人皮肤干细胞体外诱导分化构建人工结膜的实验

目的观察皮肤干细胞在结膜去细胞基质上的生长和分化情况,探讨利用皮肤干细胞及结膜去细胞基质构建人工结膜的可能性。方法将体外分离培养的1～2代人皮肤干细胞接种于人结膜去细胞基质上,在体外观察细胞的分化情况。标本分别行HE染色、人上皮细胞角蛋白CK19单克隆抗体、结膜上皮细胞特异性标记蛋白CK8抗体、CK13抗体、MUC5A/C抗体免疫组化鉴定。结果皮肤干细胞在结膜去细胞基质等模拟的体外微环境下可形成类似结膜上皮细胞的复层增生,并有类结膜上皮细胞特异性标记蛋白表达,呈CK8抗体、CK13抗体、MUC5A/C抗体表达阳性。结论利用皮肤干细胞可在体外模拟的微环境下分化构建人工结膜,用于结膜移植眼表重建。

去细胞异种角膜基质与去细胞异种结膜基质的免疫原性研究

目的:应用Gal抗原缺失小鼠从体液免疫、细胞免疫、植入物局部组织病理等多方面评价去细胞异种角膜基质(猪源)与去细胞异种结膜基质(猪源)的免疫原性。方法:将用于每种材料的小鼠分为3个实验组:对照组(Con)、原材料组(T1)和基质组(T2)。将去细胞异种角膜基质与去细胞异种结膜基质及其原材料植入经兔血红细胞2次预免疫的Gal抗原缺失小鼠体内,于植入1个月后取材,分别分析2种基质及其原材料组与对照组在小鼠血清总抗体、抗-Gal抗体、细胞因子,脾脏淋巴细胞不同亚型的细胞表面分子表达水平,以及植入物局部组织病理等方面的变化。结果:2种基质及其原材料组在植入1个月后小鼠血清总抗体含量、细胞因子含量与对照组相比均无显著性差异。少数脾脏淋巴细胞表面分子表达水平与对照组相比有显著性差异(P<0.05),但均在对照组历史数据变异范围内。然而,小鼠血清抗Gal抗体检测结果显示:去细胞异种结膜基质植入1个月时基质及其原材料组小鼠血清抗-Gal抗体水平比对照组显著升高(P<0.05);而去细胞异种角膜基质植入1个月时基质及其原材料组小鼠血清抗-Gal抗体水平与对照组相比均无显著性差异。植入物局部组织病理显示:去细胞异种结膜基质植入1个月时大部分已降解,组织学显示轻微炎症反应,原材料组已无材料残留,组织学显示无明显炎症反应。去细胞异种角膜基质及原材料组植入1个月时植入物未发生明显降解,基质及原材料组的组织学反应均为重度炎症反应。结论:本研究结果证实了Gal抗原缺失小鼠对材料中残留Gal抗原的敏感性,应用Gal抗原小鼠能够科学地评价动物源性生物材料的异种免疫原性风险。