槲皮素对结肠癌HT29细胞增殖和迁移的影响

目的:探索槲皮素对结肠癌HT29细胞增殖和迁移的抑制作用及其作用机制。方法:通过细胞划痕和MTT实验研究槲皮素对结肠癌HT29细胞迁移和增殖的影响,用ELISA检测钙黏蛋白的含量,用Western blot和Q-PCR的方法研究CDK和MMP-9蛋白的表达。结果:槲皮素可以剂量依赖性的抑制细胞划痕的愈合,抑制结肠癌HT29细胞增殖,减少E-钙黏蛋白的降解,抑制CDK和MMP-9的表达。结论:槲皮素能够通过减少CDK、MMP-9的表达,减少E-钙黏蛋白的降解抑制结肠癌HT29细胞的增殖和迁移。

山慈菇提取物对结肠癌HT29细胞凋亡的影响

目的:研究山慈菇提取物对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法检测山慈菇提取物对人结肠癌HT29细胞抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Cyt-C、Bcl-2、Bax、Caspase-3的影响。结果:不同浓度的山慈菇提取物对HT29细胞增殖均有抑制作用,且抑制率呈时间、剂量依赖关系;山慈菇提取物干预后诱导HT29细胞凋亡(P<0.01)差异有统计学意义;山慈菇提取物诱导细胞凋亡过程中的CytC、Bax、Caspase-3蛋白表达明显增强,Bcl-2蛋白表达明显减弱(P<0.05)。结论:山慈菇提取物对人结肠癌HT29细胞有明显的促凋亡作用,其机制可能与上调Cyt-C、Bax、Caspase-3下调Bcl-2蛋白的表达有关。

自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞对结肠癌HT29细胞干细胞的体外杀伤实验研究

目的研究自然杀伤细胞(NK细胞)和自然杀伤T细胞(NKT细胞)对结肠癌HT29细胞干细胞的体外杀伤作用,为结肠癌的治疗提供依据。方法培养NK和NKT细胞,检测该细胞的细胞表型(包括CD3-、CD3+、CD56+、CD16+和CD336+的比例),并检测该细胞分泌的细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)以及分泌的穿孔素和颗粒酶的量及该细胞对HT29细胞及其干细胞的杀伤效果。用SPSS 13.0统计软件对数据进行处理。结果 NK和NKT细胞中的CD3-、CD3+、CD56+、CD16+和CD336+的比例分别为65.60%±5.56%、34.40%±3.54%、97.96%±4.57%、46.64%±3.03%和24.03%±2.34%,分泌TNF-α、IFN-γ、穿孔素和颗粒酶含量分别为(1 194.25±46.7)pg、(202.51±26.1)ng、(92.57±20.1)pg和(856.72±54.6)ng。NK和NKT细胞作为效应细胞,效靶比为10∶1、20∶1、40∶1、80∶1,对结肠癌HT29细胞及其干细胞的杀伤率分别为36.37%±3.45%、44.86%±4.97%、56.65%±5.31%、62.57%±5.89%和24.33%±2.03%、31.78%±3.11%、40.41%±3.54%、49.51%±4.31%。结论培养NK和NKT细胞是切实可行、有效的简单方法,为肿瘤患者的免疫治疗提供了一种新方法。

Survivin反义寡核苷酸对人结肠癌细胞HT29增殖和凋亡的影响

[目的]观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对HT29细胞增殖和凋亡的影响。[方法]针对sur- vivin基因序列设计合成survivin反义寡核苷酸并通过脂质体将其转染至HT29细胞中。噻唑蓝(MTT)法观察survivin ASODN对HT29细胞的细胞毒作用,测定IC_(50);Hoechst33342/PI双荧光染色后,观察转染survivin A- SODN后HT29细胞核变化;流式细胞仪检测细胞周期。[结果]200、400、600、800、1 000及1 200 nmol/L survivin ASODN分别处理HT29细胞44 h后,Ic_(50)值为1 000 nmol/L。200、400、600、800和1 200 nmol/L组抑制率分别为(12.38±7.96)%、(22.30±4.49)%、(26.51 4±3.08)%、(38.90±3.66)%和(63.97±4.50)%。1 000 nmol/L survivin ASODN处理HT29细胞36 h后,经Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到染色质高度浓缩、边缘化,凝集成明亮的团块。流式细胞仪检测1 000 nmol/L survivin ASODN处理HT29细胞36 h后,G_2期细胞显著增多。[结论]Survivin ASODN可显著抑制HT29细胞增殖,诱导其凋亡。Survivin靶向治疗可能成为结肠癌综合治疗的一种重要方法。

基于PI3K/Akt信号通路探讨重楼皂苷Ⅶ对人结直肠癌细胞增殖的影响

目的:观察重楼皂苷(PP)Ⅶ对人结直肠癌HT29和LoVo细胞增殖的影响及可能机制。方法:使用梯度浓度的PPⅠ、PPⅡ、PPⅦ处理人结直肠癌HT29和LoVo细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测药物对细胞活力的影响,统计药物对应最大半抑制浓度(IC50)值;克隆形成实验检测PPⅦ干预10 d对人结直肠癌HT29和LoVo细胞克隆形成的影响;细胞增殖检测实验分析梯度浓度PPⅦ作用48 h对人结直肠癌HT29和LoVo细胞增殖的影响;通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测HT29和LoVo细胞中磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路中内PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白水平变化。结果:PPⅠ、PPⅡ、PPⅦ均能降低HT29和LoVo细胞的活力,以PPⅦ效果最为显著;PPⅦ能够有效抑制HT29和LoVo细胞的克隆形成能力;PPⅦ能够抑制HT29和LoVo细胞的增殖能力。PPⅦ各剂量组可降低对应的p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平。结论:PPⅦ可能通过下调PI3K和Akt的磷酸化水平,抑制PI3K/Akt信号通路,从而抑制结直肠癌细胞的增殖。

胃肠安联合树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞对结肠癌细胞杀伤效果的实验研究

目的观察胃肠安(以下简称WCA)联合DC-CIK细胞对结肠癌HT29细胞和Hct116细胞的杀伤效果,为临床治疗结肠癌提供科学依据。方法建立结肠癌HT29细胞和Hct116细胞系,设置对照组(含二甲基亚砜的生理盐水)、WCA 500 mg/L组和WCA 1000 mg/L组。分别先后进行细胞毒实验、双染细胞流式术、细胞划痕实验,以及WCA联合DC-CIK细胞对结肠癌细胞的杀伤作用实验等。以细胞增殖抑制率、流式细胞仪检测结果、划痕伤口宽度和CD133+细胞的比例为研究指标。采用SPSS 20.0进行独立样本t检验,单因素方差分析、重复测量资料方差分析和SNK-q法。结果各组治疗结束后,WCA治疗组对细胞增殖的抑制能力明显高于对照组,且WCA 1000 mg/L组的抑制能力高于WCA 500mg/L组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,WCA治疗组中CD133+细胞比例明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),但2个治疗组之间差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,WCA 1000 mg/L组早调亡、晚调亡及总凋亡细胞数增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。划痕结果显示,与对照组相比,各治疗组的细胞迁移均被显著抑制,WCA 1000 mg/L组抑制效果更明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。随效靶比的升高,DC-CIK细胞联合WCA 1000 mg/L组对细胞的杀伤活性要强于单独使用DC-CIK组。结论WCA联合DC-CIK细胞对结肠癌HT29细胞和Hct116细胞的杀伤效果好于单独使用DC-CIK细胞。