磁性三维还原石墨烯的制备及其在电化学免疫检测牛乳中结核杆菌H37Ra的应用

研制基于四氧化三铁/三维还原氧化石墨烯(ferroferric oxide/three-dimensional reduced graphene oxide,Fe3O4@3D-RGO)复合修饰材料的电化学免疫传感器,并将其应用于牛乳中结核杆菌H37Ra的快速检测。采用水热一步还原法合成了Fe3O4@3D-RGO复合材料,并利用扫描电镜、电子能谱和拉曼光谱对材料进行表征;采用75%的乙醇和0.1%Nafion溶液作为分散体系制备了修饰电极,运用交流阻抗法(electrochemical impedance spectroscopy,EIS)对其电化学性能进行探讨,在最优条件下采用EIS法进行结核杆菌H37Ra的检测。结果显示,H37Ra浓度在1×10^3~1×10^8 CFU/mL范围内,电极阻抗与浓度的对数呈现较强的线性关系,回归方程为y=19.771gN-49.14,检出限为1×10^2 CFU/mL,检测时间15 min。该方法特异性强、重复性和稳定性良好。采用水热一步还原法制备Fe3O4@3D-RGO简便、环保,为便携式电化学免疫传感器的开发提供了技术支撑。

结核杆菌H37Ra免疫小鼠后脾淋巴细胞的杀伤活性及免疫机制的研究

目的探讨结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,产生特异性的脾淋巴细胞杀伤活性及其免疫机制。方法(1)分别以结核杆菌H37Ra、BCG和PBS免疫小鼠后第30天及第60天,分离各组小鼠脾淋巴细胞作为效应细胞,以表达Ag85B分泌蛋白的Sp2/0细胞为靶细胞,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的杀伤率;(2)在免疫后第60天,小鼠脾淋巴细胞经PPD刺激后,以RT-PCR法检测穿孔素mRNA及颗粒酶BmRNA的表达。结果(1)结核杆菌H37Ra组脾淋巴细胞的杀伤率明显高于PBS对照组(P<0.05),略高于BCG组;(2)H37Ra组和BCG组穿孔素、颗粒酶mRNA的表达量均显著高于PBS组(P<0.05),H37Ra组穿孔素mRNA的表达量显著高于BCG组(P<0.05),但颗粒酶BmRNA的表达量两组无差异。结论结核杆菌H37Ra免疫小鼠后,能增强脾淋巴细胞的杀伤活性,其机制可能与增加穿孔素、颗粒酶B的表达有关。

Mtb诱导的SD大鼠佐剂性关节炎模型的建立及评价

目的建立一种实验性SD大鼠佐剂性关节炎模型,为类风湿关节炎的研究提供一种简单、实用、可靠的动物模型。方法采用热杀死结核分枝杆菌H37Ra(Mtb)与矿物油混匀,一次性经尾根部皮下注射,诱导SD大鼠实验性类风湿关节炎的发生。在实验周期内,定期检测实验动物体重、血常规,并进行关节炎临床评分、足趾容积测定,以流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群变化;以ELASA方法测定血清TNF-α,关节组织中IL-1、IL-6和内皮生长因子(VEGF)水平;同时检测SD大鼠后腿踝关节软骨及滑膜的病理变化,以X-光检查验证模型骨侵蚀程度,通过多项综合指标评价该模型的可靠性。结果SD大鼠经Mtb免疫14d后,大鼠体重明显减轻,外周血白细胞、血小板及单核细胞数明显升高,T淋巴细胞亚群CD4/CD8比值增高。从免疫Mtb10d开始,模型组动物足趾和踝关节出现炎症信号,14～16d达到高峰。免疫28d后,大鼠外周血TNF-α水平升高,关节滑膜组织中IL-1和IL-6及VEGF水平上调。显微镜下病理检测结果显示,模型大鼠关节滑膜增生,淋巴细胞浸润,关节软骨增生。结论由Mtb诱导的SD大鼠关节炎模型与临床RA特征相近,具有模型复制成功率高、操作简单、经济实用等特点,可广泛用于抗类风湿关节炎药物的筛选及实验研究中。