黄芩汤体外诱导人结肠癌SW620细胞凋亡及其对凋亡相关因子表达的影响

目的:研究黄芩汤对人结肠癌SW620细胞凋亡的作用及其机制。方法:CCK-8和MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;酶标免疫测定Caspase-3和Caspase-8的相对活性。结果:与对照组相比,不同浓度黄芩汤处理的细胞增殖抑制率显著增加(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.05或P<0.01),抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达降低而促细胞凋亡蛋白Bax表达明显增高(P<0.05或P<0.01),Caspase-3和Caspase-8活性增强(P<0.05或P<0.01),并呈量效依赖关系。结论:黄芩汤能够有效的促进结肠癌SW620细胞凋亡,其机制可能与抑制Bcl-2表达而促进Bax表达并增强Caspase的活性有关。

miR-138靶向调控PDK1基因抑制人结肠癌SW620细胞侵袭

目的探讨人结肠癌SW620细胞中miR-138和PDK1基因的表达,阐明miR-138对PDK1基因的靶向调控作用以及对SW620细胞侵袭性的影响。方法培养SW620细胞并应用免疫荧光检测PDK1基因在细胞中的表达。采用生物信息学方法对miR-138和PDK1基因的靶向匹配关系进行预测并应用双荧光素酶报告基因系统鉴定。脂质体2000转染miR-138模拟物后,qRT-PCR检测miR-138和PDK1基因的表达,Western blot检测PDK1蛋白的表达,Transwell小室检测SW620细胞体外的侵袭性。结果倒置相差显微镜下可见人结肠癌SW620细胞均匀分布,形态规则均一;细胞免疫荧光显示细胞内有PDK1蛋白的表达,显示红色荧光。靶基因预测软件miRanda和Target Scan显示miR-138和PDK1基因匹配良好,双荧光素酶报告基因系统鉴定发现miR-138能够结合PDK1 m RNA 3’UTR并有效抑制其表达。qRTPCR和Western blot检测结果表明过表达miR-138能够导致PDK1基因表达的下降。Transwell实验表明miR-138的过表达能够抑制SW620细胞的侵袭。结论 miR-138通过靶向作用于PDK1 m RNA 3’UTR能够负性调控PDK1基因的表达,并能够抑制人结肠癌SW620细胞的侵袭。

三氧化二砷对人结肠癌SW620细胞OCT4和FOXO3a因子表达影响的研究

目的研究已证实三氧化二砷(As2O3)可杀伤干细胞,最新研究表明大肠癌是一种干细胞起源的疾病。实验研究As2O3对于大肠癌干细胞因子的作用及相关机制。通过观察FOXO3a基因沉默和激动后,As2O3对人结肠癌SW620细胞FOXO3a和OCT4表达的影响,探究As2O3对OCT4表达影响是否通过FOXO3a途径。方法采用脂质体转染siRNA方法降低人结肠癌SW620细胞FOXO3a的表达,采用PI3K抑制剂LY294002提高FOXO3a的表达。给予As2O3作用后,RT-PCR方法检测FOXO3a和OCT4 mRNA的表达,Western blot方法检测FOXO3a和OCT4蛋白的表达。结果①As2O3增加SW620细胞中FOXO3a mRNA及蛋白的表达,同时降低OCT4 mRNA及蛋白表达(P﹤0.05);②FOXO3a siRNA处理后,FOXO3a mRNA及蛋白的表达明显降低,OCT4 mRNA及蛋白的表达增加。LY294002处理后,FOXO3a mRNA及蛋白的表达增加,OCT4 mRNA及蛋白的表达减少(P﹤0.05);③FOXO3a siRNA处理后,As2O3对FOXO3a和OCT4蛋白及mRNA表达无影响(P>0.05),LY294002处理后,As2O3对FOXO3a和OCT4蛋白及mRNA表达无影响(P>0.05)。结论 As2O3能下调人结肠癌SW620细胞OCT4因子表达,其机制可能与上调FOXO3a因子表达有关。

NEDD4L增强IGF2BP2的泛素化对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨NEDD4L对人转移性结直肠癌细胞SW620迁移和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法:生物信息学分析筛选IGF2BP2/NEDD4L泛素化作用轴并构建NEDD4L过表达的SW620细胞株,实时荧光定量(RT-qPCR)检测NEDD4L mRNA表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,CHX和MG132处理SW620细胞,Western blot检测IGF2BP2蛋白的表达。同时构建Flag-IGF2BP2、His-NEDD4L、HA-Ub重组质粒并在293T细胞中采用免疫共沉淀检测NEDD4L对IGF2BP2的泛素化水平的影响。结果:SW620细胞中成功实现NEDD4L过表达,并且导致细胞增殖能力显著降低(P<0.05),凋亡能力显著上升(P<0.01);同时抑制细胞周期进程(P<0.05)。细胞迁移率显著降低(P<0.01),细胞侵袭数量显著降低(P<0.01);Western blot结果显示,过表达NEDD4L能够显著降低IGF2BP2、YAP、VEGFA的蛋白表达水平,Co-IP结果显示NEDD4L增强IGF2BP2与Ub的结合能力。结论:NEDD4L在结直肠癌细胞中通过增强IGF2BP2的泛素化,进而降低YAP、VEGFA的蛋白表达来实现抑癌功能。

重楼活性单体PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨重楼活性单体PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及其联合5-氟尿嘧啶(5-FU)和洛铂的抗肿瘤效果。方法采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度PP-22对人结肠癌SW620细胞增殖的抑制作用;分别观察PP-22联合5-FU和洛铂对人结肠癌SW620细胞增殖的抑制作用;碘化丙锭单染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blot法检测PP-22作用后细胞凋亡相关蛋白的表达。结果重楼单体PP-22能显著抑制SW620细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-22浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组和DMSO组相比有显著差异;PP-22联合不同浓度的5-FU和洛铂作用于SW620细胞48 h,可提高SW620细胞对5-FU和洛铂的敏感性;不同浓度PP-22作用于SW620细胞后,细胞周期阻滞于S期;PP-22作用后存在Caspase-3和Caspase-9蛋白的活化和降解,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L减少,促凋亡蛋白Bax的表达增加。结论 PP-22能显著抑制人结肠癌SW620细胞增殖,诱导细胞凋亡,提高SW620细胞对5-FU和洛铂的敏感性。

δ-生育三烯酚对人结肠癌SW620细胞抑制作用

目的探讨δ-生育三烯酚对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用。方法采用细胞生长曲线和real-time RT-PCR方法,观察各剂量下δ-生育三烯酚对细胞增殖抑制及对丝/苏氨酸磷酸激酶(GSK-3β)、结肠癌腺瘤性息肉蛋白(APC)及轴蛋白(Axin)在mRNA水平上表达的影响。结果δ-生育三烯酚对人结肠癌SW620细胞有明显抑制作用,24 h细胞生存率为14.4%～88.8%;GSK-3β及APC mRNA表达水平无明显变化,Axin mRNA表达水平为2.24～2.58,明显高于对照组(P<0.05)。结论δ-生育三烯酚能够明显抑制SW620细胞的生长,其机制可能与上调Axin mRNA水平有关。

miR-200c对结肠癌SW620细胞5-FU化学敏感性的影响

目的探讨结肠癌SW620细胞株中微小核糖核酸-200c(miR-200c)的表达对5-氟尿嘧啶(5-FU)化学敏感性的影响。方法实验分为miR-200c类似物转染SW620细胞株组(A组)、miR-200c类似物阴性对照转染组(B组)、miR-200c抑制物转染SW620细胞株组(C组)、miR-200c抑制物阴性对照转染组(D组)和空白对照组(E组)。采用RT-PCR、MTS及流式细胞术分别检测转染后细胞中miR-200c的表达、5-FU半数抑制浓度(IC50)及细胞凋亡;Western blot检测转染后细胞中磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)的表达。结果与B组相比,A组转染24h后miR-200c的表达水平提高了(35.94±0.39)倍(P<0.05),5-FU的IC50提高[(1512.67±0.48)μg/ml vs.(926±0.70)μg/ml](P<0.05),5-FU促细胞凋亡的作用降低[(5.01±0.25)%vs.(8.07±0.16)%](P<0.05)。与D组相比,C组miR-200c的表达水平降低了(19.61±0.86)倍(P<0.05),5-FU的IC50降低[(740±0.60)μg/ml vs.(941±0.59)μg/ml](P<0.05),5-FU促细胞凋亡作用提高[(12.23±0.60)%vs.(8.22±0.18)%](P<0.05)。转染48h后,A组p-Akt的表达较B组升高(P<0.05),C组p-Akt表达较D组降低(P<0.05)。结论在结肠癌SW620细胞中,降低miR-200c的表达可提高结肠癌细胞对5-FU的化学敏感性,可能与miR-200c调控Akt的磷酸化有关。

5-氮杂-2-脱氧胞苷提高结肠癌SW620细胞株对5-FU的化学敏感性

目的探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)可能增强结肠癌SW620细胞株对5-氟尿嘧啶(5-FU)化学敏感性的作用。方法分别用不含药物组(A组)、5-aza-CdR(B组)、5-FU(C组)以及5-aza-CdR联合5-FU(D组)作用人结肠癌SW620细胞株后,光镜下观察细胞形态学改变,MTT法测定细胞的生长情况和流式细胞术检测细胞凋亡。结果 A、B、C、D组细胞存活率分别为100%、(65.85±0.95)%、(45.14±1.44)%、(30.18±0.89)%;B、C、D组细胞存活率均明显低于A组(P<0.05),D组低于B、C组(P<0.05)。A、B、C、D组细胞凋亡率分别为(4.50±0.61)%、(16.80±0.57)%、(12.66±0.43)%、(42.07±0.85)%;与A组比较,B、C、D组引起细胞凋亡增加(P<0.05);与B组、C组比较,D组促进细胞凋亡作用更明显(P<0.05)。结论 5-aza-CdR在体外提高了结肠癌SW620细胞对5-FU的化学敏感性。

虎尾轮根黄酮类提取物影响结直肠癌细胞SW620增殖、克隆形成、凋亡及PI3K/AKT通路的研究

目的:探讨虎尾轮根黄酮类提取物对体外培养的人结直肠癌细胞SW620增殖、克隆形成、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:用不同质量浓度(0、10、25、50、100、250、500μg/mL)的虎尾轮根黄酮类提取物处理结直肠癌SW620细胞24 h,采用细胞计数(CCK-8)法检测虎尾轮根黄酮类提取物对SW620细胞增殖抑制的影响,筛选半数抑制浓度(IC_(50))作为后续实验干预浓度;实验分为4组,空白对照组、虎尾轮根黄酮类提取物(100μg/mL)组、通路特异性抑制剂LY294002(25μmol/L)组和虎尾轮根黄酮类提取物(100μg/mL)+LY294002(25μmol/L)组。克隆形成实验、流式细胞术和AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法检测细胞克隆形成、周期进程和凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析PI3K/AKT信号通路蛋白激酶B(AKT)磷酸化水平。结果:虎尾轮根黄酮类提取物可呈浓度依赖性抑制结直肠癌SW620细胞增殖,其干预SW620细胞24 h的IC_(50)为104.5μmol/L。与空白对照组比较,虎尾轮根黄酮类提取物组、LY294002组和虎尾轮根黄酮类提取物+LY294002组细胞克隆形成率显著降低、凋亡率及G_(0)/G_(1)期细胞比例显著升高,PCNA、Bcl-2 mRNA表达显著降低,Bax mRNA表达显著升高,AKT磷酸化水平显著降低(P<0.05);与虎尾轮根黄酮类提取物组及LY294002组比较,虎尾轮根黄酮类提取物+LY294002组上述各指标均显著改善(P<0.05)。结论:虎尾轮根黄酮类提取物可抑制结直肠癌SW620细胞增殖和克隆形成,并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

干扰ECT2基因表达对结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的探讨转染小干扰RNA(siRNA)干扰上皮细胞转化序列2(ECT2)基因的表达对人结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响及机制。方法采用脂质体Lipofectamine 2000转染试剂将ECT2特异性siRNA或非特异性siRNA转染至SW620细胞,分别记为si-ECT2组和si-NC组,将未行转染的SW620细胞记为Control组。采用实时荧光定量PCR法(real-time qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测各组SW620细胞中ECT2的mRNA和蛋白表达水平,采用Transwell侵袭实验检测各组SW620细胞的侵袭能力,采用划痕愈合实验检测各组SW620细胞的迁移能力,采用Western blotting法检测各组SW620细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达水平。结果与si-NC组相比,si-ECT2组SW620细胞中ECT2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,穿膜细胞数量明显减少,划痕愈合率明显降低,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Control组的上述各项指标与si-NC组之间的差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论干扰ECT2基因的表达能够抑制结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MMP-2和MMP-9蛋白表达有关。

藏红花素抑制音猬因子信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探究藏红花素抑制音猬因子(Shh)信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 2021年1月至2022年7月体外培养人结直肠癌细胞SW620,使用不同浓度(5、10、20、40、60、80 mg/L)的藏红花素处理SW620细胞24 h后,CCK-8法检测藏红花素对SW620细胞的细胞毒性作用。将SW620细胞分别用不同剂量藏红花素(10、20、40 mg/L,藏红花素L/M/H组)、40 mg/L藏红花素+1μmol/L Purmorphamine(藏红花素H+Shh通路激活剂组)、1μmol/L Purmorphamine(Shh通路激活剂组)处理,另设置未经处理的对照(Control)组,检测SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力以及Shh信号通路相关蛋白Shh、平滑蛋白(Smo)、神经胶质瘤相关癌基因-1(Gli-1)表达。结果 藏红花素以剂量依赖性方式降低SW620细胞活力。与对照组相比,Shh通路激活剂组SW620细胞活力升高,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数、Shh(1.47±0.09比1.27±0.08)、Smo(1.38±0.12比1.15±0.09)、Gli-1(1.25±0.09比0.98±0.07)蛋白表达增加,细胞凋亡率减少(P<0.05),藏红花素L组、藏红花素M组、藏红花素H组SW620细胞活力下降,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数减少,凋亡率增加,Shh(1.07±0.12、0.85±0.11、0.52±0.08比1.32±0.14)、Smo(0.96±0.11、0.72±0.08、0.43±0.06比1.19±0.12)、Gli-1(0.76±0.09、0.61±0.09、0.37±0.06比0.96±0.11)蛋白表达减少(P<0.05);与藏红花素H组相比,藏红花素H+Shh通路激活剂组SW620细胞活力升高,克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数增加,凋亡率减少,Shh(0.84±0.08比0.52±0.08)、Smo(0.81±0.09比0.43±0.06)、Gli-1(0.70±0.08比0.37±0.06)蛋白表达增加(P<0.05)。结论 藏红花素可抑制SW620细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,可能与抑制Shh信号通路有关。

δ-生育三烯酚对结肠癌细胞SW620中Wnt信号途径的影响

目的依据生育三烯酚的抗肿瘤作用,研究其对结肠癌细胞SW620细胞增殖抑制作用与Wnt信号途径之间的关系。方法采用MTT方法,观察不同剂量δ-生育三烯酚对细胞增殖抑制作用,通过Real-time RT-PCR检测Wnt途径相关因子mRNA的表达量变化情况,观察δ-生育三烯酚对细胞中wnt-1、β-catenin、c-jun、c-myc、cyclin D1及MMP-7mRNA表达水平的影响。结果δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖有明显抑制作用,20μmol/Lδ-生育三烯酚作用24 h对SW620细胞抑制率为70.43%,IC50值为15.18μmol/L。20μmol/Lδ-生育三烯酚对Wnt信号途径中的wnt-1、β-catenin、c-jun及c-myc mRNA表达降低(P<0.05);对cyclin D1及MMP-7 mRNA的表达无影响(P>0.05)。结论δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖抑制作用可能与其致Wnt途径中wnt-1、β-catenin、c-jun及c-myc表达降低有关。

Survivin反义寡核苷酸诱导SW620细胞凋亡过程中对caspase-3表达的影响

目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人结肠癌细胞株SW620增殖、凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位设计、合成反义寡核苷酸并通过脂质体将其转染至人结肠癌细胞SW620中。噻唑蓝(MTT)法观察survivin ASODN对SW620细胞增殖的抑制作用,测定IC50;转染36h后,Hoechst33342染色荧光显微镜下观察检测SW620细胞核变化,RT-PCR检测survivin ASODN处理后SW620细胞中caspase-3mRNA表达,分光光度法检测caspase-3酶活性。结果:转染8h后,SW620细胞中可见黄绿色荧光均匀分布。不同浓度survivin ASODN处理SW620细胞44h后,SW620细胞增殖显著受到抑制,IC50为1×10-6M。2×10-7,4×10-7,6×10-7,8×10-7and1.2×10-6M的survivin ASODN处理后,细胞生长抑制率分别为15.38±0.022%、24.04±0.023%、30.87±0.027%、45.02±0.018%和65.01±0.024%。Hoechest33342染色后荧光显微镜下可观察到染色质凝集并出现凋亡小体,RT-PCR检测到caspase-3mRNA表达上调,另外caspase-3酶活性显著升高。结论靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位设计合成的survivin ASODN可抑制显著结肠癌SW620增殖、诱导细胞凋亡,其机制与诱导caspase-3表达,提高caspase-3酶活性有关。

δ-生育三烯酚抑制结肠癌细胞Wnt途径的实验研究

目的依据生育三烯酚的抗肿瘤作用,研究其对人结肠癌细胞SW620细胞增殖抑制作用与Wnt信号途径之间的关系。方法采用MTT(噻唑蓝比色法)方法,观察不同剂量δ-生育三烯酚对细胞增殖抑制作用,通过免疫细胞化学染色法和蛋白免疫印迹方法测定Wnt信号途径中相关因子的蛋白表达情况。结果δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖有明显抑制作用,20μmol/Lδ-生育三烯酚作用24h对SW620细胞抑制率为70.43%,IC50值为15.18μmol/L。20μmol/Lδ-生育三烯酚可使人结肠癌细胞SW620中Wnt信号途径中的wnt-1、β-catenin、c-jun和cylin D1蛋白表达量显著下降(P<0.05)。结论δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖抑制作用可能与其致Wnt途径中wnt-1、β-catenin、c-jun和cylin D1表达降低有关。

活性氧抑制剂对绞股蓝皂苷抑癌作用的影响

【目的】研究活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对绞股蓝皂苷(Gypenosides,Gyp)作用下人结直肠癌SW620细胞生长抑制的作用。【方法】采用MTT法检测NAC对Gyp作用下SW620细胞增殖的影响;采用流式细胞仪观察NAC对Gyp处理的SW620细胞的线粒体膜电位、DNA片段生成及细胞凋亡的影响。【结果】NAC可以对抗Gyp对SW620细胞的增殖抑制;可解除Gyp诱导SW620细胞凋亡过程中引起的线粒体膜电位降低,从而抑制DNA片段生成的增加,进而抑制Gyp诱导的SW620细胞凋亡。【结论】Gyp在诱导SW620细胞凋亡的过程中启动了关键因子活性氧,从而导致线粒体膜电位下降、DNA损伤,并最终诱导细胞凋亡;活性氧抑制剂可以削弱这种影响。

HAS-2沉默抑制大肠癌细胞上皮间质转化

目的本研究主要探讨HAS-2沉默前后对大肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法分别用Realtime PCR及Western blot方法检测HAS-2 siRNA转染前后E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail mRNA、蛋白表达水平变化,用免疫荧光法观察HAS-2 siRNA转染前后E-Cadherin、Vimentin表达的变化。结果 E-Cadherin蛋白和mRNA在大肠癌细胞的表达水平在HAS-2 siRNA转染组比阴性对照组明显上调(<0.05),而Vimentin蛋白和mRNA,Snail mRNA and Slug蛋白在大肠癌细胞的表达水平在HAS-2 siRNA转染组表达水平比阴性对照组明显下调(<0.05)。结论 HAS-2沉默对大肠癌细胞EMT有抑制作用。

灵芝醇提取物的抗肿瘤活性研究

目的 探究灵芝醇提取物在体内外的抗肿瘤活性。方法 用灵芝醇提取物处理6种人肿瘤细胞系（表皮癌A431、胃癌BGC823、直肠癌Caco2、卵巢癌ES-2、肺癌NCI-H460、结肠癌SW620）,观察细胞的生长形态、绘制生长曲线、进行MTT实验及平板集落形成实验。分别ig给予胃癌BGC823裸鼠50、100、150 mg·kg^（-1）灵芝乙醇提取物,计算瘤体积、抑瘤率及脏器系数。结果 体外实验中,灵芝提取物对表皮癌A431、胃癌BGC823、直肠癌Caco2、卵巢癌ES-2、肺癌NCI-H460、结肠癌SW620细胞的半数抑制浓度分别85.86、193.43、51.32、168.72、82.61、212.98μg·m L^（-1）。体内实验中,灵芝提取物50、100、150 mg·kg^（-1）的抑瘤率分别为32.6%、43.5%、47.2%。结论 灵芝提取物抑制表皮癌A431、直肠癌Caco2、肺癌NCI-H460细胞的增殖作用较强,且浓度大于40μg·mL^（-1）时,抑制增殖的作用较明显,体外还能抑制胃癌BGC823的生长。