慢性阻塞性肺疾病大鼠结肠黏膜屏障的研究

目的建立慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠模型,探究COPD大鼠结肠黏膜屏障结构与功能的变化。方法将16只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组与COPD组,每组8只,通过烟熏联合气道内滴注脂多糖(LPS)法建立COPD大鼠模型,确认造模成功后透射电镜下观察结肠黏膜形态学变化,以酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠结肠黏膜黏蛋白2(MUC2)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,以PCR法测定大鼠结肠黏膜MUC2mRNA的表达。结果(1)与空白对照组比较,COPD组大鼠结肠黏膜肠上皮细胞排列不规则,细胞核、细胞器形态及排列不规则,结构破坏;细胞核核内异染色质凝集、沿核周分布;细胞间连接复合体桥粒连接稍模糊,细胞间隙明显增宽;绒毛减少,绒毛排列较规则。(2)与空白对照组比较,COPD组大鼠结肠黏膜TNF-α、IL-1β的表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);MUC2与MUC2mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论COPD大鼠存在结肠黏膜屏障结构改变与功能障碍。

抗生素暴露对小鼠肠道菌群的改变及结肠黏膜屏障功能的影响

目的:探讨抗生素暴露对小鼠肠道菌群及结肠黏膜屏障功能变化的影响。方法:32只雄性C57BL/J小鼠被随机分为对照组(N组)和抗生素组(M组),通过连续灌胃抗生素混合物诱导小鼠肠道菌群失调;实验期间记录小鼠的精神状态、体重和粪便性状,计算粪便含水量;实验结束后测量结肠长度并计算盲肠指数,收集外周血和结肠组织,无菌采集小鼠粪便;光镜下观察结肠组织病理学改变;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测外周血二胺氧化酶(DAO)和D-乳酸(D-LA)的含量;免疫组化法分析结肠组织黏蛋白2(MUC2)的表达;实时荧光定量逆转录多聚酶链式反应(RT-qPCR)检测结肠组织匀浆MUC2、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)mRNA表达;16S rRNA测序分析小鼠肠道菌群的改变。结果:与N组相比,M组小鼠精神状态欠佳,活动减少,体重变化无明显差异(P>0.05),粪便性状改变,粪便含水量升高(P<0.05),盲肠明显胀大(P<0.05),结肠组织缩短(P<0.05);结肠上皮完整性破坏,结肠腺体结构紊乱,隐窝结构萎缩,黏膜下层水肿,炎性细胞浸润;血浆DAO表达升高(P<0.05);MUC2蛋白及mRNA表达下调(P<0.01),TNF-α和IL-1βmRNA表达升高(P<0.01),IL-10 mRNA表达下降(P<0.05);菌群多样性降低,菌群的组成结构和代谢功能改变。结论:抗生素诱导肠道菌群紊乱,破坏肠道黏液屏障,引起结肠上皮完整性被破坏,导致结肠炎症的发生,引发抗生素相关性肠黏膜屏障损伤。

艾灸对菌群失调幼鼠结肠黏膜屏障的影响

目的观察艾灸对菌群失调幼鼠结肠黏膜屏障的影响,探讨艾灸对结肠黏膜的保护作用及机制。方法50只SPF级雄性Balb/c幼鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、阳性药组、艾灸组和联合组,每组10只。除空白组外,其余各组采用混合抗生素灌胃诱导菌群失调。造模14 d后干预,模型组每日固定束缚15 min;阳性药组予双歧杆菌四联活菌片0.68 g/kg灌胃;艾灸组艾灸“神阙”“中脘”“关元”“天枢”,15 min/次,1次/d;联合组在艾灸同时予双歧杆菌四联活菌片。连续干预14 d后,采集幼鼠粪便,采用16S rDNA测序检测肠道菌群多样性,腹腔注射脂多糖诱导肠道炎症反应,HE染色观察幼鼠结肠黏膜完整性,Western blot检测结肠组织Occludin、ZO-1蛋白表达。结果与空白组比较,模型组幼鼠肠道菌群丰富度指数Chao1、ACE及多样性指数Shannon显著降低(P<0.01),多样性指数Simpson显著升高(P<0.01);与模型组比较,艾灸组、阳性药组和联合组幼鼠肠道菌群多样性指数Shannon显著升高(P<0.01),多样性指数Simpson显著降低(P<0.01)。HE染色显示,与空白组比较,模型组幼鼠结肠黏膜损伤严重;与模型组比较,各治疗组幼鼠结肠黏膜损伤减轻,联合组幼鼠结肠黏膜损伤减轻最明显。Western blot结果显示,与空白组比较,模型组幼鼠结肠组织Occludin、ZO-1蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,艾灸组、阳性药组和联合组幼鼠结肠组织Occludin、ZO-1蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与艾灸组及阳性药组比较,联合组幼鼠结肠组织Occludin、ZO-1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论艾灸可保护菌群失调幼鼠结肠黏膜,其机制可能与增加肠道菌群多样性、维持肠道菌群结构稳定及保护结肠黏膜屏障有关。

干扰上皮细胞能量代谢对炎症性肠病发病的影响

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)的病因和发病机制尚不明确,结肠黏膜屏障损伤是关键因素.近几十年研究认为,干扰上皮组织的能量代谢会引发肠上皮细胞间隙增宽,细菌跨膜易位增多,黏液分泌减少等肠黏膜屏障功能紊乱.细菌、抗原等物质穿过肠黏膜屏障,进入固有层激活炎症反应,启动炎症性肠病.能量燃料丁酸盐缺乏,线粒体病理改变是肠上皮能量异常的原因.改善能量代谢,保护线粒体功能等方法,能缓解IBD的严重性,减少复发,为IBD的治疗提供了新的策略.

参苓白术颗粒对溃疡性结肠炎模型小鼠的保护作用

目的:研究参苓白术颗粒(SLBZ)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎保护作用,并探讨其作用机制。方法:清洁级Balb/c小鼠随机分为正常组,3 d模型组,3 d参苓白术颗粒组,7 d模型组,7 d参苓白术颗粒组。3,7 d参苓白术颗粒组均连续8 d ig SLBZ(9 g·kg^(-1)·d^(-1)),正常组与3,7 d模型组ig等体积生理盐水。模型组和参苓白术颗粒组在ig的最后3d用4%DSS饮水造模,3 d模型组与3 d参苓白术颗粒组在造模第3天检测指标,正常组与7 d模型组,7 d参苓白术颗粒组在造模第7 d检测相关指标,观察体重变化、粪便评分、病理学评分、凋亡细胞、黏液表达量、紧密连接蛋白(occludin)蛋白水平等。结果:与正常组比较,3 d模型组凋亡细胞数量增多,occludin蛋白减少(P<0.05);7 d模型组体重下降,粪便评分增高,病理学评分增高,凋亡细胞数量增多,occludin蛋白减少(P<0.05);与模型组比较,预防性连续ig 8 d SLBZ,3 d参苓白术颗粒组小鼠凋亡细胞表达量少,occludin蛋白增多(P<0.05);7 d参苓白术颗粒组小鼠体重升高,腹泻和血便症状明显好转,病理学评分减少,黏液分泌量多,凋亡细胞减少occludin蛋白表达量增多(P<0.05)。结论:预防性服用SLBZ可以缓解DSS诱导的结肠炎发病,其药理机制可能与SLBZ保护结肠黏膜屏障密切相关。

俞氏安肠方治疗2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠结肠炎的疗效检测

目的通过分析俞氏安肠方(YST)对UC小鼠炎症因子、NLRP3炎症小体及结肠黏膜屏障的影响,来探讨其治疗UC的潜在机制。方法实验小鼠随机分成对照组、模型组、YST低剂量组、高剂量组,用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)构建UC小鼠模型。记录所有小鼠的体质量、粪便黏度和粪便出血情况。处死后,用苏木精-伊红染色观察结肠组织病理变化。ELISA检测结肠组织TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。Western Blot分析NLRP3炎症小体和结肠黏膜屏障相关的蛋白质的表达。结果TNBS导致实验小鼠DAI值升高,引发严重的组织学损伤。YST可以降低小鼠结肠组织的TNF-α、IL-1β、IL-6水平。YST可以下调NLRP3炎症小体相关的蛋白(NLRP3、ASC、Caspase-1)表达水平。YST可以上调结肠黏膜屏障相关蛋白(ZO-1、Occludin、Claudin-1)的表达。结论YST可以通过减少炎症反应、抑制NLRP3炎症小体和保护肠黏膜屏障来改善TNBS诱导的UC小鼠的症状及组织学损伤。

苦参素对结肠炎大鼠能量代谢水平的调控作用

目的探讨苦参素对结肠炎大鼠能量代谢水平的调控作用。方法将40只雄性SD大鼠随机平均分为正常组、模型组、苦参素组、美沙拉嗪组,除正常组以外,其他组均采用TNBS/乙醇复合法复制大鼠结肠炎模型。造模成功后,模型组和正常对照组大鼠均以饮用水灌胃,苦参素组大鼠给予200mg/kg苦参素溶液灌胃,美沙拉嗪组大鼠给予150mg/kg美沙拉嗪混悬液灌胃。观察实验大鼠一般情况及结肠黏膜大体形态,并采用ELISA法检测实验大鼠结肠黏膜VEGF、EGF、IGF-1、TGF-β1的水平;比色法检测大鼠结肠组织中ATP含量及SDH、N^a+-K^+-ATPase,Ca^2+-Mg^2+-ATPase活性。结果与TNBS模型组相比,OMT治疗组一般情况和结肠黏膜损伤的形态学均有明显改善,结肠组织SDH、N^a+-K^+-ATPase、Ca^2+-Mg^2+-ATPase等酶的活性升高(P<0.05或P<0.01),VEGF、IGF-1在结肠黏膜中的水平均有明显改善(P<0.05或P<0.01),ATP含量、EGF浓度、TGF-β1浓度降低(P<0.05)。结论苦参素可有效缓解TNBS/乙醇引起的大鼠结肠黏膜能量代谢障碍,促进肠黏膜屏障的修复,抑制结肠黏膜损伤。