二氢青蒿素抑制结肠癌细胞株HCT-116并诱导凋亡的实验研究

目的:研究二氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对人结肠癌HCT-116细胞的体外抑制并诱导凋亡,并探讨其作用机制。方法:以不同浓度的DHA作用于体外培养的HCT-116细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞生长抑制率;应用流式细胞仪进行周期分析检测细胞凋亡情况;用Western Blotting法,检测不同浓度的DHA作用于肿瘤细胞时,凋亡相关蛋白Bcl-2,bax,cleavad-PARP表达情况。结果:在DHA作用后,HCT-116细胞生长受到明显抑制,IC50(半抑制浓度)值为14.18μmol/L。并呈一定的量效和时效依赖关系。流式细胞仪检测亚二倍体(sub-G0)比例增高;Western-Blotting检测药物处理细胞后Bcl-2表达水平下调,而Bax、cleavad-PARP表达水平明显上调。结论:DHA能抑制HCT-116细胞的生长增殖并诱导细胞发生凋亡。

竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响

目的研究竹节香附素A(Raddeanin A,RA)对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用不同浓度的RA(0.125~50.0μmol·L^(-1))处理HCT-116细胞24,48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力。RA(1.0,2.0,4.0μmol·L^(-1))干预后,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;采用Western Blot法检测细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达。选择低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L^(-1))作用于HCT-116细胞,采用细胞划痕实验和Transwell穿膜实验观察不同浓度RA对HCT-116细胞迁移的影响;采用铺有Matrigel胶的Transwell实验检测RA对HCT-116细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR法和Western Blot法检测RA对HCT-116细胞中MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白表达的影响。结果 RA干预24,48 h后的IC50值分别为5.967μmol·L^(-1)和4.797μmol·L^(-1),且呈现浓度与时间依赖性。与空白对照组比较,RA1.0,2.0,4.0μmol·L^(-1)浓度组凋亡、坏死的HCT-116细胞明显增多(P<0.05,P<0.01);线粒体膜电位坍塌率分别为70.2%,74.4%和91.6%,差异均有统计学意义(P<0.01);细胞内ROS含量均显著增加(P<0.01),且呈现浓度依赖性;Cleaved caspase-3蛋白的表达水平随RA浓度的增加而显著提高(P<0.01)。RA干预后与空白对照组比较,0.5,1.0μmol·L^(-1)浓度组的细胞愈合率显著降低(P<0.01);RA 0.25,0.5,1.0μmol·L^(-1)浓度组均能显著抑制HCT-116细胞的迁徙能力(P<0.01),均能显著抑制HCT-116细胞体外侵袭能力(P<0.05,P<0.01);RA 0.5,1.0μmol·L^(-1)浓度组MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白相对表达水平均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论 RA既能够有效抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,又能诱导该细胞的凋亡,可能与诱导细胞内ROS产生,导致线粒体膜电位坍塌,激活caspase信号通路有关。低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L^(-1))能明显抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭活性,可能与通过下调HCT-116细胞MMP-2、MMP-9m RNA及蛋白表达有关。

高菜硫代葡萄糖苷提取物对人结肠癌细胞HCT116的抑制作用

为了探讨高菜(Brassica juncea var.integlifolia)中硫代葡萄糖苷(简称硫苷)的含量、种类及其对人结肠癌细胞株HCT116细胞增殖和凋亡的影响,采用紫外分光光度法检测新鲜高菜中总硫苷含量,高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术鉴定硫苷化合物结构,流式细胞仪、蛋白质印迹法和实时定量聚合酶链式反应检测高菜硫苷提取物对人结肠癌细胞株HCT116细胞增殖和凋亡的影响。结果表明:新鲜高菜中总硫苷含量为15.45 mg/g;从高菜硫苷提取物(总硫苷质量分数为73.7%)中鉴定出2-丙烯基硫苷、4-甲基硫代丁基硫苷、4-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷3种主要的硫苷化合物;高菜硫苷提取物对正常人结肠成肌纤维细胞CCD-18Co没有抑制作用,但通过诱导细胞周期基因及相关信号蛋白(Cyclin B、CyclinD1、CyclinE)下调使HCT116细胞的细胞周期停滞,通过诱导细胞凋亡基因及相关信号蛋白(Caspase-3、Cleaved caspase-3)的上调使人结肠癌细胞株HCT116细胞凋亡,从而抑制人结肠癌细胞株HCT116细胞增殖。

白藜芦醇基于PI3K/Akt通路对人结肠癌细胞HCT-116凋亡的影响

目的:探究白藜芦醇基于PI3K/Akt通路对人结肠癌细胞HCT-116凋亡的影响及其相关分子机制。方法:通过MTT实验检测白藜芦醇对HCT-116细胞的增殖抑制效应;流式细胞仪检测白藜芦醇对HCT-116的促凋亡效应;蛋白免疫印迹实验检测HCT-116细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax、PI3K、Akt表达情况的影响。结果:白藜芦醇对HCT-116有明显的抑制增殖作用,并有效促进了其凋亡,且引起Caspase-3与Bax表达上调,Bcl-2表达下调并抑制了PI3K和Akt的磷酸化。结论:白藜芦醇可诱导HCT-116细胞发生凋亡,且与抑制PI3K/Akt信号通路的激活相关。

夏至草乙醇提取物对人结肠癌HCT-116细胞增殖及凋亡的影响

目的观察中药夏至草乙醇提取物对人结肠癌HCT-116细胞增殖及凋亡的影响。方法采用CCK-8法测定细胞增殖的抑制率,并采用流式细胞仪定量检测夏至草提取物诱导HCT-116细胞凋亡率。结果不同浓度的夏至草乙醇提取物溶液对人结肠癌HCT-116细胞增殖有抑制作用,且在一定的剂量范围内其抑制率具有剂量依赖性,浓度1500μg/m L的夏至草乙醇提取物溶液对人结肠癌HCT-116细胞具有显著抑制效应(P<0.01)。夏至草乙醇提取物对人结肠癌HCT-116细胞凋亡率高于对照组,但组间无统计学差异(P>0.05)。结论夏至草乙醇提取物能抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,并具有剂量浓度依赖性,但促细胞凋亡作用不明显。

金花茶花、种子和叶提取物对U937和HCT116细胞增殖抑制的实验观察

目的比较金花茶花、种子和叶提取物对人白血病细胞(U937)和结肠癌细胞(HCT116)增殖抑制的作用。方法常规传代培养2种肿瘤细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞活性。结果金花茶花和种子的95%乙醇提取物对U937和HCT116细胞增殖均有抑制作用,且细胞存活率随样品质量浓度的加大而降低。金花茶叶乙醇提取物和水提取都显示了较强的抑制U937细胞增殖的作用,呈现出剂量效应关系。而金花茶叶子的不同提取物对HCT116细胞增殖没有作用。结论金花茶花、种子和叶子均有抗肿瘤的作用。

大黄鱼粗多糖的抗突变效果和对HCT-116结肠癌细胞体外抗癌作用研究

本研究对提取的大黄鱼鱼鳔粗多糖（CPLYCSB）的抗突变效果和对HCT-116结肠癌细胞体外抗癌作用进行了测定。CPLYCSB显示出了对N-甲基-N1-硝基，亚硝基胍（MNNG）和黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发鼠伤寒沙门氏菌TA100菌株突变的抗突变效果，浓度为2．5mg/皿的CPLYCSB比1．25mg/皿CPLYCSB能够更好的提高抗突变作用。通过MTT（噻唑蓝）法测定出400μg／mL的CPLYCSB处理下HCT-116细胞的生长率降低了72．6％，比200（28．2％）和100μg/mL（12．4％）的CPLYCSB处理时得到了更高的抑制率。相比于低浓度的CPLYCSB，通过DAPI（4，6-二脒基-2-苯基吲哚）染色法观察到400μg/mL的CPLYCSB可以更明显的诱导癌细胞凋亡。400μg／mL高浓度的CPLYCSB可以上调HCT-116癌细胞的caspase-3、-8、-9凋亡基因表达。经过CPLYCSB处理后也可以显著下调炎症相关因子iNOS和COX-2的表达。400μg／mL的CPLYCSB也通过降低HCT-116癌细胞MMP-2和MMP-9基因表达来表现出比其他浓度CPLYCSB更强的抗转移效果。这些体外实验结果证明了CPLYCSB的抗突变和抗癌效果。

12种竹笋蛋白对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用

[目的]探讨不同种类竹笋蛋白的抗癌活性。[方法]采用植物活性蛋白提取试剂盒提取竹笋蛋白,CCK-8法检测不同浓度竹笋蛋白对胃癌细胞SGC-7901和结肠癌细胞HCT-116的增殖抑制作用,72h后显微拍照记录细胞生长情况,并计算IC50值。[结果]12种竹笋蛋白在体外均可强效抑制胃癌细胞SGC-7901和结肠癌细胞HCT-116的增殖,但抑制效果并不完全相同,在一定范围内,其抑制率与浓度呈正相关,呈现一定的剂量-效应关系。[结论]12种竹笋蛋白对肿瘤细胞,如胃癌细胞SGC-7901和结肠癌细胞HCT-116的增殖均有显著的抑制作用,为今后进一步研发竹笋源的低毒、高效的抗肿瘤药物奠定基础。

siRNA抑制真核翻译延长因子1A1表达对结肠癌细胞凋亡和药物敏感性的影响

目的研究特异性siRNA抑制结肠癌细胞HCT-116真核翻译延长因子1A1(e EF1A1)基因及其对结肠癌细胞HCT-116凋亡和药物敏感性的影响。方法设计针对人源结肠癌细胞HCT-116 e EF1A1基因的siRNA,转染至对数生长期的结肠癌细胞HCT-116,分别用反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法鉴定e EF1A1基因沉默的效果,用流式细胞仪检测e EF1A1基因表达抑制对结肠癌细胞HCT-116凋亡的影响,用噻唑蓝法(MTT)检测e EF1A1基因表达抑制后结肠癌细胞HCT-116药物敏感性的变化。结果 e EF1A1靶向siRNA能显著降低结肠癌细胞HCT-116中e EF1A1的表达,e EF1A1表达抑制后结肠癌细胞HCT-116的增值能力显著低于对照组(P<0.05),5-氟尿嘧啶和顺铂对e EF1A1表达抑制的结肠癌细胞HCT-116的半抑制浓度显著低于对照组(P<0.05)。结论 e EF1A1靶向siRNA能有效抑制e EF1A1基因表达,并能协同增强5-氟尿嘧啶和顺铂对结肠癌细胞HCT-116的杀伤作用和诱导凋亡作用。

延龄草皂苷通过降低成纤维细胞活化蛋白表达水平抑制人类结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的研究延龄草皂苷是否能通过影响纤维细胞活化蛋白(FAP)表达来抑制结肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法将对数生长期结肠癌细胞HCT116分为5组:对照组、siRNA组、低剂量实验组、中剂量实验组和高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别用含浓度为30, 60, 90 mg·L^(-1)延龄草皂苷的DMEM培养基100μL进行培养,对照组用等剂量的1%甲醇溶剂DMEM培养基进行培养,siRNA组用等剂量siRNA试剂且不含药物的DMEM培养基进行培养。用四唑盐(MTT)比色法增殖细胞实验筛选半数抑制浓度(IC_(50))及药物干预浓度;用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应分析检测FAP基因表达水平;用MTT比色法检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果对照组、siRNA组、低剂量实验组、中剂量实验组和高剂量实验组的细胞增殖抑制率分别为(0.00±0.01)%,(55.03±6.32)%,(12.63±1.82)%,(28.92±2.48)%和(46.22±5.01)%;这5组的FAP基因表达分别为1.00±0.01,0.01±0.01,0.42±0.13,0.12±0.06和0.03±0.05;这5组的细胞凋亡率分别为(5.02±0.92)%,(68.92±7.01)%,(18.02±2.11)%,(35.22±4.67)和(60.18±6.33)%;这5组的细胞迁移水平分别为150.67±16.24,21.97±1.63,90.27±9.33,65.20±5.31和41.37±3.46;这5组的细胞侵袭水平分别为139.00±13.52,12.40±1.00,87.17±8.00,52.43±4.20和35.63±2.18。上述指标,实验组与对照组比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论延龄草皂苷通过降低FAP表达水平抑制人类结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。

6种鸢尾黄素曼尼希碱衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的:对鸢尾黄素进行结构修饰,寻求新的具有抗肿瘤活性的化合物。方法:以鸢尾黄素为先导化合物,分别加入乙醇胺、甲胺、乙胺、二甲胺、二乙胺、正丙胺等胺类试剂和甲醛溶液,经曼尼希(Mannich)反应得到鸢尾黄素曼尼希碱衍生物,根据红外光谱、紫外光谱、质谱、核磁共振等确定其结构。采用溶解度试验法考察鸢尾黄素及其衍生物的水溶性;采用MTT法考察鸢尾黄素及其衍生物对人结肠癌细胞株HCT116、人肺癌细胞株A549、人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC50);以H22肝癌荷瘤小鼠为模型,考察鸢尾黄素及其衍生物(剂量均为100 mg/kg)的体内抑瘤率。结果:共合成6个鸢尾黄素曼尼希碱衍生物,分别为8-(N-羟乙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N-甲基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N,N-二乙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N,N-二甲基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N-乙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮、8-(N-正丙基)-亚甲基胺基-5,7,4′-三羟基-6-甲氧基异黄酮(依次记为化合物1~6)。与鸢尾黄素比较,6个衍生物的水溶性明显提高,溶解度是鸢尾黄素的5~20倍;其中化合物1、3、5对HCT116细胞的IC50分别为(34.82±3.27)、(16.21±4.13)、(33.12±3.25)μmol/L,均强于鸢尾黄素的IC50[(45.23±5.74)μmol/L];对A549细胞的IC50分别为(37.05±5.74)、(26.88±4.52)、(30.13±6.23)μmol/L,均强于鸢尾黄素的IC50[(53.24±6.34)μmol/L];对HepG2细胞的IC50分别为(23.74±1.45)、(18.96±2.34)、(30.95±2.87)μmol/L,均强于鸢尾黄素的IC50[(48.98±2.58)μmol/L];对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤率分别55.51%、57.20%、49.15%,且均高于鸢尾黄素的抑瘤率(33.05%),其余3个化合物相比鸢尾黄素的抗肿瘤活性无明显优势。结论:在本研究合成的6个鸢尾黄素曼尼希碱衍生物中,化合物1、3、5均具有强于鸢尾黄素的抗肿瘤活性。

油茶的粕、果皮和叶的抗肿瘤活性研究

目的比较油茶粕、果皮和叶提取物对多种肿瘤细胞增殖抑制的作用。方法常规传代培养5种肿瘤细胞,采用噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞活性。结果 30～90μg.mL-1油茶粕总皂苷、31.25～500μg.mL-1油茶果皮乙酸乙酯提取物30%乙醇洗脱物、62.5～500μg.mL-1油茶叶95%乙醇提取物乙酸乙酯萃取物呈剂量依赖性地抑制多种肿瘤细胞增殖。体外增殖抑制作用强弱为油茶粕总皂苷>油茶果皮乙酸乙酯捏取物30%乙醇洗脱物>油茶叶95%乙醇提取物乙酸乙酯萃取物。进一步确定了油茶粕总皂苷对人乳腺癌细胞(MCF-7)产生的明显抑制作用是通过破坏细胞膜而发挥作用的。结论分析比较后,分别确定了油茶粕、果皮和叶抗肿瘤的有效部位,填补了油茶粕总皂苷在肿瘤治疗领域的空白。