九香虫含药血清对人结肠癌细胞SW480凋亡相关因子FADD·p53表达作用的研究

[目的]观察九香虫含药血清对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡相关因子FADD、p53表达的影响,初步探讨其诱导结肠癌细胞凋亡的作用机制。[方法]20只雄性SD大鼠按随机数字表法分为2组(生理盐水对照组和九香虫含药血清组),每组10只。其中,九香虫含药血清组给予九香虫煎剂灌胃5 d后,制备九香虫含药血清,按不同浓度体外作用于SW480细胞72 h。CCK8细胞增殖试验检测其对SW480细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测其对SW480细胞凋亡的诱导作用,Western blot法、荧光定量PCR法检测细胞中FADD、p53蛋白及mRNA的表达。[结果]各浓度九香虫含药血清对SW480细胞生长均有抑制作用,且明显促进其凋亡,凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。Western bolt及荧光定量PCR结果表明,九香虫含药血清干预可使FADD表达明显增强,p53表达明显减弱。[结论]九香虫含药血清可诱导人结肠癌细胞凋亡,并影响凋亡相关因子p53、FADD的表达,从而达到抗肿瘤作用。

人参皂苷Rg3对人结肠癌细胞株SW480增殖的影响及其作用机制

目的观察人参皂苷Rg3对人结肠癌细胞株SW480增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法取对数生长期SW480细胞,分别加入含160、80、40、0μmol/L人参皂苷Rg3的储备液(分别计为A、B、C、D组)培养24 h,采用MTT法检测人参皂苷Rg3对SW480细胞增殖活性(OD值)的影响,倒置显微镜观察人参皂苷Rg3诱导SW480细胞凋亡形态学改变,流式细胞术检测SW480细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、闭锁蛋白(Occludin)mRNA,Western blotting法检测ICAM-1、Occludin蛋白。结果与D组比较,A、B、C组细胞OD值下降,凋亡率增加,ICAM-1 mRNA、蛋白表达降低,Occludin mRNA、蛋白表达升高(P均<0.05)。结论人参皂苷Rg3可抑制SW480细胞增殖,促进其凋亡,机制可能与ICAM-1表达下调、Occludin表达上调有关。

刚地弓形虫细胞培养上清对人结肠癌细胞sw480增殖与凋亡的影响

目的观察刚地弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞系共培养上清对人结肠癌sw480细胞增殖的影响和诱导其凋亡与坏死的情况。方法取对数生长期的人结肠癌sw480细胞(1×106),建立弓形虫RH株速殖子数目分别为2×106、4×106、8×106、16×106的共培养模型,观察弓形虫速殖子在sw480细胞中的寄生,提取共同孵育72h后的培养上清,以新鲜培养基稀释为半量,体外作用人结肠癌sw480细胞12h、24h、48h、72h,CKK-8法检测吸光度(A450值)并计算抑制率;Annexin-v-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测细胞凋亡与坏死率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡DNA条带;透射电镜和荧光显微镜观察细胞形态学改变。结果弓形虫RH株速殖子可在人结肠癌sw480细胞内寄生和增殖。CKK-8法检测结果显示上述共培养上清对sw480细胞增殖抑制率随上清作用时间延长均明显增大,48h最大抑制率达44.55%。流式细胞仪检测显示实验组sw480细胞早期凋亡率和晚期凋亡与坏死率随上清作用时间延长均明显增加,48h早期凋亡率达最高值(11.54%),48h以后早期凋亡率下降,晚期凋亡和坏死率显著上升,72h总死亡率可达46.11%,细胞杀伤效果明显;琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA云梯状条带;荧光显微镜和透射电镜观察到细胞凋亡和坏死典型形态。结论弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞共培养上清对体外培养的sw480细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导sw480细胞凋亡与坏死。

二氢青蒿素对结肠癌细胞系SW480增殖凋亡的影响

目的:研究二氢青蒿素(DHA)对结肠癌细胞系SW480的增殖、凋亡的作用,初步探讨其机制。方法:采用结肠癌细胞SW480为研究对象,观测不同浓度和作用时间的DHA对细胞作用,MTT噻唑蓝比色法检测对细胞的增殖抑制作用,普通光镜观察细胞形态的变化,分别PI单染及Annexin-V双染法流式细胞术分析细胞周期分布和早期凋亡率的变化,免疫细胞化学检测凋亡抑制蛋白Survivin及效应蛋白Caspase-3表达情况。结果:DHA对SW480细胞增殖有抑制作用且呈浓度和时间依赖性。普通光镜下观察SW480呈典型的凋亡形态学改变。流式细胞仪检测细胞阻滞于G0/G1期,随药物剂量增大G0/G1期比例而逐渐增高,S期比例降低,Annexin-V双染法示早期细胞凋亡率呈明显浓度依赖性升高。免疫细胞化学结果示DHA作用48 h后Survivin表达减弱,而Caspase-3表达增强,呈剂量依赖关系。结论:DHA能显著抑制结肠癌细胞生长,影响细胞周期,诱导细胞凋亡,可能与抑制Survivin蛋白表达,促使Caspase-3表达增强有关。

香加皮杠柳苷通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导结肠癌细胞SW480凋亡

背景与目的:Wnt/β-catenin信号通路在人类肿瘤尤其在大肠癌的发生发展中起着重要作用。本研究分析了香加皮杠柳苷(periplocin extracted from cortex periplocae,CPP)对人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用,及对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法:MTT法检测CPP对SW480细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期的变化和凋亡。Western blot法检测CPP处理组与对照组细胞总蛋白、细胞浆蛋白及细胞核蛋白中β-catenin表达变化,电泳迁移率改变法分析CPP作用后SW480细胞核TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力变化。半定量RT-PCR法检测CPP作用后细胞中β-catenin、survivin、c-myc和cyclin D1 mRNA的表达。结果:CPP明显抑制SW480细胞增殖(P<0.01),并呈时间和浓度依赖性;0.5μg/mLCPP可将SW480细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡(P<0.05)。CPP作用后SW480细胞总蛋白、胞浆蛋白及细胞核蛋白中的β-catenin表达均明显降低(P<0.01),细胞核中TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力受到抑制,其下游靶基因mRNA表达水平下降(P<0.01),而β-catenin mRNA表达未见明显改变。结论:CPP可明显抑制SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制细胞Wnt/β-catenin信号转导通路有关。

前药热化疗对转CD基因结肠癌细胞SW480的作用机制

目的:探讨5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)热化疗对转染组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,CD)基因的大肠癌细胞SW480的作用及机制.方法:脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体G1CEACDNa转导入大肠癌细胞SW480,以G418筛选阳性克隆扩增后,采用水浴加温法,43℃作用30min共3次,同时给予前药5-FC进行敏感试验;RT-PCR法检测目的基因的表达,MTT法检测细胞存活率,电镜检测细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡.结果:SW480-CEACD细胞在43℃作用30min共3次条件下,CD基因能稳定表达;热疗本身对SW480细胞有一定的杀伤作用(P<0.05),转CD基因后,SW480细胞对5-FC的敏感性明显提高(P<0.01),热疗与前药5-FC合用,对SW480-CEACD的杀伤作用显著大于对未转基因细胞的杀伤作用(P<0.01,t=4.356,n=9),亦大于单独应用5-FC时对SW480-CEACD细胞的杀伤作用(P<0.05,t=2.376,n=9),增加了SW480-CEACD细胞对5-FC的敏感性,电镜及流式细胞术检测显示,细胞死亡以细胞凋亡为主,前药热化疗导致结肠癌细胞SW480产生G1期阻滞,凋亡细胞比例增加.结论:热疗与前药5-FC联合应用,导致结肠癌细胞SW480产生G1期阻滞,细胞凋亡比例增加,提高了CEA组织特异性CD/5-FC系统的靶向性杀伤作用.

大蒜提取液抑制人结肠癌细胞SW480和SW620的增殖和扩散

研究了天然大蒜提取液对人结肠癌细胞SW 480和SW 620的扩散、粘附和增殖的影响.结果表明:将SW 480和SW 620加入1μL/孔大蒜提取液的DMEM中,癌细胞扩散率降低了40%;培养96 h,增殖率分别降低8.6倍和10.8倍.表明大蒜提取液能抑制人结肠癌细胞SW 480和SW 620的增殖和扩散.

羽扇豆醇对人共刺激细胞及结肠癌细胞株SW480的影响

目的：共刺激细胞是一种对肿瘤细胞有杀伤作用的 NK样T细胞，既往研究表明羽扇豆醇作为一种天然植物提取物，能改变NK细胞、γδT细胞的生长及其对肿瘤细胞的作用。文中主要探讨羽扇豆醇对人共刺激细胞杀伤结肠癌细胞株 SW480的影响。方法取健康人外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子诱导为共刺激细胞；不同浓度的羽扇豆醇在作用于共刺激细胞及结肠癌细胞株不同时间段后，甲基偶唑蓝（ MTT）法检测羽扇豆醇对共刺激细胞及结肠癌细胞株 SW480生长的影响；乳酸脱氢酶（ LDH）法检测共刺激细胞对结肠癌细胞株SW480的杀伤活性。结果羽扇豆醇浓度在0．1～200.0μg/mL时对共刺激细胞的生长有促进作用，对结肠癌细胞株SW480有抑制作用；羽扇豆醇诱导后，共刺激细胞对SW480的杀伤活性增强，浓度为12．5 mg/L时与空白对照比较的差异有统计学意义（76％vs 40％， P＜0．05）。结论羽扇豆醇能促进共刺激细胞的增殖，抑制结肠癌细胞株SW480的生长，并能增加SW480对共刺激细胞的敏感性，增强共刺激细胞对SW480细胞株的杀伤能力。

舒林酸对结肠癌细胞SW480FasL蛋白表达及诱导淋巴细胞凋亡的影响

目的在体外通过细胞培养,探讨舒林酸对结、直肠癌发生、发展的化学预防机制。方法应用Western blot法检测舒林酸作用前后SW480细胞FasL蛋白表达的变化;应用流式细胞术检测舒林酸作用前后SW480细胞诱导淋巴细胞凋亡率的变化。结果舒林酸处理后较处理前SW480细胞FasL蛋白表达明显降低,而且FasL蛋白表达随舒林酸作用浓度增加显著降低;随舒林酸作用浓度升高,SW480细胞诱导淋巴细胞凋亡率明显降低,不同浓度组比较均有显著性差异(P<0.01)。结论舒林酸降低结肠癌SW480细胞FasL蛋白表达,使SW480细胞诱导Jurkat细胞凋亡率降低,可能是其对结、直肠癌发生、发展的化学预防机制。

抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞sw480中表达的研究

目的:初步探讨DLC-1基因在结肠癌细胞sw480中的表达改变及其可能机制;方法:采用RT-PCR和Western blot分析结肠癌细胞CaCo2、sw480的DLC-1表达情况;应用去甲基化药物5—氮杂胞苷处理DLC-1基因阴性表达的细胞株,观察用药前后该细胞DLC-1基因的表达水平、细胞周期、细胞增殖力和侵袭力的影响。结果:CaCo2细胞高表达DLC-1 mRNA,而sw480则呈现表达缺失。经去甲基化药物5—氮杂胞苷处理sw480后,DLC-1 mRNA恢复表达,比较用药前后sw480细胞增殖力下降、细胞周期被阻滞在G2期、细胞侵袭力减弱。结论:DLC-1基因可影响结肠癌细胞sw480的增殖能力和侵袭力,并使结肠癌细胞sw480细胞周期阻滞于G2期,DNA甲基化可能是导致DLC-1在sw480细胞中的失活的一个重要原因。

热化疗对转CD基因结肠癌细胞SW480的杀伤作用

目的 探讨 5 -氟胞嘧啶 ( 5 FC )热化疗对转染组织特异性胞嘧啶脱氨基酶 (CD )基因的大肠癌细胞SW 480的作用。方法 采用脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列 (TRS )驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体G 1CEACDNa转导入大肠癌细胞SW 480 ,以G 418筛选阳性克隆扩增后 ,采用水浴加温法 ,43℃作用 3 0min共 3次 ,同时给予 5 FC进行敏感试验 ;RT PCR法检测目的基因在靶细胞的表达。结果 SW 480 CEACD细胞在 43℃作用 3 0min共 3次条件下 ,CD基因能稳定表达 ;热疗本身对SW 480细胞有一定的杀伤作用 ( P <0 .0 5 ) ,转CD基因后 ,SW 480细胞对 5 FC的敏感性明显提高 (P <0 .0 1) ,热疗与前药 5 FC合用 ,对SW 480 CEACD的杀伤作用显著大于对未转基因细胞的杀伤作用 ( P <0 .0 1) ,亦大于单独应用 5 FC时对SW 480 CEACD细胞的杀伤作用(P <0 .0 5 ) ,热化疗增加了SW 480 CEACD细胞对 5 FC的敏感性 ,并可观察到明显的旁观者效应。结论 热疗与 5 FC联合应用 ,提高了CEA组织特异性CD /5 FC系统对结肠癌细胞SW 480的靶向性杀伤作用。

芥菜籽提取物对人结肠癌细胞系SW480凋亡的影响

目的观察芥菜籽提取物(MSE)对人结肠癌细胞系SW 480细胞凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法采用体外细胞培养技术,用CCK-8法观察MSE对人大肠癌SW 480细胞生长的影响;Hoechest3325荧光染色显微镜下观察凋亡细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡;Caspase-3活性检测试剂盒分析其凋亡机制。结果在浓度0.2～1.0 mg/m l作用24～72h范围内,MSE对SW 480细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.01)。24h内其凋亡率随着药物浓度的增加而增加,且逐渐从早期凋亡走向晚期凋亡,呈浓度依赖性;24 h内Caspase-3活性较对照组显著提高(P<0.05)。结论 MSE能有效抑制体外培养的人结肠癌细胞SW 480的生长,这种抑制作用与MSE促进肿瘤细胞凋亡、激活凋亡蛋白酶Caspase-3的活性有关。

新霉素抑制促胃液素促人结肠癌细胞株SW480增殖的研究

目的观察新霉素（ＮＭ）对五肽促胃液素（ＰＧ）促人结肠癌细胞株ＳＷ４８０增殖的影响，探讨肌醇脂质信号通路可能参与的作用及临床意义．方法ＭＴＴ比色分析法检测活细胞数（ＶＣＣ）；［３Ｈ］肌醇标记细胞进行三磷酸肌醇（ＩＰ３）分析；Ｃａ２＋荧光测定技术检测细胞内Ｃａ２＋浓度；［γ３２Ｐ］ＡＴＰ掺入法测定蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性．结果ＰＧ＋ＮＭ组的ＳＷ４８０细胞活细胞数降低，与对照组相比Ｐ＜００１，与ＰＧ组相比Ｐ＜００１；ＰＧ＋ＮＭ组细胞内ＩＰ３，Ｃａ２＋浓度降低，与ＰＧ组相比Ｐ＜００１，与对照组相比Ｐ＞００５；ＰＧ＋ＮＭ组膜ＰＫＣ活性降低，与ＰＧ组相比Ｐ＜００５，与对照组相比Ｐ＞００５．结论ＮＭ可能通过肌醇质脂信号通路而抑制ＰＧ促人结肠癌细胞株ＳＷ４８０的增殖，这将为结肠癌的抗信息传导治疗提供实验依据．

ALA-PDT对SW480结肠癌细胞周期阻滞作用及对G_1/S关卡调控因子的影响

目的:了解光动力疗法对结肠癌SW480细胞的周期阻滞作用与G1/S关卡调控因子之间的联系. 方法:对体外培养的SW480结肠癌细胞进行ALA-PDT实验,使用流式细胞仪技术观测基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法对SW480细胞的细胞周期阻滞作用,应用免疫细胞化学技术检测光动力疗法对G1/S关卡调控因子Chk2,P21wAF1/Cip1/Sdi1,CyclinD1蛋白表达的影响. 结果:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可在其作用后早期诱导SW480细胞产生G0-G1细胞周期阻滞,G0/G1期比例显著增加,而S期和G2/M期比例明显下降,且呈时间依赖性变化;光动力作用诱导SW480细胞G1/S关卡调控因子Chk2,P21wAF1/Cip1/Sdi1蛋白表达增高,降低CyclinD1 蛋白表达,与G1/S期阻滞进程相一致,均呈时间依赖性变化. 结论:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可诱导SW480 细胞产生G0-G1细胞周期阻滞,光动力疗法对SW480细胞的G0-G1期阻滞作用与其对多个G1/S关卡调控因子的调节事件有关.

p33^(ING1b)基因对人结肠癌细胞SW480生物学行为的影响

目的:构建pcDNA3.1(+)/p33ING1b真核表达载体及观察其对人结肠癌细胞SW480生长的影响。方法:构建人p33ING1b真核表达载体,采用脂质体转染方法,将pcDNA3.1(+)/p33ING1b转染人结肠癌细胞系SW480,G418筛选,挑选阳性克隆,阳性克隆经RTPCR及Westernblot鉴定后,通过生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测高表达p33ING1b基因的SW480细胞体外增殖情况,并用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变。结果:成功构建重组pcDNA3.1(+)/p33ING1b基因的真核表达载体,建立高表达p33ING1b基因的SW480细胞系,p33ING1b基因在SW480细胞中高表达后,其生长速度减慢,细胞凋亡率(15.4±1.7)%较空载体组(2.0±0.6)%及未转染组(1.6±0.8)%明显升高。结论:p33ING1b基因高表达对SW480细胞系具有生长抑制和促进凋亡的作用。

奥沙利铂对人结肠癌细胞LoVo和SW480/M5作用的实验研究

目的探讨体外实验奥沙利铂对人结肠癌LoVo和SW480/M5细胞的抑制作用及其可能机制。方法 MTT法检测不同剂量奥沙利铂对LoVo和SW480/M5细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪检测1/2GI_(50)和GI_(50)浓度奥沙利铂对LoVo和SW480/M5细胞周期和早期凋亡的影响。原子光谱吸收仪检测GI_(50)浓度奥沙利铂作用4、8、24h后LoVo和SW480/M5细胞DNA含铂量。结果奥沙利铂对LoVo和SW480/M5细胞增殖的抑制作用呈量效依赖;其GI_(50)浓度:LoVo细胞为6.5mg/L,SW480/M5细胞为58.0mg/L。自然对数增殖周期,LoVo细胞中G_1期细胞比例高于、G_2期细胞比例低于SW480/M5细胞(P<0.05)。奥沙利铂浓度GI_(50)时,降低肿瘤细胞G_1期比例,升高LoVo细胞S期比例较SW480/M5细胞明显,升高SW480/M5细胞而降低LoVo细胞G_2/M期比例。1/2GI_(50)、GI_(50)奥沙利铂均可诱导两种肿瘤细胞发生早期凋亡,但1/2GI_(50)L-OHP促凋亡作用两种肿瘤细胞间无统计学差异,GI_(50)L-OHP对LoVo细胞的促凋亡作用高于SW480/M5细胞。GI_(50)L-OHP奥沙利铂使两种肿瘤细胞DNA含铂量显著升高,并呈时效依赖。LoVo细胞DNA交联铂原子能力高于SW480/M5细胞。结论奥沙利铂主要通过阻滞细胞于S期或(和)G_2/M期并诱导细胞凋亡而抑制两种肿瘤细胞增殖。LoVo细胞对奥沙利铂敏感性明显高于SW480/M5细胞。

DcR3-siRNA对SW480结肠癌细胞系放射治疗敏感性的增强作用

目的:观察DcR3对SWF480结肠癌细胞系放疗前疗效评估的价值,以及应用siRNA沉默DcR3基因对增强放疗敏感性的作用.方法:ELISA方法检测经不同剂量放射性137Cs照射的SW480结肠癌细胞中DcR3的含量,应用siRNA技术,构建小双链DNA,克隆入表达载体,转染入经放射性照射的SW480细胞及对照组细胞.应用图像分析系统进行记录细胞集落数量,流式细胞仪检测细胞凋亡状况.结果:与对照组相比,不同时间和不同剂量放射线照射后,SW480细胞DcR3含量均有增加(P<0.05),当照射10G、48h后,其含量明显增加.经5G137Cs照射后的DcR3-siRNA-SW480转染的细胞集落数量减少.DcR3-siRNA照射的SW480细胞M1期峰值明显增高,凋亡小体明显增加.结论:DcR3高表达可能对放射线抵抗性有一定预示作用,DcR3-siRNA可增强SW480结肠癌细胞对放射性照射的敏感性.

全反式维甲酸提高人结肠癌细胞亚株SW480/M5对奥沙利铂敏感性

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoicacid,ATRA)提高人结肠癌细胞亚株SW480/M5对奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)敏感性的可能机制。方法 MTT法筛选ATRA和L-OHP实验浓度。流式细胞仪检测ATRA对肿瘤细胞周期影响。分别用ATRA、L-OHP、ATRA联合L-OHP作用SW480/M5细胞,MTT法检测药物对肿瘤细胞抑制率,流式细胞仪检测肿瘤细胞周期及凋亡率,原子光谱吸收仪检测肿瘤细胞DNA含铂(Pt)量。结果 L-OHP抑制SW480/M5细胞增殖的GI50为58.0mg/L,主要阻滞肿瘤细胞在S和G2/M期。ATRA8.0μmol/L作用24小时后,G1期细胞减少,S期细胞增多;作用72小时后,S期和G2/M期细胞增加并明显抑制肿瘤细胞增殖。8.0μmol/LATRA作用至48小时后联合L-OHP,两药联合由相加作用转变为协同作用;联合用药后S期和G2/M期细胞明显增多,细胞DNA含Pt量显著增加,呈时效依赖性。相对于单独用药,联合用药并不上调肿瘤细胞凋亡率。结论 ATRA通过改变SW480/M5细胞周期和提高细胞DNA含Pt量,明显增加肿瘤细胞对L-OHP敏感性。

PMS2通过ERK/ERCC1通路对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

目的:探讨减数分裂后分离蛋白2(PMS2)表达对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响,阐明PMS2与切除修复交叉互补组1(ERCC1)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号转导通路的关系。方法:将PMS2 siRNA质粒和PMS2过表达质粒分别转染入结肠癌SW480细胞(分别为PMS2敲减组和PMS2过表达组),同时设PMS2敲减对照组(siRNA-NC组)和PMS2过表达对照组(PMS2 control组)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中PMS2 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中PMS2蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数,流式细胞术检测顺铂作用后各组细胞凋亡率。通过String数据库,对PMS2、ERCC1和ERK上下游蛋白的关系进行生物信息学分析。SW480细胞分别采用3条siRNA进行PMS2和ERCC1敲减,采用RT-qPCR法验证PMS2与ERCC1的相互作用,采用Western blotting法检测各组细胞中PMS2、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平。结果:RT-qPCR法和Western blotting法检测,PMS2基因敲减和过表达细胞模型构建成功。与siRNA-NC组比较,PMS2敲减组细胞增殖活性和细胞迁移率明显升高(P<0.05或P<0.01),侵袭细胞数明显增加(P<0.01),顺铂作用后细胞凋亡率明显降低(P<0.01);与PMS2 control组比较,PMS2过表达组细胞增殖活性和细胞迁移率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01),顺铂作用后细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。蛋白-蛋白互作(PPI)富集P值为2.09e-07,包含ERCC1和ERK1/2等相互作用节点数共有13个,提示PMS2、ERCC1和ERK1/2之间可能存在调控作用。与siRNA-NC组比较,各PMS2敲减组细胞中ERCC1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01);与siERCC1-NC组比较,各ERCC1敲减组细胞中PMS2 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与siRNA-NC组比较,PMS2敲减组细胞中PMS2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);与PMS2 control组比较,PMS2过表达组细胞中PMS2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:PMS2表达可影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和抗凋亡能力。PMS2与ERCC1存在互相作用关系,并可通过调节ERCC1参与ERK信号转导通路。

miRNA-224-3p对人结肠癌细胞株SW480的增殖及侵袭的作用

目的探讨低表达miRNA-224-3p对结肠癌细胞株SW480增殖及侵袭的作用机制。方法采用siRNA技术沉默miRNA-224-3p在结肠癌细胞株SW480中的表达,实验分为si RNA组和NC组;采用CCK8法检测细胞增殖率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用Western blot检测细胞中miRNA-224-3p、Cyclin D1以及CDK4蛋白的表达;采用Transwell小室检测细胞侵袭力。结果转染si RNA后,siRNA组中miRNA-224-3p蛋白表达明显低于NC组(P<0.05);CCK8结果表明在结肠癌细胞株在转染24 h、48 h和72 h时的细胞增殖率分别明显低于NC组(P<0.05);流式检测结果表明在siRNA组中,处于G0~G1期的SW480的细胞数量显著高于NC组(P<0.05),处于S期的SW480细胞数量显著低于NC组(P<0.05);Western blot结果表明siRNA组中的Cyclin D1和CDK4蛋白表达明显高于NC组(均P<0.05);Transwell小室检测表明siRNA组细胞的侵袭力明显低于NC组(P<0.05)。结论低表达miRNA-224-3p可显著抑制结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭,其机制可能与阻滞细胞周期进程有关。