脱氧核糖核酸酶1在肾细胞癌中的作用及机制研究

肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)患者在手术后对放疗、化疗和靶向治疗均不敏感。前期研究证明,在肝癌中,脱氧核糖核酸酶1(deoxyribonuclease 1-like 3,DNASE1L3)可以分解包膜内的单链和双链DNA,通过弱化糖酵解的限速酶,抑制细胞周期、增殖和代谢。然而,DNASE1L3在肾癌中的作用和相关机制尚不清楚。从癌症基因组图谱数据库(the Cancer Genome Atlas,TCGA)中下载并分析了肾癌RNA测序数据;使用(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库、人类蛋白质图谱数据库和免疫印迹验证DNASE1L3的表达水平;运用免疫相关数据库分析、划痕和侵袭实验,探究了DNASE1L3的作用和潜在机制。结果发现,在TCGA肾癌数据中,DNASE1L3表达量与患者的临床特征显著相关,且与患者生存期呈正相关;过表达DNASE1L3会抑制ACHN和786-O细胞的增殖和侵袭能力。结果表明,DNASE1L3可能成为肾癌患者诊断和治疗的潜在生物标志物。

血清乙型肝炎病毒表面抗原水平与血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸载量在不同阶段乙型肝炎病毒感染肝衰竭患者中的表达

目的分析血清乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)水平与血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量在不同阶段乙型肝炎病毒(HBV)感染肝衰竭患者中的表达意义。方法回顾性选取龙岩市第二医院于2020年9月至2021年9月收治的64例HBV感染肝衰竭患者作为研究对象,按照病情阶段分为慢性肝衰竭(CLF)组35例和慢加急性肝衰竭(ACLF)组29例,两组均通过电化学发光法和荧光定量法(Q-PCR)检测血清中HBsAg和HBV-DNA水平,并比较两组的因子表达情况。结果ACLF组中的HBsAg与HBV-DNA水平以及CD4+、CD8+均高于CLF组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床可通过分析患者血清中的HBsAg与HBV-DNA水平的表达情况,掌握不同病程阶段HBV感染患者的病情进展情况,为病症的预防和干预治疗提供参考依据。

脱氧核糖核酸在个人护理品中的应用

DNA作为生物体中最重要的遗传材料,其结构与功能的研究,一直是分子生物学领域中发展最快的一个领域。DNA技术还具有一定的保湿、抗衰、修复、抗氧化、光保护等功效,这为DNA技术在个人护理品中的应用奠定了功效基础。在国外,DNA已经被应用到了个人护理产品中,但是对它的安全问题还在探讨当中。文章就DNA的基本性质、皮肤护理功能和安全问题作概述,以期为DNA的开发和利用提供一定的理论基础。

旋毛虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ蛋白的制备及其定位研究

为获得旋毛虫(T1)脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNase Ⅱ)蛋白,观察其在肌幼虫虫体中的分布,以旋毛虫(T1)肌幼虫cDNA为模板,利用RT-PCR技术扩增旋毛虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ(TsDNase Ⅱ)蛋白的编码基因tsdnase Ⅱ,将其克隆到原核表达载体pCold-TF中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳分析;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot分析重组Ts DNaseⅡ(rTsDNase Ⅱ)蛋白的反应原性;将rTsDNase Ⅱ蛋白免疫6-8周BALB/c小鼠,制备其多克隆抗体;制作旋毛虫肌幼虫冰冻切片,利用免疫荧光试验观察TsDNase Ⅱ蛋白在虫体中的分布。结果,成功地扩增出了长度为942 bp的旋毛虫tsdnase Ⅱ基因片段,构建了其原核表达质粒pCold-TF-tsdnase Ⅱ;转化了重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)成功可溶表达了rTsDNase Ⅱ,大小为86 kDa;ELISA与Western blot分析结果显示,rTsDNase Ⅱ蛋白能与感染旋毛虫的小鼠血清发生特异性反应;冰冻切片免疫荧光分析显示,TsDNase Ⅱ分布于旋毛虫肌幼虫整个虫体。研究结果为进一步分析TsDNase Ⅱ的特性与功能、利用该蛋白研发旋毛虫病新型防控策略打下了基础。

肝癌患者血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸载量同肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发的关系

目的:探讨肝癌患者血清乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)载量同肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发的关系。方法:选取72例2019年1月~2021年5月行肝动脉化疗栓塞术患者,行回顾性分析,依据术后肿瘤复发情况分为复发组(n=28)、未复发组(n=44),分析患者肝动脉化疗栓塞术后肝功能指标,术后肿瘤复发的危险因素,比较两组血清HBV DNA载量,探讨血清HBV DNA载量同肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发的关系。结果:两组患者在性别、年龄、体重指数(BMI)、Child-Pugh分级、内科治疗上比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组患者在肿瘤数目、最大肿瘤直径、血清HBV DNA载量上比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前相比,治疗后患者血清总胆红素(TBIL)、丙谷转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)指标显著改善,差异有统计学意义(P<0.05)。对上述差异有统计学意义的因素进行赋值,肿瘤数目(单个为1,多个为2)、最大肿瘤直径(≤3为1,>3为2)、血清HBV DNA载量(<100考贝数/ml为1,≥100考贝数/ml为2);经多因素Logistic回归分析,肿瘤数目为多个、最大肿瘤直径>3 cm、血清HBV DNA载量≥100考贝数/ml均为肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发的危险因素(P<0.050)。经Spearman相关性分析,肿瘤数目、最大肿瘤直径、血清HBV DNA载量与肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发均呈正相关关系,差异有统计学意义(r=0.854、0.896、0.912,P<0.001)。结论:肝动脉化疗栓塞术可显著改善肝癌患者的肝功能,而肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发与肿瘤数目、最大肿瘤直径、血清HBV DNA载量具有直接关系,应制定针对性干预措施,降低肿瘤复发率。

脱氧核糖核酸-银纳米簇荧光探针用于沙眼衣原体的定量检测

采用化学法合成脱氧核糖核酸-银纳米簇(DNA-AgNCs)荧光探针,并用于沙眼衣原体色氨酸合成酶β链基因(目标序列)的选择性荧光检测。在pH 6.6乙酸盐缓冲溶液中加入两条DNA探针和硝酸银,在还原剂硼氢化钠作用下合成了荧光强度大的DNA-AgNCs。在pH 5.5乙酸铵缓冲溶液中加入目标序列和DNA-AgNCs溶液,使混合溶液体积达到100μL,其中DNA-AgNCs的浓度达到1.5μmol·L^(-1)(以DNA浓度计),于15℃反应10 min,目标序列与其中一条DNA探针杂交,DNA-AgNCs结构被破坏,检测体系荧光猝灭。结果显示:DNA-AgNCs颗粒呈类球形,粒径约为2 nm,分散性良好且未发生团聚,荧光激发、发射波长分别在558,610 nm处。猝灭程度ΔF(目标序列添加后、前的检测体系荧光强度的差值)与目标序列浓度在0.23~1.10μmol·L^(-1)内呈线性关系,检出限(3s/k)为57 nmol·L^(-1),测定值的相对标准偏差(n=11)为1.5%~4.9%。添加目标序列以及10倍目标序列浓度的同源序列、症状相似序列、衣原体序列和随机序列,仅目标序列加入时,检测体系荧光猝灭,说明合成的荧光探针具有优异的选择性;以海拉细胞裂解液和胎牛血清作模拟基质进行加标回收试验,回收率为98.0%~100%。

乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸载量前S2蛋白阳性率与慢性乙型肝炎患者肝纤四项指标的相关性分析

目的分析慢性乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量、前S2蛋白(Pre S2)阳性率与乙型肝炎患者肝纤4项指标的相关性。方法选取上饶市第二人民医院2019年1月—2021年12月收治的68例乙肝患者为研究对象,测定其血清HBV-DNA载量、Pre S2阳性率及血清肝纤指标[层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(ⅣC)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢ)]水平,按照HBV-DNA载量与Pre S2检测结果,将患者分为低载量组、中载量组、高载量组及Pre S2阳性组与Pre S2阴性组,比较各组肝纤指标水平,并进行相关性分析。结果高载量组血清LN、HA、PⅢ水平明显低于中载量组与低载量组,且中载量组明显低于低载量组(P<0.05),3组ⅣC水平比较差异无统计学意义(P>0.05);高载量组Pre S2阳性率明显高于其余2组(P<0.05),中载量组明显高于低载量组(P<0.05)。Pre S2阳性组患者血清LN、HA及PⅢ水平明显低于Pre S2阴性组(P<0.05),2组ⅣC水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析显示,HBV-DNA载量、Pre S2阳性率与LN、HA、PⅢ水平呈负相关(P<0.05)。结论慢性乙型肝炎患者HBV-DNA载量、Pre S2阳性率与LN、HA、PⅢ密切相关。

荧光定量聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液中结核分枝杆菌脱氧核糖核酸诊断肺结核的价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(TbDNA)诊断肺结核的临床价值。方法选取51例肺结核患者作为肺结核组,另选60例非肺结核患者作为对照组。所有患者均完善BALF TbDNA检测及毛刷涂片抗酸染色镜检、痰涂片抗酸染色镜检。以评价BALF中TbDNA检测对诊断肺结核的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。结果荧光定量PCR检测BALF中的TbDNA,其阳性对肺结核诊断的敏感性、特异性、PPV、NPV分别为74.51%、96.67%、95.00%、81.69%,肺结核组毛刷涂片抗酸染色镜检的敏感性为13.73%,痰涂片抗酸染色镜检敏感性为15.69%。对照组中,荧光定量PCR检测BALF中的TbDNA的特异性为96.67%,毛刷涂片抗酸染色镜检及痰涂片抗酸染色镜检的特异性均为100.00%。肺结核组荧光定量PCR检测BALF中的TbDNA与痰涂片抗酸染色镜检及毛刷涂片抗酸染色镜检敏感性比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组荧光定量PCR检测BALF中的TbDNA与毛刷涂片抗酸染色镜检及痰涂片抗酸染色镜检的特异性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论荧光定量PCR检测BALF中的TbDNA有良好的特异性和敏感性,有望辅助传统的检查来早期诊断肺结核。

痰结核分枝杆菌噬菌体生物扩增法与痰结核菌脱氧核糖核酸联合检测对痰菌阴性肺结核诊断价值分析

目的探讨痰结核分枝杆菌噬菌体生物扩增法(TB-PhaB)、痰结核菌脱氧核糖核酸(TB-DNA)联合检测对诊断痰菌阴性肺结核的临床应用价值。方法选取我院2015年2月～2017年9月期间93例痰菌阴性肺结核患者均接受痰结核分支杆菌噬菌体生物扩增法、痰结核菌脱氧核糖核酸检测,记录二者联合检查诊断结果并将其与病理诊断结果做统计学分析。结果 93例痰菌阴性肺结核患者经不同方法检查完成率均为100.00%,分析可知痰结核分支杆菌噬菌体生物扩增法联合痰结核菌脱氧核糖核酸检测对疾病确诊率为94.62%,病理诊断为100.00%;痰结核分支杆菌噬菌体生物扩增法联合痰结核菌脱氧核糖核酸检测对肺结核的诊断敏感性为94.62%。结论应用痰结核分支杆菌噬菌体生物扩增法、痰结核菌脱氧核糖核酸检测法联合诊断肺结核具有较为理想的临床检出率,有利于尽快确诊患者病情并提供对症救治,对保障其生活质量、生命安全均具有积极意义。

肠道集聚性大肠杆菌基因组脱氧核糖核酸提取方法比较与改进

为了得到一种高效的肠道集聚性大肠杆菌基因组脱氧核糖核酸(DNA)提取方法,比较OMEGA、天根、宝生物、全式金4种细菌基因组DNA提取试剂盒对肠道集聚性大肠杆菌基因组DNA的提取效果,并对宝生物、全式金试剂盒提取方法进行优化;测定所提取的基因组DNA的纯度及浓度,并进行基因组完整性检验及特征基因检测。结果表明,使用全式金细菌基因组DNA提取试剂盒提取肠道集聚性大肠杆菌基因组DNA时,通过增加溶菌酶孵育时长至40 min,同时蛋白酶K的用量增加1倍,基因组DNA提取浓度可提高约14.5倍。

重组结核杆菌融合蛋白在肺结核密切接触者中筛查结核分枝杆菌感染效果分析

目的:探讨重组结核杆菌融合蛋白(recombinant mycobacterium tuberculosis fusion protein,EC)皮肤试验在筛查肺结核患者密切接触者结核分枝杆菌感染中的实用性和有效性,为进一步优化结核感染检测提供技术建议,了解密切接触者结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)现状。方法:2023年10月23日至11月14日在上海市奉贤区和金山区共选取140名肺结核密切接触者作为研究对象,对每名研究对象同时采用γ-干扰素释放试验(IGRA)和EC皮肤试验进行结核感染检测,采用Kappa值检验两种方法结果一致性,采用χ^(2)检验比较两组检测方法之间的差异,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:140名研究对象,包括男性55例,女性85例;IGRA阳性率为15.00%(21/140),EC皮肤试验阳性率为14.29%(20/140),两种试验方法一致性检验Kappa值为0.857,差异无统计学意义(χ^(2)=0.029,P=0.866),两种检测方法检测结果为高度一致性;以IGRA作为结核感染的参考标准,EC皮肤试验的敏感度为85.71%(18/21)、特异度为98.32%(117/119)、阳性预测值为90.00%(18/20)、阴性预测值为97.50%(117/120);男性EC阳性率(32.73%,18/55)明显高于女性(2.35%,2/85),差异有统计学意义(χ^(2)=17.983,P<0.001)。结论:EC皮肤试验具有较强的特异性,可用于肺结核密切接触者结核分枝杆菌感染筛查,但受限于使用年龄和接种禁忌证,可采用IGRA对无法进行EC皮肤试验者进行补充检测。

亚甲基蓝共振光谱散射法测定脱氧核糖核酸

基于脱氧核糖核酸 (DNA)对有机染料亚甲基蓝的共振光散射的增强效应 ,拟定了一种测定DNA的共振光散射法。在pH5.5～ 7.5范围内 ,亚甲基蓝在 350nm处的共振光散射增强与DNA浓度呈线性关系 ,线性范围为 2 0 0～ 140 0 μg L ,检出限可达 15μg L。该方法简便、快速 ,用于合成样品中DNA的测定 ,结果令人满意。

脱氧核糖核酸电分析化学研究进展

就DNA电分析化学研究及其应用方面进行综述 ,主要叙述了DNA的各种电分析化学方法 ,以及DNA电化学传感器的原理、应用以及发展。本文引用文献 77篇。

脱氧核糖核酸荧光探针的研究进展

综述了不同种类的荧光探针与ＤＮＡ的结合方式及其在ＤＮＡ定量分析等方面的应用，并对荧光探针的研究前景进行了展望。

钌(Ⅱ)多吡啶配合物的合成、荧光性质及与脱氧核糖核酸DNA的作用机制研究

设计合成含多个配位中心的多吡啶配体ODCIP(3,4-二氯基苯并咪唑并[4,5-f][1,10]邻菲咯啉)及其钌(Ⅱ)多吡啶配合物[Ru(bpy)2ODCIP]2+.运用元素分析、红外光谱、核磁谱和质谱对配体及配合物进行结构表征.利用紫外吸收光谱、荧光光谱和粘度法研究了[Ru(bpy)2ODCIP]2+与DNA(脱氧核糖核酸)的作用机制、与Co2+配位后与DNA的作用机制及其荧光变化情况.结果表明[Ru(bpy)2ODCIP]2+与DNA通过部分插入模式作用,[Ru(bpy)2ODCIP]2+与Co2+配位形成的双核配合物[Ru(bpy)2(ODCIP)Co]4+也能与DNA插入结合.进一步利用稳态荧光发射光谱、荧光淬灭实验等方法研究了单核配合物[Ru(bpy)2ODCIP]2+和双核配合物[Ru(bpy)2(ODCIP)Co]4+的荧光性质.

中位-四(4-N-氰甲基吡啶)卟啉-铜(Ⅱ)络合物及其与脱氧核糖核酸的复合物的表面增强喇曼光谱研究

本文在银胶活性基质上获得了Cu(Ⅰ)的中位-四(4-N-氰甲基吡啶)卟啉络合物Cu(Ⅰ)NACN的表面增强喇曼光谱(SERS)光谱,并与其RRS光谱作了比较,讨论了pH值和Cu(Ⅰ)NACN的浓度对其SERS光谱的影响,研究了小牛胸腺双链DNA及其变性DNA与Cu(I)NACN的复合物的SERS光谱,指出Cu(Ⅰ)NACN是通过吡啶氮和卟啉核共同与银胶作用的,Cu(Ⅰ)NACN是斜向吸附在银表面上的,最佳pH范围在5～6,最佳浓度在大约10～5mol/L;双链DNA和变性DNA的加入不能改变Cu(Ⅰ)NACN在银胶表面上的斜向吸附,在银胶体系中双链DNA的磷酸根通过静电力与Cu(Ⅰ)NACN起弱相互作用,Cu(Ⅰ)NACN可能部分插入变性DNA单链并与之存在同双链DNA一样的静电作用.

甲苯胺蓝共振光散射法测定纳克级脱氧核糖核酸

研究了吩噻嗪类染料甲苯胺蓝 (TB)与DNA作用的共振光散射光谱 ,在pH 1 0～ 1 1的范围内 ,加入DNA导致甲苯胺蓝共振光散射增强 ,在 35 0nm处 ,存在一共振光散射增强峰 ,其强度与DNA浓度呈线性关系 ,据此建立了一种测定DNA的共振光散射法。对于ctDNA ,方法的线性范围为 0～ 90 0ng·mL-1 ,检出限为6 75ng·mL-1 ,RSD为 3 7% ;对于fsDNA ,方法的线性范围为 0～ 90 0ng·mL-1 ,检出限为 2 99ng·mL-1 ,RSD为 5 6 % .

小檗碱共振光散射法测定脱氧核糖核酸

研究了小檗碱与DNA作用的共振光散射光谱 ,在pH =2 .0～ 2 .8的范围内 ,DNA的加入导致小檗碱共振光散射的增强 ,在 30 8nm处 ,存在一共振光散射增强峰 ,其强度与DNA的浓度呈线性关系 ,据此建立了一种测定DNA的共振光散射法。该方法的线性范围为 0～ 6 0 0 μg L ,相关系数为 0 .9972 ,检出限为 19.9μg L。将该方法用于混合样品中DNA的测定 。

中性红共振光散射法测定脱氧核糖核酸

本文基于脱氧核糖核酸 (DNA)对有机染料中性红的共振光散射的增强效应 ,拟订了一种测定DNA的共振光散射法。在pH 5 0～ 7 0范围内 ,有机染料中性红在DNA分子表面进行长距组装导致共振光散射增强。在 335 0nm处的共振光谱散射增强程度与DNA浓度呈线性关系 ,其线性范围为 0～ 6 0 0ng·mL-1,检出限可达 12 8ng·mL-1。该方法简便、快速 ,具有较高的灵敏度和准确度。将该方法用于混合样品中DNA的测定 ,结果令人满意。

铝离子与脱氧核糖核酸作用的共振光散射研究

在pH 2 .2 1的酸性介质中 ,Al3+ 与脱氧核糖核酸 (DNA)发生静电作用产生以 2 91.0nm为特征峰的共振光散射 (RLS)增强光谱 ,即Al3+ 主要与DNA分子表面的磷酸根结合 ,但DNA热变性将导致Al3+ 与DNA的碱基结合 ,使光散射信号降低。在 2 91.0nm处的共振光散射 (RLS)强度与DNA的浓度呈线性关系 ,据此建立了用共振光散射测量痕量DNA的新方法。方法的检出限为ng级 ,用于合成样分析 ,回收率在 91.6 %～ 10 5 .0 %。