结核杆菌特异性细胞免疫与结核抗体辅助诊断男性生殖系统结核的价值

目的评价结核杆菌特异性细胞免疫与结核抗体辅助诊断男性生殖系统结核的价值。方法回顾性分析2017年1月至2020年6月于我院就诊的174例男性生殖系统结核及炎症病例,通过比较各种检验方式(方法A:结核杆菌特异性细胞免疫检测;方法B:结核抗体检测;方法C:串联检测;方法D:并联检测)的诊断效能评估其辅助诊断男性生殖系统结核的价值。结果两种检测方法的一致性较差(kappa=0.022),诊断结果差异有统计学意义(χ^(2)=31.7,P<0.001)。方法A(81.6%)及方法D(84.2%)的敏感性高于方法B(21.1%,χ^(2)=19.4,P<0.01)及方法C(18.4%,χ^(2)=22.0,P<0.01),方法B(93.9%)及方法C(100.0%)的特异性高于方法A(59.2%,χ^(2)=11.1,P<0.01)及方法D(57.1%,χ^(2)=18.1,P<0.01);方法C具有最高的敏感度(Se)、阳性预测值(PPV)及阳性似然比(LR+),具有最低的误诊率(α),方法D具有最高的特异度(Sp)、阴性预测值(NPV)、约登指数,具有最低的漏诊率(β)及阴性似然比(LR-);方法A-D的AUC面积依次为0.704、0.575、0.592以及0.686。结论两种检验方法同时为阳性时患有生殖系统结核的可能性最大,此时误诊率最低;两种检验方法同时为阴性时患有生殖系统结核的可能性最小,此时漏诊率最低;单独检测时,结核杆菌特异性细胞免疫检测比结核抗体检测具有更高的诊断效能;联合检测时,并联诊断效能高于串联诊断效能。

特异性T细胞体外释放酶联免疫法检测结核病的临床应用

目的:探究特异性T细胞体外释放酶联免疫法检测结核病的临床应用价值。方法:选取疑似发生结核病患者128例进行临床研究,患者均在医护人员辅助下完成结核菌素皮肤试验、特异性T细胞体外释放酶联免疫法、结核分枝杆菌分离培养检验,以结核分枝杆菌分离培养结果为金标准,统计前两种方法的诊断结果与诊断效能。结果:结核分枝杆菌分离培养结果如下,阳性、阴性检出率分别是62.50%与37.50%。结核菌素皮肤试验、特异性T细胞体外释放酶联免疫法的阳性率、阴性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。特异性T细胞体外释放酶联免疫法的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值大于结核菌素皮肤试验(P<0.05)。结论:结核病临床诊断中应用特异性T细胞体外释放酶联免疫法,诊断效能较好,值得临床推广。

论结核分支杆菌特异性细胞免疫反应在结核性胸膜炎的临床意义

分析结核分支杆菌特异性细胞免疫反应在结核性胸膜炎的临床意义。方法 选择我院和第四人民医院2017年01月-2021年12月收治的结核性腹膜炎患者(n=200,例)为实验组进行分析,同期选择2017年01月-2021年12月来我院进行常规健康体检患者(n=200,例)为对照组进行分析,所有患者进行结核分支杆菌特异性细胞免疫反应。对比两组患者的A.TB、TST以及TB-AB阳性检测率。结果 实验组患者A.TB检测(50.00%)以及TST检测(20.00%)阳性检测率高于对照组A.TB检测(20.00%)以及TST检测(5.00%),有差异,(P<0.05);两组患者TB-AB检测阳性率无差异,(P>0.05)。结论 临床采用结核分支杆菌特异性细胞免疫反应,可以有效的提高临床结核性胸膜炎的阳性诊断率。

结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径

目的 :探讨Ras Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径。方法 :分离获取PBMC ,用佛波醇酯 (PMA)和离子霉素 (IM) ,CD3mAb或Mtb Ag刺激不同时间 ,或PBMC先经PD980 5 9处理后再刺激培养 ;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD6 9分子的表达 ;计数培养扩增 10天的细胞数量。结果 :PBMC用PMA +IM刺激 6小时 ,总T细胞和γδT细胞中的CD6 9表达均达高峰 (均 >99% ) ,用CD3mAb刺激 2 4小时 ,均达高峰 (均在 5 5 %左右 ) ,用Mtb Ag刺激 2 4小时 ,亦均达高峰 ,但总T细胞和γδT细胞中CD6 9分别为 16 .0 %和 75 2 % ;用PD980 5 9预处理PBMC ,可明显抑制Mtb Ag激活的γδT细胞CD6 9表达和γδT细胞的增殖。结论 :Mtb Ag可特异性激活γδT细胞 ,其活化信号转导需通过Ras Erk通路。

快速斑点免疫金渗滤法检测结核杆菌特异性抗体

斑点免疫金渗滤法检测结核杆菌特异性抗体比传统痰涂片抗酸染色检测结核杆菌的方法临床检出率高，方法简便，快速准确。

结核特异性细胞免疫反应试验在结核病中的诊断价值

目的通过对结核特异性细胞免疫反应（TB-IGRA）试验结果进行分析,探讨TB-IGRA在结核病诊断及鉴别诊断中的意义。方法收集甘肃省人民医院2014年1~12月住院的肺结核、疑似肺结核及肺外结核患者共1 366例,采用TB-IGRA检测结核分枝杆菌相关γ-干扰素,进行敏感度和特异性指标分析,与涂片镜检、结核抗体检测及结核分枝杆菌核酸检测方法进行比较。结果 TB-IGRA在肺结核及肺外结核病中的阳性检出率高达85.40%及86.20%,同时与涂片镜检、结核抗体检测及结核分枝杆菌核酸检测比较,其阳性率分别为82.90%、36.60%、11.00%和31.70%。TB-IGRA检测阳性率显著高于另3种方法。结论 TB-IGRA是检测结核分枝杆菌的快速敏感指标,且优于传统方法,在临床结核病诊断中有重要价值。

胸腺上皮细胞特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型的鉴定及免疫学特征观察

目的构建并鉴定胸腺上皮细胞(thymic epithelial cells,TECs)特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型,评价其免疫学特征。方法采用小鼠胚胎干细胞(ES细胞,embryonic stem cells)打靶基因敲除技术,得到F0代的GSK-3β^(flox/flox)(GSK-3β^(f/f))小鼠;再采用Cre-LoxP系统进行小鼠的繁殖;PCR鉴定,筛选出基因型为GSK-3β^(f/f)FoxN1-Cre^(+/-)(GSK-3β^(-/-))小鼠,即为在TECs特异性敲除GSK-3β基因的小鼠。观察基因敲除鼠的一般生物学特征、繁殖能力和子代存活率。应用HE染色、流式细胞术及免疫荧光技术,比较基因敲除鼠和野生型小鼠免疫器官结构、胸腺、脾及外周血中免疫细胞比例及增殖能力差异。结果成功构建TECs特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型。与野生型(wild type,WT)小鼠相比,GSK-3β^(-/-)小鼠一般生物学特征无明显差异,子代存活率>90%;衰老进程中GSK-3β^(-/-)小鼠胸腺比WT小鼠体积大,胸腺指数高,胸腺细胞数量多;脾中的初始T细胞及近期迁移细胞数量也显著多于WT小鼠。结论成功构建了TECs特异性敲除GSK-3β基因小鼠模型。为研究GSK-3β基因在TECs的功能和作用机制提供了很好的研究模型。

皮下免疫治疗对变应性鼻炎伴咳嗽变异性哮喘患儿CD14、可溶性程序性细胞死亡配体1、特异性免疫球蛋白G4及炎症因子的影响

目的探讨皮下免疫治疗(subcutaneous immunotherapy,SCIT)对儿童变应性鼻炎(AR)伴咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA)的疗效。方法选择于芜湖市第五人民医院耳鼻咽喉科接受治疗的AR伴CVA患儿96例,按照随机数字表法分为2组,每组48例。对照组接受常规药物治疗,观察组在对照组治疗基础上予以SCIT,共治疗3年。比较两组治疗期间新增致敏原例数和发展为典型哮喘例数;比较两组症状评分、肺功能和实验室检查指标,并比较两组临床疗效。结果观察组新增致敏原例数和发展为典型哮喘例数均少于对照组(P<0.05);治疗后观察组鼻炎症状评分、咳嗽症状评分低于对照组(P<0.01),第1秒用力呼气量、用力肺活量、第1秒用力呼气容积占用力肺活量百分比均高于对照组;血清CD14、白细胞介素33水平低于对照组(P<0.01),可溶性程序性细胞死亡配体1、特异性免疫球蛋白G4、干扰素γ、白细胞介素27水平高于对照组(P<0.01),治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。结论SCIT可改善症状积分和肺功能,调节Th1/Th2免疫失衡,改善血清CD14、可溶性程序性细胞死亡配体1、特异性免疫球蛋白G4水平,治疗儿童AR伴CAV效果显著。

鼻窦CT评分联合特异性免疫球蛋白E和白细胞介素6预测嗜酸粒细胞型慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者术后复发风险的价值

目的探讨鼻窦CT评分联合特异性免疫球蛋白E(sIgE)和白细胞介素6(IL-6)对嗜酸粒细胞型慢性鼻窦炎伴鼻息肉(ECRSwNP)患者术后复发风险的预测价值。方法选取2019年1月~2022年1月浙江大学医学院附属杭州西溪医院收治的ECRSwNP患者92例,均行功能性鼻内镜手术,根据术后1年复发情况分为复发组(n=29)和未复发组(n=63)。比较两组鼻窦CT评分,并采用Pearson相关性分析法分析外周血嗜酸粒细胞(Eos)及组织Eos百分比(Eos%)与鼻窦CT评分的相关性;利用Logistic回归分析模型分析术后复发的危险因素,用受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)探究鼻窦CT评分、特异性免疫球蛋白E(sIgE)、IL-6对患者术后复发的预测价值。结果复发组前组筛窦评分、后组筛窦评分、鼻窦CT评分及筛窦与上颌窦评分比值(E/M比)均大于未复发组(P<0.05);组织Eos%与前组筛窦评分、后组筛窦评分及E/M比均呈正相关(r=0.305、0.381、0.642,P均<0.05),外周血Eos%与前组筛窦评分、后组筛窦评分及E/M比亦呈正相关(r=0.272、0.346、0.525,P均<0.05)。复发组哮喘患者占比、鼻塞视觉模拟量表(VAS)评分、组织Eos%、外周血Eos%及sIgE、IL-6水平均高于未复发组(P<0.05),组织中性粒细胞百分比(Neu%)、外周血Neu%则低于未复发组(P<0.05);Logistic分析显示,高水平血清sIgE、IL-6及高E/M比均是影响患者术后复发的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清sIgE、IL-6、E/M比及三者联合预测ECRSwNP患者术后复发风险的AUC分别为0.818、0.758、0.696、0.915,三项指标联合预测效能高于单项检测(P<0.05)。结论高水平血清sIgE、IL-6及高E/M比是ECRSwNP患者术后复发的危险因素,三者联合预测患者鼻内镜术后复发风险具有较高临床价值。

髓系细胞缺失ATG5对疟原虫特异性CD4+T细胞免疫记忆形成的影响

目的研究髓系细胞缺失ATG5对疟原虫特异性CD4^(+)T细胞免疫记忆形成的影响。方法构建髓系细胞特异缺失ATG5的条件敲除小鼠,在其感染约氏疟原虫Plasmodium yoelii(P.yoelii)17XNL自愈后1个月、3个月和6个月分别再次感染该虫株,观察其原虫率变化。同时采用流式细胞术检测髓系细胞ATG5条件缺失感染自愈小鼠疟原虫特异性免疫记忆CD4^(+)T细胞频率和数量的变化。结果成功构建髓系细胞ATG5条件缺失实验小鼠(ATG5^(f/f)-LysM cre^(+))。与对照组(ATG5^(f/f)-LysM cre^(-))相比,初次感染P.y 17XNL的实验组小鼠(ATG5^(f/f)-LysM cre^(+))原虫血症明显低于对照组小鼠(ATG5^(f/f)-LysM cre^(-))。在上述感染小鼠自愈后1个月、3个月和6个月再次感染P.y 17XNL,结果发现感染小鼠原虫血症与初次感染相比,均显著降低,且所有感染小鼠在攻击后6~8 d内完全清除体内疟原虫。流式检测后发现,ATG5^(f/f)-LysM cre^(+)与ATGf/f-LysM cre^(-)小鼠感染自愈后3个月或6个月,其脾脏疟原虫特异性免疫记忆CD4^(+)T细胞频率和数量均无统计学差异。结论P.y 17XNL感染自愈小鼠可以有效诱导宿主免疫记忆,但髓系细胞缺失ATG5不影响疟原虫特异性CD4^(+)T细胞免疫记忆形成。

舌下特异性免疫治疗对变应性鼻炎患者Treg/Th17细胞平衡的影响

目的:观察舌下特异性免疫治疗(SLIT)对变应性鼻炎(AR)患者调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞(Th)17细胞平衡的影响。方法:选择2019年12月~2021年2月厦门医学院附属第二医院收治的AR患者64例作为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组,各32例。两组患者均给予常规治疗,观察组在常规治疗的基础上给予SLIT,两组患者疗程均为1年。比较两组患者治疗前后外周血中Treg与Th17的占比,血清白细胞介素(IL)-17、转化生长因子(TGF)-β1、IL-35、尘螨特异性免疫球蛋白E(sIgE)、尘螨特异性免疫球蛋白G4(sIgG4)水平及症状评分,并统计两组治疗期间不良反应发生情况。结果:与治疗前比较,治疗后两组Treg细胞占比增大,Th17细胞占比减小,且治疗后观察组Treg细胞占比显著大于对照组,Th17细胞占比显著小于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与治疗前比较,治疗后两组血清IL-17、sIgE水平降低,TGF-β1、IL-35、sIgG4水平升高,且治疗后观察组血清IL-17、sIgE水平显著低于对照组,TGF-β1、IL-35、sIgG4水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05或P<0.01)。与治疗前比较,治疗后两组鼻痒、鼻塞、喷嚏、流涕的评分及总评分均降低(P<0.01),且治疗后观察组上述评分显著低于对照组(P<0.01)。两组患者治疗期间发生口腔干燥、舌下肿胀、嗜睡、头晕、瘙痒和全身性荨麻疹等不良反应的发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SLIT可促进AR患者恢复Treg/Th17平衡,降低血清炎性因子水平,调节免疫应答,改善临床症状,治疗效果优于单独常规治疗,且具有较高的安全性。

抗结核治疗中患者外周结核分枝杆菌抗原水平与特异性免疫应答相关性分析

目的:活动期结核病患者外周呈现相当水平的结核特异性细胞免疫应答,在治疗过程中也呈现一定的动态变化特征,这种结核特异性细胞免疫应答的抗原驱动因素则还未知。本研究通过同步分析肺结核患者在抗结核治疗过程中外周特异性抗原和抗原特异性T细胞应答水平的动态变化,探讨外周抗结核特异性细胞免疫应答的理论依据。方法:利用外周血抗原富集-质谱鉴定技术动态检测外周血浆中结核特异性抗原CFP-10在患者抗结核治疗过程中含量的动态变化,并采用流式细胞术同步分析CFP-10刺激后的T细胞应答水平,分析CFP-10含量变化与不同细胞因子分泌T细胞数量的相关性。结果:CFP-10抗原水平在患者治疗过程中呈现个体化差异,同时在TB治疗中CFP-10含量与CFP-10特异性IFN-γ^+CD4^+T细胞比例具有显著相关性(P=0.029),但是CFP-10的含量与TNF-α^+CD4^+T细胞比例之间则无相关性(P=0.98)。结论:本研究获得了结核病患者治疗过程中外周结核病原菌抗原的动态变化特征,据此可推断目前所采用的IFN-γ释放实验某种程度上可以反映患者外周结核分枝杆菌抗原的载量,上述基于结核病原学和机体免疫应答水平的同步检测,有利于进一步解析抗结核免疫应答的抗原驱动因素,并为建立新型抗结核治疗疗效评价的生物标志物提供前期理论依据。

特异性免疫治疗对哮喘患儿自然杀伤细胞和嗜碱性细胞的影响

目的探讨特异性免疫治疗哮喘患）LNK细胞活性和嗜碱性细胞表达变化的意义。方法将60例轻、中度哮喘患儿（均对屋尘螨过敏）分为两组，其中治疗组30例，采用屋尘螨特异性免疫治疗联合吸入糖皮质激素为主的哮喘防治方案；对照组30例，仅采用吸入激素为主的哮喘防治方案。检测两组治疗前后NK细胞活性和嗜碱性粒细胞表达以及血清，总IgE、屋尘螨特异性IgE（DP-IgE）、嗜酸性细胞阳离子蛋白（ECP）水平，评价两组患儿治疗前后哮喘急胜发作次数，比较治疗前后哮喘控制测试（C-ACT）评分和最大用力呼气峰流速（PEF）测试结果。结果治疗组治疗后外周血NK细胞活性（12．01±1．41）％，明显高于对照组（10．11±2．49）％（t=3．83，P=0．00）。治疗组治疗后嗜碱性粒细胞含量、血清总IgE及DP．IgE水平下降程度均明显高于对照组（z=2．23-3．57，P均〈0．05）；治疗后两组哮喘急性发作次数较治疗前均明显减少，C-ACT评分和PEF结果较治疗前均有提高，治疗组更优于对照组，差异有统计学意义（t=3．63-4．02，P均〈0．01）。结论特异性免疫治疗联合规范化防治使哮喘患儿病情更趋稳定，哮喘控制效果更理想。特异性免疫治疗能显著提高机体NK细胞活性、减少嗜碱性粒细胞含量。

基于HBV核心抗原CTL表位的治疗性多肽在体诱导抗原特异性细胞免疫应答的研究

目的 探讨基于表位的治疗性多肽抗原组分、结构与诱导免疫应答之间的关系。方法 用分子设计的理论和方法 ,设计基于HBV抗原免疫优势性CTL、Th及B细胞表位的 3种治疗性多肽候选疫苗分子 ,经Merrifield固相多肽合成技术合成 ,并经HPLC纯化、鉴定。以BALB c(H 2 d)纯系小鼠为实验对象 ,进行体内免疫学功能研究。结果 所设计治疗性多肽分子可在体诱导较强的抗原特异性CTL应答和适度的抗体反应。Th、B细胞表位的引入可增强CTL表位肽的效应。结论 提示在治疗性表位多肽疫苗的分子设计中 ,引入B -、Th表位可显著提高CTL表位肽的免疫原性。

树突状细胞与特异性细胞免疫

树突状细胞是目前发现的递呈功能最强的抗原递呈细胞 ,它在抗原摄取与递呈方面的独特作用越来越引起人们的重视 ;同时 ,它通过提供双信号刺激、细胞辅助作用、细胞因子等直接和间接地启动特异性细胞免疫 ,在免疫应答中发挥着极其重要的作用。

特异性免疫治疗对变应性鼻炎外周血CD4+CD25+T调节细胞的影响及远期疗效的观察

【目的】通过检测变应性鼻炎患者皮下特异性免疫治疗前后外周血CD4+T淋巴细胞表面CD25表达情况的变化及观察相关指标,探讨皮下特异性免疫治疗的机制,评价其远期疗效。【方法】将90例确诊变应性鼻炎患者随机分为免疫治疗组和药物治疗组,每组45例。通过症状评分、使用药物评分和鼻结膜炎相关生活质量调查问卷等评价临床疗效,同时通过流式细胞仪检测外周血CD4+T淋巴细胞表面CD25表达情况。【结果】随着特异性免疫治疗的进行,免疫治疗组与药物治疗组症状评分无统计学差异;而免疫治疗组药物评分要明显低于药物治疗组,鼻结膜炎相关生活质量调查问卷评分要高于药物治疗组,差异有统计学意义。变应性鼻炎患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞比例要低于健康对照组,免疫治疗组治疗3年后比例较治疗前升高,差异有统计学意义。而药物治疗组的比例没有明显提高。【结论】经过3年的特异性免疫治疗后,患者症状控制理想,对症治疗的药物明显减少,生活质量明显提高。这可能与影响CD4+CD25+T调节细胞的功能有关。

NK细胞活性在小儿哮喘尘螨特异性免疫治疗中的意义

目的探讨自然杀伤(NK)细胞活性在小儿哮喘尘螨特异性免疫治疗中的意义。方法分别检测尘螨过敏的哮喘患儿58例、正常对照组儿童30例NK细胞活性,并对哮喘患儿进行尘螨特异性免疫治疗,治疗前后检测其NK细胞活性及总IgE。结果哮喘患儿的NK细胞活性比正常对照组显著减少(P<0.01);尘螨特异性免疫前较特异性免疫后的哮喘患儿的NK细胞活性显著增高(P<0.01),总IgE显著降低(P<0.01)。结论NK细胞参与哮喘的发病过程,是一种重要的免疫调节细胞。特异性免疫疗法有助于NK细胞活性增强,降低总IgE水平,从而减少哮喘的发作。[临床儿科杂志,2007,25(12):1011-1013]

艾滋病猴特异性细胞免疫的胞内细胞因子检测方法优化与应用

目的为准确检测艾滋病猴模型特异性细胞免疫,优化、确定胞内细胞因子染色(ICS)影响因素和条件。方法使用三种多克隆激活剂分别刺激SIV感染猴外周血单个核细胞(PBMC),确定最佳阳性刺激物和刺激时间;然后使用五种浓度SIVmac239混合肽库分别刺激SIV感染猴PBMC,体外培养,不同时间点进行细胞染色和流式检测,确定肽库的最适刺激浓度和最佳刺激时间。最后,初步应用该方法检测SIV感染猴细胞免疫水平。结果 PMA+离子霉素组合可用作本实验的阳性刺激物;2μg/mL肽库,37℃5%CO2培养16 h,能更有效的刺激T细胞分泌TNF-α、IL-2、IFN-γ。结论该方法的优化对艾滋病药物的临床前评价和疫苗研发等研究具有重要意义。

调节性T细胞在过敏性鼻炎及抗原特异性免疫治疗中的作用

免疫系统是一个高速运转的复杂网络系统,当机体遇到环境中的抗原、细菌、病毒等异物侵袭,它会及时做出相应的免疫反应。过敏性疾病的发生是一个复杂的免疫过程,目前对其机制的研究还处于探索之中,近些年,随着Treg细胞的出现及对其认识的不断加深,人们渐渐意识到"免疫耐受"的形成对维持机体的免疫环境的稳定发挥着重要作用。而Treg细胞在诱导和维持免疫耐受中的核心作用已得到肯定,本文将会对Treg细胞在过敏性鼻炎及抗原特异性免疫治疗中的作用加以阐述。