Survivin shRNA-APC双基因对结肠癌裸鼠皮下移植瘤细胞内质网通路中GRP78、Caspase-12 表达的影响

目的探讨细胞增殖因子短截型核糖核酸-腺瘤样结肠息肉基因(Survivin shRNA-APC)双基因对内质网应激凋亡通路中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-12(Caspase-12)表达的影响。方法将40只健康裸鼠随机分成5组(每组8只):SurvivinshRNA-APC双基因组(简称双基因组)、APC组、Survivin shRNA组、空载组和空白组。将前期构建好的Survivin shRNA-APC、APC、Survivin shRNA、空载稳转株及人HT-29结肠癌细胞分别接种至对应组裸鼠的左前腋下,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-timePCR)及免疫组化方法分别检测5组移植瘤组织细胞中GRP78、Caspase-12mRNA及蛋白的表达情况。结果与空白组、空载组比较,双基因组、APC组、SurvivinshRNA组GRP78.Caspase-12mRNA及蛋白的表达明显增强(P<0.05),与APC组和Survivin shRNA组比较,双基因组增加更显著(P<0.05),空载组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Survivin shRNA-APC双基因可能通过抑制Survivin表达,上调内质网通路中GRP78、Caspase-12mRNA及蛋白表达,最终诱导结肠癌细胞发生凋亡,且Survivin shRNA-APC双基因调控GRP78、Caspase-12mRNA及蛋白表达、诱导细胞凋亡能力较APC组和Survivin shRNA组强。

生长抑素受体-2和金属蛋白酶-2在大肠癌中的表达及意义

目的:检测生长抑素受体(SSTR)-2、金属蛋白酶(MMP)-2在大肠癌组织中的表达,分析其表达与病理类型及转移的关系。方法:采用免疫组化法检测SSTR-2,MMP-2在对照组、结肠腺瘤型息肉以及结肠癌组织中的表达。结果:SSTR-2在结肠癌中的阳性率及表达强度最低(31.5%),显著低于腺瘤型息肉(P<0.01),在高、中分化的腺癌中阳性表达高于低分化腺癌(P<0.05),SSTR-2在结肠腺瘤型息肉和正常结肠黏膜组织的表达差异无统计学意义(P>0.05),在结肠腺瘤型息肉中重度不典型增生明显低于轻-中度不典型增生(P<0.05),SSTR-2表达与结肠癌浸润深度及远处转移无关(P>0.05);MMP-2在结肠癌组织中阳性表达明显高于腺瘤型息肉(P<0.01),MMP-2在结肠腺瘤型息肉和正常结肠黏膜组织的表达差异无统计学意义(P>0.05),在结肠腺瘤型息肉中,重度不典型增生明显高于轻-中度不典型增生(P<0.05),MMP-2表达与结肠癌临床分期和淋巴结转移相关。结论:SSTR-2表达下降对诊断结肠癌有一定价值,MMP-2在结肠癌中高表达,在结肠癌的发生、发展和浸润转移中起重要作用,可作为反映结肠癌进展的生物学指标。

MiR-125a-5p靶向APC激活经典WNT信号通路促进hiPSCs分化为多巴胺能神经前体细胞

目的通过调节miR-125a-5p的表达实现人诱导性多能干细胞(hiPSCs)向多巴胺(DA)能神经前体细胞及DA能神经元的高效转化。方法应用MicroRNAs高通量测序与分析,miR-125a-5p的筛选、靶基因(APC)的预测与验证;miR-125a-5p前体miR-125a慢病毒载体的构建与包装,miR-125a-5p过表达hiPSCs细胞株的构建、筛选及其向多DA能神经前体细胞与DA能神经元的诱导分化;免疫细胞化学、实时定量PCR(qRT-PCR)及蛋白印迹(WB)法检测miR-125a-5p过表达hiPSCs与对照hiPSCs向DA能神经前体细胞及DA能神经元诱导分化过程中神经前体细胞标志物Nestin、底板细胞标志物Foxa2、DA能神经前体细胞标志物En1、DA能神经前体细胞分选标志物Corin、神经元标志物Tuj1及DA能神经元标志物TH的表达。结果 MiR-125a-5p在hiPSCs向DA能神经前体细胞及神经元诱导分化过程中的表达呈递增趋势,miR-125a-5p靶向调节经典WNT信号通路关键因子APC,稳定过表达miR-125a-5p的hiPSCs细胞株能向DA能神经前体细胞及DA能神经元分化,其诱导分化效率与对照hiPSCs相比在神经前体细胞(NPCs)阶段FOXA2、EN1、CORIN的表达明显增高,神经元阶段TH、DAT和Nurr1的表达明显增高,提示过表达miR-125a-5p的hiPSCs具有更好的向DA能神经前体细胞及DA能神经元的诱导分化潜能。结论 MiR-125a-5p能通过靶向下调APC的表达激活经典WNT信号通路活性,促进hiPSCs向DA能神经前体细胞及DA能神经元的诱导分化。