-NTA亲和层析法,提取了4种钩体外膜蛋白主要基因型重组表达产物rLipL21、rLipL32／1和rLipL32／2、rLipL41／1和rLipL41／2、rOmpL1／1和rOmpL1／2,并用SDS-PAGE检测表达及提纯效果。上述重组蛋白常规皮下免疫家兔获得抗血清,显微镜凝集试验(MAT)检测各抗血清交叉凝集效价。采用盐变法提取了我国15群问号钩体参考标准株及非致病的双曲钩体PatocⅠ株的外膜蛋白。以兔抗血清为一抗,采用Western blot检测上述4种外膜蛋白自然表达情况及其免疫反应性。结果rLipL21、rLipL32／1和rLipL32／2、rLipL41／1和r LipL41／2、rOmpL1／1和rOmpL1／2表达量分别约占细菌总蛋白的10％、40％和35％、15％和10％、30％和15％,各重组蛋白SDS-PAGE提纯后均仅见单一的蛋白条带。重组蛋白兔抗血清在同一基因不同基因型表达产物之间有广泛的交叉免疫反应性,与不同钩体血清群的MAT效价为1:2-1:128。各血清群钩体外膜中均可检出上述4种外膜蛋白,但LipL21仅存在于问号钩体中。结论LipL21、LipL32、LipL41、OmpL,1均为钩体属特异性表面抗原,可作为通用性钩体疫苗及检测试剂盒的候选抗原。

结核病诊断方法的研究进展

结核病是一种能在人类、家畜、家禽、野生动物和各种野鸟之间传播的疾病。20世纪以来,结核病疫情在全球范围内呈上升趋势。同时,由于艾滋病的流行.机体免疫力下降,感染和死于结核病的人数也明显增多。1995年以来,全世界每年死于结核病的人数达300万,属各类传染病死亡人数之首,专家们估计。

梅毒螺旋体免疫基因及应用研究进展

梅毒(sypilis)是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)(又称苍白螺旋体)引起的一种慢性全身性传染性疾病[1]。其可经性接触、血液和胎盘等途径传播,危害性极大,几乎可侵犯人体所有器官,并可引起妊娠不良或先天性梅毒。梅毒的广泛流行和传播已成为世界各国的公共卫生问题。