干姜吴茱萸水煎液对大鼠结肠平滑肌细胞L型Ca^(2+)通道的影响

目的:探讨干姜吴茱萸水煎液对大鼠结肠平滑肌收缩及平滑肌细胞L型Ca^(2+)通道的影响机制。方法:采用0、0.01、0.1、1、10 g/L干姜吴茱萸(1∶1)水煎液依次作用于正常结肠平滑肌,10 g/L水煎液及L型Ca^(2+)通道激动剂BAY-K-8644依次作用于氯化乙酰胆碱(Ach)诱导后的正常平滑肌,检测平滑肌收缩张力、频率和振幅;全细胞膜片钳记录L型钙电流;Western blot检测各组细胞中L-型电压依赖钙离子通道α1C亚基(α1c)和钙调蛋白(CaM)蛋白表达情况。结果:1、10 g/L水煎液组能显著降低离体结肠平滑肌的收缩张力(P<0.05),对频率及振幅并无显著影响(P>0.05);与0 g/L水煎液组相比,Ach促进平滑肌收缩张力、频率和振幅显著增加(P<0.05);与Ach组相比,10 g/L水煎液显著降低平滑肌的收缩张力、频率和振幅(P<0.05);与10 g/L水煎液组相比,BAY-K-8644显著增加平滑肌的收缩张力、频率和振幅(P<0.05);与0 g/L水煎液组相比,Ach可显著增加ICa-L峰值电流密度(P<0.05);与Ach组相比,10 g/L水煎液显著降低ICa-L峰值电流密度(P<0.05);与10 g/L水煎液组相比,BAY-K-8644可显著增加ICa-L峰值电流密度(P<0.05);与对照组相比,Ach组结肠平滑肌细胞Ca^(2+)相对荧光强度峰值、α1c、CaM表达显著增加(P<0.05);Ach组相比,10 g/L组Ca^(2+)相对荧光强度峰值、α1c和CaM表达水平显著降低(P<0.05);与10 g/L组相比,BAYK-8644组Ca^(2+)相对荧光强度峰值、α1c、CaM表达显著增加(P<0.05)。结论:干姜吴茱萸水煎液可抑制大鼠结肠平滑肌收缩,并阻滞L型Ca^(2+)通道。

μ阿片受体在大鼠结肠平滑肌细胞中的表达

目的通过培养大鼠结肠原代平滑肌细胞,探索μ阿片受体(MOR)在结肠平滑肌细胞中的表达特性。方法分离、培养和鉴定结肠平滑肌细胞;运用免疫荧光组织化学双重标记法观察MOR、内吗啡肽2(EM2)、钙调蛋白(CaM)在结肠平滑肌细胞的分布特性;施加乙酰胆碱(ACh)(1×10^(-3)mol/L)或EM2(2μmol/L)后,Western blot技术检测CaM蛋白表达变化;单独或依次施加ACh(1×10^(-3)mol/L)和EM2(2μmol/L)后,钙离子成像法观察平滑肌细胞内钙离子浓度的变化。结果鉴定结肠平滑肌细胞:α-肌动蛋白(α-SMA)标记的阳性细胞占细胞总数的95%以上;免疫荧光组织化学双重标记显示,在结肠平滑肌细胞有MOR和EM2的分布,且所有MOR和EM2阳性细胞均与α-SMA有共存;Western blot检测发现,施加ACh 10 min后,CaM表达升高(P<0.05);施加EM210 min后,CaM表达降低(P<0.05);钙离子成像结果显示,单独施加ACh,平滑肌细胞内钙离子浓度明显升高(P<0.05);单独施加EM2,结肠平滑肌细胞内钙离子浓度下调(P<0.05),依次施加ACh和EM2后,EM2显著抑制了ACh诱发的钙离子浓度升高(P<0.05)。结论MOR和EM2在结肠平滑肌细胞有表达,且EM2可通过MOR抑制CaM的表达与降低钙离子浓度。

库容性Ca^(2+)内流介导大鼠远端结肠平滑肌收缩

目的探讨库容性Ca2+内流(capac itative Ca2+entry,CCE)是否参与大鼠远端结肠平滑肌兴奋-收缩偶联过程。方法利用器官离体装置、张力换能器、Powerlab 4/25T数据采集分析系统测定远端结肠平滑肌的张力。结果毒胡萝卜素(thapsigargin,TG,10 nmol.L-1~1μmol.L-1)诱导结肠平滑肌条产生持续的张力性收缩,不同浓度TG所致的同步收缩反应张力不同。在无钙Krebs液(包含1 mmol.L-1EDTA)中使用TG将肌条培养35 m in后,再加入Ca2+2.5mmol.L-1,比未使用TG处理的肌条产生的收缩张力明显提高(99%±28%vs70%±8%)。且TG耗竭胞内钙库后再复钙所致的收缩效应,不受L型钙通道阻断剂verapam il影响,但可被SOC通道阻断剂La3+减弱。结论TG耗竭胞内钙库后再复钙诱导的大鼠远端结肠平滑肌收缩反应由CCE介导,提示CCE是提供大鼠远端结肠平滑肌收缩的激活信号Ca2+的来源之一,参与完成结肠平滑肌兴奋-收缩偶联过程。

大黄素对MODS大鼠结肠平滑肌细胞动力信号转导的影响

目的观察大黄素对细菌性腹膜炎所致多器官功能不全综合征 (MODS)大鼠结肠平滑肌细胞动力的影响 ,探讨大黄素对该平滑肌细胞钙离子的作用机制。方法制成大鼠MODS模型后观察大黄素对MODS大鼠结肠平滑肌肌条和平滑肌细胞收缩的影响 ;特异性的肌球蛋白轻链激酶抑制剂 (ML 7)和选择性的蛋白激酶C阻制剂 (CalphostinC)对大黄素收缩MODS大鼠结肠平滑肌的影响及大黄素对MODS大鼠结肠平滑肌细胞钙离子的影响。结果大黄素能直接收缩MODS大鼠结肠平滑肌肌条和平滑肌细胞 ;ML 7和CalphostinC可不同程度的抑制大黄素的收缩作用 ;MODS状态下 ,大黄素仍然能升高细胞内钙离子的浓度 ;在MODS模型组肝素〔三磷酸肌醇 (IP3)受体阻制剂 ,Heparine〕和ryanodine受体 (RyR)阻滞剂能抑制大黄素升高钙离子 ;钙离子螯和剂 (EGTA)和尼莫地平 (特异性的细胞膜电压依赖性钙通道抑制剂 ,nifedipine)没有明显作用。结论大黄素能直接收缩MODS大鼠结肠平滑肌。它是通过升高钙离子的信号途径ML CK和增加钙敏感性的PKCα信号途径来介导MODS大鼠平滑肌收缩的。升高MODS大鼠结肠平滑肌钙离子的机制主要是通过肌浆网上IP3和RyR两种钙离子通道作用的受体。

小檗碱对豚鼠结肠平滑肌细胞内游离钙浓度的影响

采用Ca2 +荧光示踪剂Fura 2 AM和双波长荧光分光光度法 ,观察小檗碱 (berberine ,Ber)对酶法分离的豚鼠结肠平滑肌细胞内游离钙 ([Ca2 +]i)的影响并探讨其机制。在含 1 5mmol/LCaCl2 的HEPES Ringer缓冲液中 ,豚鼠结肠平滑肌细胞 [Ca2 +]i为 10 8± 9 4nmol/L (n =7) ,Ber对静息 [Ca2 +]i 无明显影响 ,Ber呈浓度依赖性抑制 ,6 0mmol/LKCl引起的 [Ca2 +]i 增高 ,IC50 值为 34 0 9μmol/L。在含 1 5mmol/LCa2 +和无Ca2 +的缓冲液中 ,30、10 0μmol/LBer均显著抑制 10 μmol/LACh所诱发的 [Ca2 +]i 的增高 ,且有浓度依赖性 ;同样Ber对环匹阿尼酸 (CPA)所致的 [Ca2 +]i 增高也有浓度依赖性抑制作用 ,有钙和无钙条件下IC50 分别为 37 97μmol/L和 49 70 μmol/L。结果提示 ,Ber对结肠平滑肌细胞外Ca2 +内流和细胞内钙释放均有抑制作用。

黄连素对结肠平滑肌细胞膜钙激活钾通道和延迟整流钾通道的影响

目的 研究黄连素对结肠平滑肌细胞膜钙离子激活钾通道 (IK(Ca) )和延迟整流钾通道 (IK(V) )的影响以初步探讨其治疗运动性腹泻的机制。方法 酶解法急性分离单个豚鼠结肠平滑肌细胞 ,运用膜片钳方法检测 10、5 0、10 0 μmol·L-1的黄连素对结肠平滑肌细胞膜IK(Ca) 和IK(V) 的影响。结果 10、5 0、10 0 μmol·L-1的黄连素可抑制豚鼠单个结肠平滑肌细胞膜IK(Ca) (P <0 0 1) ,当阶跃刺激为 +80mV时 ,其IK(Ca) 分别为生理盐水对照组的 (6 8 2 0± 5 17) % ,(5 5 89± 1 6 1) % ,(4 8 0 8± 2 4 5 ) % (P <0 0 1) ;10、5 0、10 0 μmol·L-1的黄连素可抑制豚鼠单个结肠平滑肌细胞膜IK(V) (P <0 0 1) ,当阶跃刺激为 +80mV时 ,其IK(V) 分别为生理盐水对照组的 (77 0 6± 6 4 2 ) % ,(6 8 6 7± 6 79) % ,(6 1 0 7±7 72 ) % (P <0 0 1)。结论 Ber能抑制豚鼠结肠平滑肌钙离子激活钾通道和延迟整流钾通道的开放 ,这可能是其治疗运动性腹泻的机制之一。

白芍总甙对豚鼠结肠平滑肌M受体作用的研究

目的 :探讨白芍总甙对离体豚鼠结肠平滑肌的作用方式及结肠平滑肌M受体在调节结肠运动中的作用。方法 :制备豚鼠结肠纵肌和横肌肌条 ,观察不同剂量白芍总甙及工具药对离体结肠肌收缩活性的效应。结果 :白芍总甙使豚鼠结肠离体平滑肌收缩积分和时间显著性增加。且收缩效应的改变具有剂量依赖性。白芍总甙的这种作用能被阿托品抑制。结论 :白芍总甙可通过延长结肠收缩时间 ,增强结肠收缩幅度而调节结肠运动 ,结肠平滑肌M受体是白芍总甙作用途径之一。

黄体酮对豚鼠结肠平滑肌及细胞膜钙依赖的钾通道电流的影响

目的 观察黄体酮 (Progesterone)对豚鼠结肠平滑肌肌条和细胞的作用 ,借此探讨肠易激综合征 (IBS)的病理生理机制。方法 急性分离豚鼠结肠平滑肌肌条和单个平滑肌细胞。采用TD 112S型等张传感器测量肌条收缩与舒张的幅值、频率 ,并用Axopatch 1 D膜片钳放大器测全细胞模式下的单个平滑肌细胞大电导的钙离子依赖钾通道电流(BKCa)。结果 6 4 8μmol·L-1黄体酮可抑制结肠带肌条的收缩 (0 1792± 0 0 873) g(n =6 ,P <0 0 5 ) ,而低浓度黄体酮仅抑制结肠环行平滑肌肌条的收缩 (16 2pmol·L-10 2 36 0g± 0 15 78g ,n =6 ,P <0 0 5 ;1 6 2nmol·l-10 4 332 g±0 2 111g ,n =6 ,P <0 0 1;3 2 4nmol·l-1部分肌条完全抑制P <0 0 1) ,其效应呈剂量依赖的趋势。细胞实验中 12 96μmol·L-1的黄体酮可抑制BKCa的幅值约 6 0 %± 17% (n =10 ,P <0 0 1) ,而灌流液含 5 μmol·L-1尼卡地平 (nicardip ine)时抑制BKCa的作用不明显。结论 高浓度黄体酮对纵行和环行平滑肌均有抑制作用 ,而低浓度主要抑制环行平滑肌的收缩 ,作用机制与减少细胞外钙离子内流及抑制BKCa有关 ,这种作用可部分解释在临床上IBS妇女患病更普遍的现象 。

鼠结肠平滑肌细胞的分离、培养与鉴定

目的建立体外培养鼠结肠平滑肌细胞的方法。方法应用酶解法分离大鼠的结肠平滑肌细胞,用含10%胎牛血清的DMEM液进行鼠结肠平滑肌细胞的原代培养及传代,并以免疫细胞化学对其进行鉴定。结果新鲜分离的结肠平滑肌细胞呈梭形,核居中。培养24h后细胞开始贴壁,3～5d后开始增殖,14d后细胞密集,呈峰谷样生长。细胞经平滑肌特异性肌动蛋白αactin鉴定,确定为平滑肌细胞。结论应用酶解法可得到急性分离的鼠结肠平滑肌细胞,用含10%胎牛血清的DMEM液重悬分离得到的结肠平滑肌细胞,经过10d左右的培养可以获得结肠平滑肌细胞。该方法重复性好,效果稳定。

钙稳态失衡在致结肠平滑肌收缩性改变中的作用

目的:应激可影响胃肠运动,是肠易激综合征(IBS)的重要发病因素之一。钙离子(Ca2+)在平滑肌收缩运动中起重要作用,肌细胞收缩时,胞浆内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)增加来源于细胞外Ca2+内流或肌浆网贮存钙释放;Ca2+可通过肌浆网再摄取或通过细胞膜排出胞外,导致[Ca2+]i降低。

雷尼替丁和西咪替丁对大鼠结肠平滑肌条收缩活动的影响(英文)

通过大鼠离体结肠平滑肌条实验 ,观察雷尼替丁 ( 0 .0 2 ,0 .2 ,2和 10mmol·L- 1)和西咪替丁 ( 0 .0 .8和 4mmol·L- 1)对结肠收缩活动的影响 .结果表明 :雷尼替丁和西咪替丁增加结肠头端环行肌和结肠尾端纵行肌的平均收缩幅度以及结肠尾端环行肌的运动指数 ,减小结肠头端纵行肌的平均收缩幅度 ,并均有一定的剂量效应关系 ;雷尼替丁增加结肠头端纵行肌的静息张力和结肠尾端纵行肌的收缩频率 ,西咪替丁则降低结肠肌条的收缩频率 .阿托品( 0 .0 1μmol·L- 1)部分阻断雷尼替丁 ( 0 .2mmol·L- 1)对结肠肌条的兴奋作用 ,但不影响西咪替丁 ( 0 .8mmol·L- 1)的作用 ;六甲溴铵 ( 10 μmol·L- 1)不影响雷尼替丁和西咪替丁对结肠肌条的作用 .提示 ,雷尼替丁和西咪替丁对结肠肌条主要表现兴奋作用 。

清胰汤对豚鼠离体结肠平滑肌收缩活动的影响

目的 :探讨清胰汤促结肠动力作用的机制。方法 :采用正交设计方案 ,观察不同药物对离体结肠平滑肌条张力的影响。结果 :清胰汤中的白芍、木香、延胡索和大黄有直接兴奋结肠的作用 ,其中白芍作用最强 (P<0 .0 5 )。结果

玉烛散对血虚型慢传输型便秘小鼠结肠平滑肌细胞内Ca^(2+)浓度及收缩的影响

目的:观察玉烛散对血虚型慢传输型便秘小鼠结肠平滑肌细胞胞内游离Ca^(2+)浓度及收缩作用的影响。方法:建立小鼠血虚型慢传输型便秘模型,制备不同浓度的玉烛散制剂,用莫沙必利做阳性对照,同时设置空白对照组。观察其对小鼠结肠平滑肌细胞胞内游离Ca^(2+)浓度及收缩的影响。结果:玉烛散中剂量组、玉烛散高剂量组和莫沙必利组在加入含药血清后,平滑肌细胞内Ca^(2+)浓度瞬时升高,30 s左右达到峰值,然后呈缓慢下降趋势,持续至600 s,与同组加药前Ca^(2+)浓度相比差异具有统计学意义(P<0.05);莫沙必利组、玉烛散中剂量组、玉烛散高剂量组平滑肌细胞收缩率分别为(4.64±1.23)%、(4.86±1.47)%、(4.67±1.73)%,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:玉烛散能提高血虚型慢传输型便秘小鼠结肠平滑肌细胞内Ca^(2+)浓度,中、高剂量的玉烛散可以促进结肠平滑肌的收缩。

黄芪对大鼠离体小肠、结肠平滑肌条收缩活动的影响

１ ％ ～１００ ％ 浓度的 黄芪水煎液对大鼠 离体小肠平滑肌 条和近端结肠纵行 肌条、环行肌条 以及远端结肠环行肌条的收缩活动无 明显 影响， 但 可明 显减 弱远 端 结肠 纵行 肌条 的 收缩 波平 均振 幅。酚 妥拉 明、 Ｌ Ｎ Ｎ Ａ 可部分阻断黄芪对远端结肠纵行肌条的抑制效 应，心得 安、消炎 痛则无 明显影 响，提示 黄芪的 这种作 用可能部分通过肾上腺素能α受体和 Ｎ Ｏ 途径。

自体游离结肠平滑肌片做内括约肌原位肛门重建术治疗低位直肠癌

从1994年5月至1996年2月,对32例低位直肠癌患者Miles术后采用结肠平滑肌片做内括约肌,辅以人工直肠瓣和肛管直肠角的原位肛门重建术,效果满意,该术式既能达到根治目的,又能提高患者的生存质量,并对排便功能进行评价,优12例,良14例,较好6例。作者重点介绍了手术方法,并对手术适应症,移植肌片的成活,术中应注意的问题进行了讨论。

薯蓣皂苷对脾虚泄泻大鼠结肠平滑肌的作用

目的:观察薯蓣皂苷对大鼠离体结肠肠平滑肌收缩活动的影响。方法:分组取大鼠离体结肠平滑肌肠段,将其置于灌流肌槽中,连接张力传感器,信号输入BL-410生物机能实验系统,加入不同浓度的薯蓣皂苷,分别记录结肠平滑肌的收缩活动。结果:薯蓣皂苷能显著地降低结肠肠平滑肌的张力,减小节律性收缩波振幅,不改变收缩的频率,此作用的潜伏期短。结论:薯蓣皂苷可抑制大鼠离体结肠平滑肌收缩活动。

大鼠结肠平滑肌细胞的钙库操纵性通道

目的:探讨大鼠结肠平滑肌细胞是否存在钙库操纵性通道(SOC)。方法:荧光探针Fura-2/AM标记细胞内游离Ca2+后,用荧光分光光度计检测毒胡萝卜素(thapsigargin)和咖啡因(caffeine)耗竭胞内钙库后激活的SOC通道对酶解分离的大鼠结肠平滑肌细胞[Ca2+]i的影响。结果:在无Ca2+缓冲液中,thapsigargin(1μmol/L)以及caf-feine(10 mmol/L)分别使[Ca2+]i由静息时(68.32±3.43)nmol/L升高至(240.85±12.65)nmol/L(、481.25±34.77)nmol/L,继之,向细胞外液中引入两种浓度的Ca2+(1.5 mmol/L和3.0 mmol/L),导致[Ca2+]i进一步升高,分别为(457.55±19.80)nmol/L、(1005.93±54.62)nmol/L;(643.88±34.65)nmol/L、(920.16±43.25)nmol/L。且上述升高效应对维拉帕米(verapamil,5μmol/L)以及KCl引起的细胞膜去极化不敏感,但可被La3+(1 mmol/L)抑制。结论:在酶解分离的大鼠结肠平滑肌细胞上,存在胞内钙库耗竭激活的SOC通道,为支持在电兴奋性细胞上存在库容性Ca2+内流提供了实验和理论依据。