6-姜烯酚诱导人结肠癌细胞HT29凋亡及与VEGFR2表达变化的关系

本文通过研究不同浓度6-姜烯酚诱导结肠癌细胞HT 29凋亡及与VEGFR2(血管内皮细胞受体2)不同表达之间的关系,以探讨其可能的抑制结直肠肿瘤相关机制。通过应用不同浓度6-姜烯酚(0、10、20和40μM)分别对体外细胞实验培养的HT29细胞株进行诱导处理24 h,相差倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,CCK8(Cell Counting Kit-8)法测定药物诱导后细胞抑制率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度药物干预后细胞凋亡率及凋亡周期变化,最后用Western-blot检测分析VEGFR2蛋白不同表达变化。结果显示,与对照组相比,6-姜烯酚可呈浓度依赖性地诱导HT29凋亡,并使细胞周期G0/G1期细胞数由49.48%下降到24.39%和17.18%,而G2/M期细胞数由3.44%增加到34.78%和49.54%,进而将细胞周期阻滞在G2/M期,抑制细胞增殖,而且还不同程度地抑制了VEGFR2表达(p<0.05)。结果表明,6-姜烯酚主要是通过诱导HT29凋亡进而起到抑制肿瘤细胞增殖的作用,这可能与不同程度抑制VEGFR2有关。

信号转导子与转录活化子6(STAT6)在人结肠癌细胞株HT29(STAT6^(high))、Caco2(STAT6^(null))细胞凋亡中的作用

目的通过分析信号转导子与转录活化子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)活化状态时不同的人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)凋亡情况来研究STAT6与细胞凋亡之间的关系,并从分子水平探讨其可能的机制。方法采用流式细胞仪检测人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)细胞凋亡的情况,比较其差异;同时采用RT-PCR检测人结肠癌细胞株HT29(STAT6high)和Caco2(STAT6null)中凋亡相关基因(Caspase家族蛋白Caspase3 mRNA、Caspase7 mRNA和Bcl-2家族蛋白凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA、Bcl-xl mRNA、促凋亡蛋白Hrk mRNA)的表达水平,比较其差异。结果人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)细胞早期凋亡率为(13.30±0.73)%,明显高于HT29(STAT6high)的(2.00±0.43)%(P<0.01)。RT-PCR显示,人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)中Caspase3 mRNA和Caspase7 mRNA表达水平均明显高于HT29(STAT6high)(均P<0.01)。人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)中凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA、Bcl-xl mR-NA、促凋亡蛋白Hrk mRNA表达水平均明显高于HT29(STAT6high)(均P<0.01)。人结肠癌细胞株Caco2(STAT6null)、HT29(STAT6high)中STAT6活性水平与Caspase7、Caspase3、Bcl-2、Bcl-xl、Hrk mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.514、-0.562、-0.518、-0.512、-0.426,均P<0.05)。结论 STAT6可能参与结肠癌细胞凋亡,其机制可能与凋亡相关基因的表达有关。

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT116和HT29的增殖与凋亡

目的:观察青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度青蒿琥酯处理HCT116和HT29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测青蒿琥酯对人结肠癌细胞的增殖抑制效应,采用流式细胞术检测细胞凋亡的情况。结果:不同浓度青蒿琥酯(7.5、15、30、60、120μg/m L)处理两种人结肠癌细胞48 h后,抑制率随浓度增加呈上升趋势(HCT116:19.42%、24.59%、44.84%、74.15%、92.87%;HT29:11.77%、17.63%、34.23%、48.51%、70.59%)。不同浓度青蒿琥酯(0、60、120μg/m L)处理两种人结肠癌细胞24 h后凋亡率随浓度增加逐渐上升(HCT116:2.46%、51.36%、64.10%;HT29:1.14%、35.95%、43.45%)。结论:青蒿琥酯对人结肠癌CHT116和HT29细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用。

熊果酸诱导人结肠癌细胞HT29凋亡机制的研究

目的探讨熊果酸（ursolicacid，uA）对人结肠癌细胞系HT29增殖凋亡的作用及机制。方法采用MTF和双染实验检测uA对HT29细胞的增殖和凋亡；流式细胞术（FCM）检测UA对细胞周期和细胞凋亡率的影响；Western blot（WB）法检测uA作用后HT29细胞内cyt—c、caspase-3及Livin蛋白表达水平的变化。结果UA对HT29细胞的增殖抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。荧光显微镜观察UA作用后细胞呈凋亡特征改变。FCM检测发现，UA可将HT29细胞阻滞于G1期，随着UA浓度的增加，细胞凋亡率和凋亡峰值逐渐增高。WB结果显示随着UA浓度的增加，Livin蛋白和caspase-3酶原的表达逐渐下降，而caspase-3活性片段及cyt—c的表达逐渐升高。结论UA对人结肠癌细胞系HT29有较强的抑制增殖和诱导凋亡作用，其作用机制与激活线粒体凋亡途径及下调凋亡抑制蛋白Livin的表达有关。

NF-κB p65基因沉默条件下HT29细胞中Survivin表达活性的研究

目的:以特异性siRNA转染结肠癌细胞HT29,沉默NF-κB p65基因的表达,研究肿瘤细胞中NF-κB p65调节Survivin基因的表达。方法:以噻唑蓝(MTT)法观察对细胞增殖活性的影响,明确最佳的作用浓度。通过Western Blot检测结肠癌细胞内NF-κB p65及Survivin蛋白表达水平的变化。将设计合成好的特异性针对NF-κB p65基因的片段,体外转染结肠癌细胞株HT29,Western Blot检测NF-κB p65基因沉默效应,进而观察对结肠癌细胞内Survivin蛋白表达水平的影响,明确NF-κB p65是否有Survivin表达的调节作用。结果:siRNA干扰后细胞内NF-κB p65蛋白表达水平降低,较对照细胞组差异有统计学意义(P<0.01)。同时NF-κB p65基因沉默后,取消了先前缺氧条件下细胞内Survivin的表达增高,与对照细胞组相比无统计学意义差异(P>0.05)。结论:采用特异性siRNA片段对结肠癌进行靶向NF-κB p65基因沉默,能有效降低Survivin基因的表达,抑制Survivin可能通过多种信号转导通路参与肿瘤的发生发展过程。

姜黄素下调结直肠癌细胞Notch1信号通路研究

目的检测Notch1信号通路中Notch intracellular domain蛋白(NICD1蛋白)在大肠腺癌组织中表达的情况;探讨姜黄素对人结肠癌细胞SW480及HT29细胞中Notch1信号通路的影响。方法二步法免疫组化检测40例结直肠癌、31例癌旁肠组织石蜡切片中Notch1 intracellular domain蛋白(NICD1)的表达情况,通过对比人结肠直肠癌与癌旁正常肠黏膜细胞中蛋白阳性表达率判断NICD1蛋白与人结直肠癌的关系;不同浓度姜黄素(0、7.5、15、30、60μmol/L)分别处理结肠腺癌细胞SW480和HT29细胞24 h和48 h后,Western blot法检测细胞内NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达情况。结果 NICD1在人结直肠癌组织中均表达,阳性率100%,癌旁肠组织中部分表达,阳性率为90.3%,但癌组织表达强度明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果示姜黄素能下调人结肠腺癌细胞SW480及HT29细胞中NICD1、Notch1及HES-1蛋白的表达,有时间和剂量依赖。结论 Notch1信号通路中NICD1蛋白在结直肠癌组织中的过度表达可能与肿瘤的发生发展相关,其阳性表达的部位可能与癌组织的病理分期有关;姜黄素可能通过调控Notch1信号通路抑制结直肠癌细胞增殖。

红花多糖可显著抑制HT29结直肠癌细胞增殖

本研究采用MTT法检测红花多糖对HT29结肠癌细胞增殖的抑制作用,观察大肠癌细胞凋亡的形态,采用Annexin V和PI双染流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,采用蛋白质印迹法检测Caspase-3蛋白的表达,试图研究红花多糖对HT29结肠癌细胞增殖的抑制作用及其相关机制。研究结果表明各浓度组的抑制率均明显高于对照组(p<0.05)。随着药物浓度的增加,抑制率更显著,IC50=201.908 mg/L。实验组的浓度分别为160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L。HT29细胞周期的影响主要体现在HT29细胞G2/M期和S期。在实验组的浓度为160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L时细胞凋亡率显著高于对照组(p<0.05)。在160 mg/L、320 mg/L和640 mg/L组Caspase-3蛋白表达显著高于对照组(p<0.05)。随着浓度的增加,表达量增加。说明红花多糖能显著上调Caspase-3蛋白。本研究初步得出结论:红花多糖能显著抑制HT29结肠癌细胞,其诱导HT29细胞凋亡的机制可能与阻滞细胞G2/M期,S期,及上调Caspase-3蛋白的表达有关。

脂质体槲皮素对小鼠结肠腺异位实体瘤的影响研究

目的考察脂质体槲皮素对人结肠癌腺细胞株HT29 BALB/c小鼠异位实体瘤的作用。方法建立HT29结肠腺癌BALB/c小鼠肿瘤模型,将48只成模小鼠随机分成模型组、脂质体槲皮素组、槲皮素组、5-氟尿嘧啶组,每组12只。接种后4 d,模型组小鼠腹腔注射生理盐水0.3 mL,脂质体槲皮素组腹腔注射脂质体槲皮素50 mg/kg,槲皮素组腹腔注射槲皮素50 mg/kg,5-氟尿嘧啶组腹腔注射5-氟尿嘧啶15 mg/kg,每隔3 d注射1次,共注射8次。干预过程中记录各组小鼠肿瘤体积和体质量;末次注射后3 d处死各组小鼠,剥离肿瘤,称质量,测肿瘤体积,计算瘤体积抑制率和瘤质量抑制率,HE染色观察肿瘤病理表现。结果各组小鼠均无死亡,脂质体槲皮素组、槲皮素组的肿瘤体积均明显小于模型组(P均<0.05),但各组小鼠体质量比较差异无统计学意义(P均>0.05);脂质体槲皮素组、槲皮素组、5-氟尿嘧啶组的瘤体积抑制率分别为25.43%,22.27%,26.06%,瘤质量抑制率分别为15.47%,13.37%,16.66%,脂质体槲皮素组和5-氟尿嘧啶组均明显高于槲皮素组(P均<0.05),脂质体槲皮素组与5-氟尿嘧啶组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。HE染色显示脂质体槲皮素组与5-氟尿嘧啶组肿瘤坏死区域较模型组小,2组病理表现相似。结论脂质体槲皮素对HT29实体瘤有较好的抑瘤作用。