芬戈莫德对CT26结肠癌细胞表达Foxp3的影响

目的探讨芬戈莫德(FTY720)抑制小鼠结肠癌发展及影响CT26细胞Foxp3表达的机制。方法体内体外检测CT26细胞Foxp3表达率,ELISA检测小鼠血清的转化生长因子-β1(TGF-β1)的水平,流式细胞仪检测小鼠外周血、肿瘤回流淋巴结和肿瘤组织Foxp3+调节性T细胞(Tregs)的比例,计算抑瘤率,观察不同浓度FTY720对上述指标的影响。结果 FTY720明显抑制肿瘤生长,抑制CT26细胞Foxp3的表达,降低血清TGF-β1的水平,且剂量越大抑制效果越好(P<0.05);降低结肠癌小鼠外周血、肿瘤回流淋巴结,尤其是肿瘤组织Foxp3+Tregs的比例(P<0.05)。结论 FTY720抑制小鼠结肠癌的发展与肿瘤局部Foxp3+Tregs减少相关,而CT26结肠癌细胞Foxp3表达下调可能是FTY720抑制Tregs的重要原因。

大黄素对小鼠结肠癌CT26.WT细胞的抑制作用

目的探讨大黄素对小鼠结肠癌细胞CT26.WT的抑制作用。方法 MTT法检测大黄素对结肠癌细胞CT26.WT增殖的抑制作用;细胞划痕实验检测大黄素对结肠癌细胞CT26.WT迁徙的抑制作用;流式细胞仪检测大黄素对结肠癌细胞CT26.WT表达CC族趋化因子受体4(CCR4)和叉头蛋白3(Foxp3)的影响。结果大黄素明显抑制CT26.WT细胞的增殖,加入的大黄素浓度越高抑制效果越好(P<0.05);大黄素抑制CT26.WT细胞的迁徙,抑制效果随浓度升高而愈加明显(P<0.01);大黄素抑制CT26.WT细胞的Foxp3表达,而表达CCR4的肿瘤细胞的比例同样低于不加药组,这种抑制作用与大黄素的药物浓度呈负相关(P<0.01)。结论大黄素抑制小鼠结肠癌的CT26.WT细胞增殖,Foxp3和CCR4在CT26.WT细胞的表达降低,可能是大黄素抑制其迁徙的原故。

转染IL-17基因的小鼠结肠癌细胞体内抗肿瘤机制研究

目的:研究IL-17体内抗肿瘤的作用及其机制,为IL-17基因疫苗进入临床提供实验依据。方法:利用已建立的稳定转染小鼠IL-17全长基因的小鼠结肠癌细胞(C26/pc DNA3.1-IL-17)及相应的对照细胞(C26/pc DNA3.1、C26)建立荷瘤动物模型,观察小鼠的成瘤性、肿瘤生长情况及小鼠生存期的变化,检测各组小鼠脾细胞增殖情况、脾NK细胞杀伤活性;及脾淋巴细胞中Th1、Th2、Th17、Treg细胞特征性细胞因子和/或转录因子的表达;检测各组小鼠肿瘤浸润的淋巴细胞(TIL)的增殖反应情况;及肿瘤浸润巨噬细胞中M1特征性细胞因子IL-10和M2特征性细胞因子IL-12的表达。结果:将C26/pc DNA3.1-IL-17细胞接种小鼠体内后,荷瘤小鼠的肿瘤生长速度、体积均明显小于C26/pc DNA3.1细胞组及C26细胞组(P<0.05),接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的雄性小鼠移植瘤明显小于雌性小鼠移植瘤体积(P<0.05),各组小鼠生存时间没有明显区别(P>0.05);接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠脾细胞较接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠脾细胞增殖能力强(P<0.05),与正常小鼠脾细胞增殖能力比较无明显统计学差异(P>0.05),接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠脾细胞增殖能力较正常小鼠脾细胞增殖能力降低(P<0.05);在效靶比为40∶1和20∶1时,接种三种细胞的小鼠NK杀伤率较正常小鼠均降低(P<0.05),在效靶比40∶1时,接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞比接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠的脾淋巴细胞的NK杀伤率明显增强(P<0.05),效靶比10∶1时,各组之间没有明显统计学差异(P>0.05);接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠脾淋巴细胞较接种C26、C26/pc DNA3.1的小鼠脾淋巴细胞表达更高水平的IFN-γ(Th1的特征性细胞因子)、IL-4(Th2特征性细胞因子)、GATA-3(Th2特征性转录因子)、ROR-γt(Th17特征性转录因子)、IL-10(Treg特征性细胞因子)mRNA(P<0.05);接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠TIL较接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠TIL增殖能力强(P<0.05),接种三种细胞的小鼠TIL增殖能力较正常组小鼠均降低(P<0.05);各组荷瘤小鼠肿瘤浸润巨噬细胞中IL-10和IL-12 mRNA表达在各组荷瘤小鼠之间均无统计学差异(P>0.05)。结论:IL-17在小鼠体内具有明显的抗肿瘤作用,其抗肿瘤作用与增强机体免疫应答有关。

糙叶败酱中环烯醚萜苷元成分抗结肠癌作用的实验研究

目的:研究糙叶败酱中环烯醚萜苷元成分体外抗小鼠结肠癌细胞株C26作用和对小鼠结肠癌(C26)移植性肿瘤的作用。方法:采用四唑盐(MTT)比色法研究糙叶败酱中环烯醚萜苷元PS-Ⅰ和BJ3401对小鼠结肠癌细胞株C26生长的影响;于F1小鼠皮下注射小鼠结肠癌细胞株(C26)建立小鼠结肠癌移植性肿瘤模型,观察糙叶败酱中总环烯醚萜苷元对结肠癌移植性肿瘤小鼠的影响。结果:环烯醚萜苷元PS-Ⅰ、BJ3401可显著抑制小鼠结肠癌细胞株C26的生长,并且具有一定的剂量依赖关系;总环烯醚萜苷元可显著减轻荷瘤鼠瘤重。结论:糙叶败酱中环烯醚萜苷元具有抗结肠癌的作用。

胰高血糖素样肽-1受体的激活可抑制小鼠CT26结肠癌细胞生长并促进其凋亡

肥胖，伴或不伴2型糖球病，与恶性肿瘤发生牢增高有关。因此，有关2型糖尿病伴肥胖患者的治疗药物是否对肿瘤细胞的生长产生影响研究颇受人关注，胰高血糖样肽-1（GLP—1）由肠内分泌细胞产生并于进食后分泌，其可通过多种机制调节血糖水平，主要是抑制胰高血糖素分泌和刺激胰岛素分泌。

人参皂苷Rg3对小鼠结肠癌原发瘤切除后肝转移瘤生长的抑制作用

目的:探讨人参皂苷Rg3对小鼠原发瘤切除后肝内转移瘤生长的荧光成像及血管生成的影响,阐明人参皂苷Rg3抑制原发瘤切除促进转移瘤生长的内在机制.方法:慢病毒转染建立稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的BALB/c小鼠结肠腺癌细胞株(BALB/c micecolon adenocarcinoma cell line,CT-26),用细胞悬液法构建结肠癌肝转移瘤模型,分为原发瘤切除组、原发瘤未切除组、人参皂苷Rg3组.采用切除原发瘤及人参皂苷Rg3治疗10d,通过小动物活体成像系统观察肝转移瘤的生长情况.应用组织切片苏木素-伊红染色法,观察肿瘤转移灶情况.SP免疫组织化学法检测转移瘤MVD及细胞增殖,TUNEL技术检测转移瘤细胞凋亡.结果:应用慢病毒转染获得稳定表达高强度绿色荧光的CT-26-GFP细胞株.结肠癌肝转移模型治疗结束后,用波长470nm的蓝光激发,通过荧光活体成像系统观察剖离肝脏转移灶发出绿色荧光.原发瘤切除后,人参皂苷Rg3组平均肝转移灶荧光值较原发瘤未切除组及原发瘤切除组有明显的下降(314.17±54.23,388.82±25.97,427.18±44.31);人参皂苷Rg3组、原发瘤未切除组和原发瘤切除组转移瘤发生率分别为40%,50%,100%;平均肝脏质量分别为2.92g±0.60g,3.80g±0.33g,3.98g±0.52g;转移瘤血管密度分别为27.10±3.41,42.60±8.42,62.40±5.08;转移瘤细胞Ki67的表达分别为34.70±6.46,54.30±8.98,65.20±3.82;转移瘤细胞凋亡指数分别为28.37±3.86,12.50±2.99,9.90±2.88.结论:稳定表达绿色荧光蛋白的CT-26-GFP细胞系及其动物模型可以为原发瘤切除研究提供理想的实验材料,应用小动物活体成像系统能够客观定量评价肿瘤在小鼠肝脏的生长情况.人参皂苷Rg3明显抑制小鼠原发瘤切除后肝内转移瘤的生长,明显抑制转移瘤的血管生成及细胞增殖,促进细胞凋亡.

不同途径注射肿瘤RNA纳米脂质体疫苗对结肠癌生长的影响

目的本研究旨在比较CT26肿瘤细胞RNA负载于纳米脂质体后,使用不同途径注射所引起的生物体抗肿瘤生长的作用差异。方法将提取的肿瘤RNA载入到纳米脂质体制备成肿瘤RNA纳米脂质体疫苗,然后进行脂质体疫苗表征。肿瘤RNA纳米脂质体疫苗粒径为(120.0±12.1)nm,电位为(3.39±0.56)mV。最后在小鼠不同部位注射肿瘤RNA纳米脂质体疫苗,检测分析不同部位注射对小鼠结肠癌移植瘤生长的影响。结果通过肿瘤RNA纳米脂质体疫苗对移植瘤小鼠进行不同途径注射治疗,结果显示,相比皮下注射,腹腔注射能够更加有效地增强生物体抗肿瘤免疫反应,抑制移植瘤生长。最后,比较小鼠重要脏器的H&E染色,均未见脏器有明显的器质性病变。结论通过腹腔注射肿瘤RNA纳米脂质体疫苗比皮下注射能够更加有效地增强机体抗肿瘤免疫反应。

结直肠癌肝转移动物模型的建立

目的比较几种结直肠癌肝转移动物模型的建立方法,确定一种比较适合的结直肠癌肝转移动物模型。方法以BALB/c鼠为研究对象,随机分组,分别经脾脏、直肠、腹腔按不同剂量(0.1mL、0.2mL、0.3mL、1.0mL)(浓度为1×106个/mL)注入小鼠结肠腺癌细胞(CT26)悬液,其中腹腔组无1.0mL剂量,卡方检验比较三组动物模型组内及组间肝转移率。结果三种方法均能复制出结直肠癌肝转移动物模型,脾脏组0.1mL、0.2mL、0.3mL、1.0mL肝转移率分别为50.0%、77.2%、50.0%、27.0%;直肠注射组0.1mL、0.2mL、0.3mL、1.0mL肝转移率为50.0%、53.1%、16.7%、6.7%;腹腔注射组0.1mL、0.2mL、0.3mL肝转移率为10.0%、22.2%、10.0%。结论经脾脏注射0.2mL(1×106个/mL)BALB/c鼠结肠腺癌细胞株(CT26)是一种建立结直肠癌肝转移动物模型成功率较高的方法。而经肛门直肠注射0.1mL或0.2mL(1×106个/mL)BALB/c鼠结肠腺癌细胞株(CT26)是一种建立结直肠癌肝转移动物模型简便及符合结直肠癌肝转移规律的方法。