结核感染T细胞斑点试验中结核特异性抗原/植物血凝素比值对肺外结核的诊断价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)中结核特异性抗原(TBAg)/植物血凝素(PHA)比值在肺外结核(EPTB)诊断中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月新乡医学院第一附属医院收治的522例疑诊的EPTB患者为研究对象,根据最终是否诊断为EPTB,将患者分为EPTB组(n=209)和非EPTB组(n=313)。2组患者均行T-SPOT.TB检测,比较2组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率、PHA斑点形成细胞(sfc)数、早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)sfc数、培养滤液蛋白10(CFP-10)sfc数及TBAg/PHA比值。比较ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数及TBAg/PHA比值对EPTB的诊断价值。结果EPTB组和非EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率分别为88.5%(185/209)和24.3%(76/313);EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果阳性率显著高于非EPTB组(χ^(2)=206.840,P<0.05)。EPTB组患者T-SPOT.TB检测结果中ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数、TBAg/PHA比值均显著高于非EPTB组,PHA sfc数显著低于非EPTB组(P<0.05)。根据受试者工作特征(ROC)曲线,TBAg/PHA比值诊断EPTB的特异度显著高于ESAT-6 sfc数和CFP-10 sfc数(P<0.05);ESAT-6 sfc数、CFP-10 sfc数、TBAg/PHA比值诊断EPTB的ROC曲线下面积和灵敏度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论TBAg/PHA比值可显著提高T-SPOT.TB诊断EPTB的特异度,在EPTB诊断中具有较好的应用前景。

Dot-ELISA法检测结核分枝杆菌特异性抗原CFP10的改进和建立

目的建立一种检测结核分枝杆菌特异性抗原培养滤液蛋白10(culture filtrate protein 10,CFP10)的斑点酶联免疫吸附试验(dot enzyme linked i mmunesorbant assay,Dot-ELISA)方法。方法采用真空泵抽吸浓缩检测样本,改进Dot-ELISA用改进前的和改进后的Dot-ELISA方法检测同一批临床确诊的结核性胸膜炎的胸腔积液25例和非结核性胸腔积液31例,比较方法改进前后检测CFP10的敏感性和特异性;改变实验程序中的工作条件(硝酸纤维素膜的孔径、滴加样本的体积、真空泵抽吸的压力、不同的封闭液、温育的温度和时间及抗体的滴度),确定最适工作条件及重复性和稳定性。结果改进前检测CFP10的敏感性为76.0%,改进后并应用最适条件的敏感性为96.0%,差异有统计学意义(P=0.042);特异性和重复性、稳定性实验结果表明,所建立的Dot-ELISA法特异性和改进前差异无统计学意义(P=0.641),且稳定性和重复性较好。结论所建立的Dot-ELISA是一种比较敏感、特异和稳定的检测方法,能用于结核特异性抗原的检测和疾病的诊断。

抗结核治疗中患者外周结核分枝杆菌抗原水平与特异性免疫应答相关性分析

目的:活动期结核病患者外周呈现相当水平的结核特异性细胞免疫应答,在治疗过程中也呈现一定的动态变化特征,这种结核特异性细胞免疫应答的抗原驱动因素则还未知。本研究通过同步分析肺结核患者在抗结核治疗过程中外周特异性抗原和抗原特异性T细胞应答水平的动态变化,探讨外周抗结核特异性细胞免疫应答的理论依据。方法:利用外周血抗原富集-质谱鉴定技术动态检测外周血浆中结核特异性抗原CFP-10在患者抗结核治疗过程中含量的动态变化,并采用流式细胞术同步分析CFP-10刺激后的T细胞应答水平,分析CFP-10含量变化与不同细胞因子分泌T细胞数量的相关性。结果:CFP-10抗原水平在患者治疗过程中呈现个体化差异,同时在TB治疗中CFP-10含量与CFP-10特异性IFN-γ^+CD4^+T细胞比例具有显著相关性(P=0.029),但是CFP-10的含量与TNF-α^+CD4^+T细胞比例之间则无相关性(P=0.98)。结论:本研究获得了结核病患者治疗过程中外周结核病原菌抗原的动态变化特征,据此可推断目前所采用的IFN-γ释放实验某种程度上可以反映患者外周结核分枝杆菌抗原的载量,上述基于结核病原学和机体免疫应答水平的同步检测,有利于进一步解析抗结核免疫应答的抗原驱动因素,并为建立新型抗结核治疗疗效评价的生物标志物提供前期理论依据。

结核菌特异性抗原ESAT-6及CFP-10在肺结核及肺炎患者中的诊断价值

目的分析结核菌特异性抗原ESAT-6及CFP-10在肺结核及肺炎患者中的诊断价值。方法将48例肺结核患者作为观察组,30例肺炎患者作为对照组,分别进行PPD及ELISA实验,对两组患者的结核菌特异性抗原在两种疾病中的诊断价值进行分析。结果经ELESA实验检测,观察组结核菌阳性率、特异度及灵敏度分别为87.50%、93.75%、89.58%;对照组结核菌阳性率、特异度及灵敏度分别为60.00%、66.67%、70.00%;组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。经PPD实验检测,观察组结核菌阳性率、特异度及灵敏度分别为45.83%、50.00%、47.92%;对照组结核菌阳性率、特异度及灵敏度分别为46.67%、50.00%、53.33%;组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用ELISA法对肺结核及肺炎患者ESAT-6及CFP-10抗原进行检测可鉴别两者的不同,与PPD法相比,ELISA法在肺结核及肺炎的鉴别中诊断价值更优。

不同人群结核分枝杆菌潜伏感染特异性IFN-γ检测分析

目的采用早期建立的特异性结核菌抗原IFN-γ Elispot检测技术,对深圳市不同人群结核菌潜伏感染的现状进行调查研究。方法采用结核菌特异性Elispot方法检测了34例深圳市某高校学生、18例结核病区医务人员、19例深圳市某IT公司职员、36例深圳市某生物技术公司职员、29例深圳市某公司后勤保安的结核菌抗原特异性IFN-γ反应水平。同时对各组人群还进行结核菌素皮试(PPD皮试)调查作为对照研究。结果各组人群中的Elispot检测阳性率分别是高校学生5.88%、结核病区医务人员55.6%、公司保安人员31.03%、IT公司职员31.57%、生物公司职员19.44%;PPD皮试阳性率为高校学生20.58%、结核病区医务人员88.9%、IT公司职员42.11%、生物公司职员41.67%、公司保安41.38%。结论Elispot检测诊断潜伏期结核分枝杆菌感染优于PPD皮试。

干扰素γ释放反应在结核病诊断中的应用研究

随着结核分枝杆菌特异性抗原（ESAT-6和CFP-10）的使用，干扰素释放反应对结核病的诊断价值越来越为人们重视，该实验具有较高的特异性和敏感性，最终会取代皮肤结核菌素实验。

脊柱结核影像学表现及实验室检测分析

目的分析脊柱结核患者的影像学及实验室检查特点。方法收集新乡医学院第一附属医院(河南省结核病医院)骨外科2015年5月至2016年6月收治的经病理学和细菌学检查确诊为脊柱结核的患者65例,所有患者均接受X线、CT、MRI检查以及血沉、C反应蛋白、结核菌素(PPD)皮肤试验、血清抗结核抗体、结核杆菌抗原特异性γ干扰素释放试验(T-SPOT.TB)等实验室检查。收集每例患者的基本临床信息、影像学资料及实验室化验结果,分析并比较各种检测方法对脊柱结核的诊断价值。结果 65例患者中,60例在3种影像学检查中均表现出椎间隙狭窄征象,占92.3%;23例患者X线显示有不同程度的后凸畸形,占35.4%;53例患者CT显示有死骨形成,占81.5%;64例患者MRI表现出椎间盘受累,占98.5%;54例MRI表现出椎旁脓肿征象,占83.1%。PPD皮肤试验、血清抗结核抗体、T-SPOT.TB的阳性率分别为61.5%、41.5%、86.1%。T-SPOT.TB的阳性率高于PPD皮肤实验(P<0.05)和血清抗结核抗体(P<0.05)。结论脊柱结核的3种影像学表现各具特点,3种影像学检查结合起来更有助于脊柱结核的诊断。与传统的结核病检测方法相比,T-SPOT.TB具有较高的敏感性,可以作为脊柱结核的辅助诊断方法。

抗结核治疗中特异性T细胞免疫反应动态分析及其临床意义

目前,抗结核的化疗方案包括2个月的强化期与4个月的巩固期,而治疗过程中特异性细胞免疫应答随细菌载量改变呈现的动态变化特征有可能成为治疗疗效的生物标志物,并为个性化治疗方案提供理论依据。为此,我们收集了9例活动性结核病患者治疗前,治疗2、4、6个月的外周血样本,采用酶联免疫斑点测定法(enzyme-linked immune spot assay,ELISPOT)测定了不同治疗阶段结核特异性抗原ESAT-6和CFP-10刺激下PBMC中分泌IFN-γ的细胞数量,同时分析了抗原特异性Th1型细胞因子分泌水平以及多功能T细胞比例的动态变化特征。结果显示:随着治疗的深入,ESAT-6及CFP-10刺激患者PBMC后,释放IFN-γ的细胞数量显著下降(P<0.05)。CD4^+IFN-γ^+T淋巴细胞的比例在治疗前与治疗6个月时相比有下降趋势,且治疗后结果具有归一性;虽然多功能T细胞有重要抗结核作用,但在我们统计的患者治疗过程中的变化不明显。以上结果表明抗结核治疗过程中外周淋巴细胞抗原特异性释放IFN-γ的细胞数量与CD4^+IFN-γ^+T淋巴细胞的比例随着患者的病情好转呈现下降趋势,提示抗原特异性细胞免疫应答的动态变化谱与病原菌负荷下降存在密切关系,可能成为抗结核治疗过程中的免疫学标志物。