信号转导子与转录活化子6(STAT6)在人结肠癌细胞株HT29(STAT6^(high))、Caco2(STAT6^(null))细胞凋亡中的作用

目的通过分析信号转导子与转录活化子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)活化状态时不同的人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)凋亡情况来研究STAT6与细胞凋亡之间的关系,并从分子水平探讨其可能的机制。方法采用流式细胞仪检测人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)细胞凋亡的情况,比较其差异;同时采用RT-PCR检测人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)中凋亡相关基因(Caspase家族蛋白Caspase3 mRNA、Caspase7 mRNA和Bcl-2家族蛋白凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA、Bcl-xl mRNA、促凋亡蛋白Hrk mRNA)的表达水平,比较其差异。结果人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)细胞早期凋亡率为(13.30±0.73)%,明显高于HT29(STAT6high)的(2.00±0.43)%(P<0.01)。RT-PCR显示,人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)中Caspase3 mRNA和Caspase7 mRNA表达水平均明显高于HT29(STAT6high)(均P<0.01)。人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)中凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA、Bcl-xl mR-NA、促凋亡蛋白Hrk mRNA表达水平均明显高于HT29(STAT6high)(均P<0.01)。人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)、HT29(STAT6high)中STAT6活性水平与Caspase7、Caspase3、Bcl-2、Bcl-xl、Hrk mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.514、-0.562、-0.518、-0.512、-0.426,均P<0.05)。结论 STAT6可能参与结肠癌细胞凋亡,其机制可能与凋亡相关基因的表达有关。

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT116和HT29的增殖与凋亡

目的:观察青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度青蒿琥酯处理HCT116和HT29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测青蒿琥酯对人结肠癌细胞的增殖抑制效应,采用流式细胞术检测细胞凋亡的情况。结果:不同浓度青蒿琥酯(7.5、15、30、60、120μg/m L)处理两种人结肠癌细胞48 h后,抑制率随浓度增加呈上升趋势(HCT116:19.42%、24.59%、44.84%、74.15%、92.87%;HT29:11.77%、17.63%、34.23%、48.51%、70.59%)。不同浓度青蒿琥酯(0、60、120μg/m L)处理两种人结肠癌细胞24 h后凋亡率随浓度增加逐渐上升(HCT116:2.46%、51.36%、64.10%;HT29:1.14%、35.95%、43.45%)。结论:青蒿琥酯对人结肠癌CHT116和HT29细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用。

6-姜烯酚诱导人结肠癌细胞HT29凋亡及与VEGFR2表达变化的关系

本文通过研究不同浓度6-姜烯酚诱导结肠癌细胞HT 29凋亡及与VEGFR2(血管内皮细胞受体2)不同表达之间的关系,以探讨其可能的抑制结直肠肿瘤相关机制。通过应用不同浓度6-姜烯酚(0、10、20和40μM)分别对体外细胞实验培养的HT29细胞株进行诱导处理24 h,相差倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,CCK8(Cell Counting Kit-8)法测定药物诱导后细胞抑制率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度药物干预后细胞凋亡率及凋亡周期变化,最后用Western-blot检测分析VEGFR2蛋白不同表达变化。结果显示,与对照组相比,6-姜烯酚可呈浓度依赖性地诱导HT29凋亡,并使细胞周期G0/G1期细胞数由49.48%下降到24.39%和17.18%,而G2/M期细胞数由3.44%增加到34.78%和49.54%,进而将细胞周期阻滞在G2/M期,抑制细胞增殖,而且还不同程度地抑制了VEGFR2表达(p<0.05)。结果表明,6-姜烯酚主要是通过诱导HT29凋亡进而起到抑制肿瘤细胞增殖的作用,这可能与不同程度抑制VEGFR2有关。

人参皂苷Rg3对HT-29细胞株MMP-1表达和迁移能力的影响

目的:研究人参皂苷Rg3对结肠癌细胞株HT-29基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达和细胞迁移能力的影响。方法:体外培养HT-29细胞,分为人参皂苷Rg3高剂量组(100μg/mL)、中剂量组(50μg/mL)、低剂量组(25μg/mL)和空白对照组,培养HT-29细胞24、48、72h,RT-PCR法测MMP-1 mRNA表达。利用划痕实验观察Rg3对HT-29细胞迁移能力的影响。结果:24h高剂量组与对照组相比,有显著的统计学差异(P<0.01);48h低、中、高剂量组与对照组相比均有显著的统计学差异(P<0.05、P<0.01、P<0.01);72h低、中、高剂量组与对照组相比均有显著的统计学差异(P<0.01、P<0.01、P<0.01)。划痕实验中空白对照组过河时间为(47.33±2.49)h,低、中、高剂量组过河时间分别为(55.33±2.49)h(P<0.01)、(64.00±1.63)h(P<0.01)和(73.33±1.89)h(P<0.01)。结论:人参皂苷Rg3能抑制HT-29细胞MMP-1的表达和抑制HT-29细胞的迁移能力,并且随着药物浓度的增加及时间的延长,抑制作用增强。

白藜芦醇对结肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用研究

目的:观察白藜芦醇对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的增殖抑制作用。方法:使用不同浓度白藜芦醇处理体外培养结肠癌细胞系HT-29后,运用细胞计数试剂盒检测法(CCK-8)检测白藜芦醇对HT-29细胞生长的影响,流式细胞术(FCM)检测白藜芦醇对HT-29细胞凋亡率的影响。结果:CCK-8法检测显示白藜芦醇对HT-29细胞的增殖有明显抑制作用,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性(P<0.01)。FCM法检测结果提示,与阴性对照组比较,不同浓度的白藜芦醇可以提高HT-29细胞凋亡率(P<0.05)。结论:白藜芦醇对人结肠癌HT-29细胞的增殖有抑制作用,且能诱导HT-29细胞凋亡,是一种高效低毒的药物,其具体机制有待进一步探讨。

NF-κB p65基因沉默条件下HT29细胞中Survivin表达活性的研究

目的:以特异性siRNA转染结肠癌细胞HT29,沉默NF-κB p65基因的表达,研究肿瘤细胞中NF-κB p65调节Survivin基因的表达。方法:以噻唑蓝(MTT)法观察对细胞增殖活性的影响,明确最佳的作用浓度。通过Western Blot检测结肠癌细胞内NF-κB p65及Survivin蛋白表达水平的变化。将设计合成好的特异性针对NF-κB p65基因的片段,体外转染结肠癌细胞株HT29,Western Blot检测NF-κB p65基因沉默效应,进而观察对结肠癌细胞内Survivin蛋白表达水平的影响,明确NF-κB p65是否有Survivin表达的调节作用。结果:siRNA干扰后细胞内NF-κB p65蛋白表达水平降低,较对照细胞组差异有统计学意义(P<0.01)。同时NF-κB p65基因沉默后,取消了先前缺氧条件下细胞内Survivin的表达增高,与对照细胞组相比无统计学意义差异(P>0.05)。结论:采用特异性siRNA片段对结肠癌进行靶向NF-κB p65基因沉默,能有效降低Survivin基因的表达,抑制Survivin可能通过多种信号转导通路参与肿瘤的发生发展过程。

细胞黏附对结肠癌细胞凋亡及化疗敏感性的影响

目的:研究结肠癌细胞株与基质黏附对肿瘤细胞凋亡及药物敏感性的影响. 方法:应用MTT法研究细胞与基质成分纤维粘连蛋白(FN) 结合对药物敏感性的影响;采用TUNEL法检测细胞凋亡, 采用流式细胞术观察Bcl-2和Bax基因表达. 结果:HT29细胞与FN结合后,其耐药性明显增加(抑制率为12.2%,对照组为53.0%,P<0.01),甩抗β-1整合素抗体阻断其与FN结合,其对药物的敏感性又恢复至对照水平(抑制率为50.6%,与对照组比P<0.05);HT29细胞与FN 结合后,Bcl-2基因蛋白表达上升(62.1%),Bax表达降低(12.86%),凋亡率(8.75±1.08%)显著降低,对照组为(19.46±1.08%);阻断其与FN结合,Bcl-2表达明显下降(22.68%),而Bax表达上升(73.8%),凋亡率也升至(18.9±1.4%)(与对照组比P<0.05). 结论:肿瘤细胞与基质成分结合可上调Bax和下调Bcl-2基因表达,增强肿瘤细胞的抗凋亡能力,从而增加肿瘤耐药性.

NDRG2调控HGF/c-MET通路抑制结肠癌细胞的增殖

目的:探讨抑癌基因NDRG2通过调节HGF/c-MET信号通路,抑制结肠癌HT29细胞增殖的机制。方法:建立NDRG2过表达细胞株HT29-NDRG2及对照组HT29-Cherry,并于第1、2、3、4、5天以MTT法检测细胞增殖;以不同浓度的HGF(0ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、8ng/ml、10ng/ml)刺激HT29亲本细胞,并于第1、2、3天以MTT法检测HT29细胞的增殖;采用qPCR法检测NDRG2过表达细胞株HT29-NDRG2与对照组HT29-Cherry两组细胞中HGF的表达水平;Western blot检测HT29-Cherry和HT29-NDRG2两组细胞以及添加HGF(10ng/ml)刺激HT29亲本细胞后各组细胞中HGF/c-MET通路中关键分子的表达。结果:过表达NDRG2以及HGF刺激均可以显著抑制HT29细胞的增殖能力;NDRG2的高表达可以上调HGF的转录水平;HGF可以刺激c-MET和p-ERK1/2,并上调p21和p27,抑制HT29细胞的增殖;过表达NDRG2明显上调c-MET、p-ERK1/2,并诱导p 21和p 27的高表达,从而抑制HT29细胞的增殖。结论:NDRG2可以通过调节HGF/c-MET信号通路从而抑制结肠癌细胞HT29细胞的增殖能力。

姜黄素下调结直肠癌细胞Notch1信号通路研究

目的检测Notch1信号通路中Notch intracellular domain蛋白(NICD1蛋白)在大肠腺癌组织中表达的情况;探讨姜黄素对人结肠癌细胞SW480及HT29细胞中Notch1信号通路的影响。方法二步法免疫组化检测40例结直肠癌、31例癌旁肠组织石蜡切片中Notch1 intracellular domain蛋白(NICD1)的表达情况,通过对比人结肠直肠癌与癌旁正常肠黏膜细胞中蛋白阳性表达率判断NICD1蛋白与人结直肠癌的关系;不同浓度姜黄素(0、7.5、15、30、60μmol/L)分别处理结肠腺癌细胞SW480和HT29细胞24 h和48 h后,Western blot法检测细胞内NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达情况。结果 NICD1在人结直肠癌组织中均表达,阳性率100%,癌旁肠组织中部分表达,阳性率为90.3%,但癌组织表达强度明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果示姜黄素能下调人结肠腺癌细胞SW480及HT29细胞中NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达,有时间和剂量依赖。结论 Notch1信号通路中NICD1蛋白在结直肠癌组织中的过度表达可能与肿瘤的发生发展相关,其阳性表达的部位可能与癌组织的病理分期有关;姜黄素可能通过调控Notch1信号通路抑制结直肠癌细胞增殖。

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌HCT-8和HT29细胞株的作用及对Notchl与Notch2的基因表达的影响

表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）是茶多酚中含量最高、活性最强的单体，具有抗癌作用。本研究旨在观察EGCG对结肠癌细胞HCT-8和HT29细胞增殖的抑制作用及对Notch1与Notc2基因的影响，探讨其抑癌机制。

脂质体槲皮素对小鼠结肠腺异位实体瘤的影响研究

目的考察脂质体槲皮素对人结肠癌腺细胞株HT29 BALB/c小鼠异位实体瘤的作用。方法建立HT29结肠腺癌BALB/c小鼠肿瘤模型,将48只成模小鼠随机分成模型组、脂质体槲皮素组、槲皮素组、5-氟尿嘧啶组,每组12只。接种后4 d,模型组小鼠腹腔注射生理盐水0.3 mL,脂质体槲皮素组腹腔注射脂质体槲皮素50 mg/kg,槲皮素组腹腔注射槲皮素50 mg/kg,5-氟尿嘧啶组腹腔注射5-氟尿嘧啶15 mg/kg,每隔3 d注射1次,共注射8次。干预过程中记录各组小鼠肿瘤体积和体质量;末次注射后3 d处死各组小鼠,剥离肿瘤,称质量,测肿瘤体积,计算瘤体积抑制率和瘤质量抑制率,HE染色观察肿瘤病理表现。结果各组小鼠均无死亡,脂质体槲皮素组、槲皮素组的肿瘤体积均明显小于模型组(P均<0.05),但各组小鼠体质量比较差异无统计学意义(P均>0.05);脂质体槲皮素组、槲皮素组、5-氟尿嘧啶组的瘤体积抑制率分别为25.43%,22.27%,26.06%,瘤质量抑制率分别为15.47%,13.37%,16.66%,脂质体槲皮素组和5-氟尿嘧啶组均明显高于槲皮素组(P均<0.05),脂质体槲皮素组与5-氟尿嘧啶组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。HE染色显示脂质体槲皮素组与5-氟尿嘧啶组肿瘤坏死区域较模型组小,2组病理表现相似。结论脂质体槲皮素对HT29实体瘤有较好的抑瘤作用。

细胞周期调控在HT29结肠癌细胞低剂量辐射超敏感性中作用的研究

低剂量辐射超敏感性是细胞对低剂量照射（0．02～0．50Gy）较敏感，但对其后剂量区域（0．50～1．00Gy）敏感性下降。其发生机制现不清楚，可能与细胞周期调控有关^[1-2]。笔者观察HT29结肠癌细胞放射敏感性与1线照射剂量关系，分析不同剂量照射后细胞周期调控变化及Phos—pho—Cdc25C（Ser216）蛋白表达情况，探讨低剂量辐射超敏感性机制。

熊果酸诱导人结肠癌细胞HT29凋亡机制的研究

目的探讨熊果酸（ursolicacid，uA）对人结肠癌细胞系HT29增殖凋亡的作用及机制。方法采用MTF和双染实验检测uA对HT29细胞的增殖和凋亡；流式细胞术（FCM）检测UA对细胞周期和细胞凋亡率的影响；Western blot（WB）法检测uA作用后HT29细胞内cyt—c、caspase-3及Livin蛋白表达水平的变化。结果UA对HT29细胞的增殖抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。荧光显微镜观察UA作用后细胞呈凋亡特征改变。FCM检测发现，UA可将HT29细胞阻滞于G1期，随着UA浓度的增加，细胞凋亡率和凋亡峰值逐渐增高。WB结果显示随着UA浓度的增加，Livin蛋白和caspase-3酶原的表达逐渐下降，而caspase-3活性片段及cyt—c的表达逐渐升高。结论UA对人结肠癌细胞系HT29有较强的抑制增殖和诱导凋亡作用，其作用机制与激活线粒体凋亡途径及下调凋亡抑制蛋白Livin的表达有关。

红花多糖可显著抑制HT29结直肠癌细胞增殖

本研究采用MTT法检测红花多糖对HT29结肠癌细胞增殖的抑制作用,观察大肠癌细胞凋亡的形态,采用Annexin V和PI双染流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,采用蛋白质印迹法检测Caspase-3蛋白的表达,试图研究红花多糖对HT29结肠癌细胞增殖的抑制作用及其相关机制。研究结果表明各浓度组的抑制率均明显高于对照组(p<0.05)。随着药物浓度的增加,抑制率更显著,IC50=201.908 mg/L。实验组的浓度分别为160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L。HT29细胞周期的影响主要体现在HT29细胞G2/M期和S期。在实验组的浓度为160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L时细胞凋亡率显著高于对照组(p<0.05)。在160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L组Caspase-3蛋白表达显著高于对照组(p<0.05)。随着浓度的增加,表达量增加。说明红花多糖能显著上调Caspase-3蛋白。本研究初步得出结论:红花多糖能显著抑制HT29结肠癌细胞,其诱导HT29细胞凋亡的机制可能与阻滞细胞G2/M期,S期,及上调Caspase-3蛋白的表达有关。

黄连素对脱氧胆酸诱导的人结肠癌细胞株增殖抑制作用及机制

研究表明，胆汁酸特别是脱氧胆酸（DCA）与结直肠癌（CRC）的发生密切相关。DCA可促进结肠癌细胞增殖，其机制可能与其增强激活蛋白-1（AP-1）活性、诱导环氧合酶-2（COX-2）表达有关。黄连素（BER）又名小檗碱，已有研究发现其对某些类型的肿瘤细胞有抑制作用。本实验采用细胞培养方法，观察BER对DCA诱导的HT-29细胞增殖、AP-1及COX-2表达的影响，旨在阐明BER抗结直肠癌的分子机制。

小肠、结肠、直肠

阑尾类癌13例的综合治疗和预后分析；乙酰肝素酶的外源性表达对大肠癌HT29细胞侵袭性的影响；人大肠癌细胞蛋白质组中免疫球蛋白重链可变区和B7-1的表达；外周血癌胚抗原mRNA在大肠癌组织中的表达及其临床意义；大肠癌中EGFR、E-cadlherin的表达及相关性研究；大肠癌组织淋巴管分布特点及其与转移和预后的关系；

半枝莲中分离得到具有细胞毒活性的新 neo-克罗烷二萜生物碱

从半枝莲地上部分分离鉴定出4个新的neo-克罗烷二萜生物碱，命名为Scutebarbatines I～L。4个新的化合物对HONE-1、KB和HT29癌细胞株具有细胞毒活性，其IC50在3．2～8．3μM之间。

姜黄素通过激活过氧化物酶体增殖物激活受体-γ预防大鼠大肠癌变的实验研究

目的探讨姜黄素对二甲基肼(DMH)诱导的大鼠大肠癌发生的防治作用及其机制。方法Wistar大鼠按随机数字表法分为模型组(20只)和姜黄素组(20只),同时设正常对照组(10只)。应用DMH 20mg/kg皮下注射诱导制备大鼠大肠癌模型。计算各组大鼠大肠肿瘤的诱癌率及抑制率;利用免疫组化和Western blot方法观察姜黄素对大鼠大肠黏膜组织过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferatoractivated receptor gamma,PPARγ)表达的影响。培养人结肠癌HT 29细胞株,分为正常对照组、姜黄素加2-氯-5-硝基-N-苯基苯酰胺(GW9662)干预组和姜黄素组。采用MTT法检测不同浓度姜黄素对人结肠癌HT 29细胞株生长的抑制作用,Western blot方法检测姜黄素对人结肠癌HT 29细胞株PPARγ表达的影响。结果模型组大鼠诱癌率为80.00%(12/15),明显高于姜黄素组58.82%(10/17)(P<0.05),姜黄素对DMH诱导的大鼠大肠癌的抑制率达26.46%。与正常对照组比较,模型组和姜黄素组PPARγ表达均明显增强(P<0.01);与模型组同期比较,姜黄素组PPARγ表达亦明显增强(P<0.05)。MTT实验表明姜黄素可以抑制体外培养人结肠癌细胞株HT 29的增殖,且呈剂量和时间依赖性。与对照组比较,GW9662干预组及姜素组PPARγ表达均增强(P<0.01);与GW9662干预组比较,姜黄素组PPARγ表达亦增强(P<0.05)。结论姜黄素可抑制DMH诱导的大鼠大肠癌的形成,抑制体外培养的大肠癌细胞增殖,这种作用可能是通过激活PPARγ途径实现。