祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球α-actinin-4和Desmin表达的干预作用及机理研究

目的:观察祛风通络方对阿霉素肾病(AN)大鼠肾小球滤过屏障及α-actinin-4和Desmin的影响,探讨"祛风通络方"治疗MCN、改善蛋白尿的作用机理,同时对"风伏肾络"的病机理念进行理论的探讨和阐述,为"祛风通络方"的临床应用提供分子原子依据。方法:86只雄性清洁级Sprague-Dawley(SD)健康大鼠随机分为空白对照组(A组)和模型组(B组)、祛风组(祛风通络方、C组)、激祛组(激素+祛风通络方、D组)和激素组(E组)。分别给予相应干预,再次于不同时间测24h蛋白尿及相关生化指标,同时观察大鼠一般情况,肾小球滤过屏障超微结构变化,同时免疫组化染色结果判定[1],测定各组大鼠肾脏组织中α-actinin-4和Desmin的阳性面积百分比,及肾小球中着色的阳性物质光密度值,以判断表达和分布变化。并分析α-actinin-4和Desmin表达变化与尿蛋白的关系,两者之间的关系等。结果:造模成功时与空白对照组比较,模型组大鼠出现:超微结构显示GBM大致正常,足突间距增宽、融合甚至脱落、消失,α-actinin-4和Desmin在足细胞表达上调,高于空白对照组(Pn均<0.01)。α-actinin-4总体量没有显著变化(Pn>0.05),Desmin总体量明显上调(Pn<0.01)。干预结束时与模型组比较:各干预组超微结构病变均有不同程度改善,足突结构较前清晰,各干预组肾小球足细胞α-actinin-4蛋白和Desmin蛋白平均光密度值表达下调,D组减少最明显(Pn<0.01),C组和E组无显著差异(Pn>0.05)。各干预组分布较前规律,差异有统计学意义(Pn<0.05)。结论:1)祛风通络方可以降低阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄,且与激素联用效果更佳,表明其可以改善大鼠低蛋白状态、脂质代谢。2)祛风通络方可以改善α-actinin-4和Desmin的表达分布,可能是该方实现修复足细胞骨架的结构和功能并抑制足细胞进一步损伤的机制之一。

一次法咬合重建对大鼠咬肌组织损伤相关蛋白表达的影响

目的:探讨一次法咬合重建后大鼠咬肌损伤相关结蛋白(desmin)和骨骼肌肌钙蛋白抑制亚基(s Tn I)含量的变化。方法:取8周龄健康雄性SD大鼠60只,随机分为空白对照组(C组)、操作对照组(S组)和一次法咬合重建组(T组)(n=20)。T组采用人工逐次磨除法将各大鼠上颌后牙牙冠磨低约1.2 mm,6周后口外制作咬合板并将其粘固于各大鼠的上颌后牙上;S组麻醉后模拟T组操作过程,无实际操作;C组不作任何处理。咬合重建后3、7、14、28 d处死大鼠(n=5),取其双侧咬肌组织并采用western blot方法检测咬肌细胞内desmin和s Tn I的表达。结果:1 S组与C组相比desmin、s Tn I表达无明显差异(P>0.05);2 T组于咬合重建后3 d时desmin、s Tn I开始降低(P<0.05),7 d时降至最低,14 d后逐渐增加,28 d时恢复正常;28 d时desmin、s Tn I的表达水平与C组、S组相比P>0.05,其他各时间点的desmin、s Tn I表达水平均低于C组和S组(P<0.05)。结论:一次法咬合重建可造成咬肌细胞内desmin和s Tn I发生不同程度的降解,但这种变化是可逆的。

高脂血症家兔肾小球病变及绞股蓝总苷的干预作用

目的观察高脂血症早期家兔肾小球病变及绞股蓝总苷干预作用。方法高脂饮食法复制家兔高脂血症模型,8周后检查肾脏病理改变,免疫组化法检测肾小球中Desmin,α-SMA含量。结果正常组Desmin,α-SMA蛋白无明显表达;模型组两种蛋白表达均增强,肾脏系膜细胞轻微增多;绞股蓝总苷组表达高于正常组,低于模型组。结论高脂血症早期肾小球足细胞和系膜细胞受损,最终导致肾小球硬化。绞股蓝总苷可降低这种损伤,起到保护肾脏的作用。

抑制lncRNA DLX6-AS1通过靶向miR-200a减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DLX6反义RNA1(DLX6-AS1)对高糖诱导的足细胞损伤的影响和机制。方法将足细胞分为正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25.0 mmol/L葡萄糖)、si-NC组(转染si-NC+高糖)、si-DLX6-AS1组(转染si-DLX6-AS1+高糖)、miR-NC组(转染miR-NC+高糖)、miR-200a组(转染miR-200a mimics+高糖)、si-DLX6-AS1+miR-NC组(转染si-DLX6-AS1+miR-NC+高糖)、si-DLX6-AS1+miR-200a组(转染si-DLX6-AS1+miR-200a+高糖)。流式细胞术检测细胞凋亡。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测DLX6-AS1、肾病蛋白(nephrin)、结蛋白(desmin)、波形蛋白(vimentin)表达。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证DLX6-AS1与miR-200a的关系。结果与正常糖组比较,高糖诱导后足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达、DLX6-AS1表达升高,nephrin表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-DLX6-AS1组足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达降低,nephrin表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-200a组足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达降低,nephrin表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-DLX6-AS1+miR-NC组比较,si-DLX6-AS1+miR-200a组足细胞凋亡率、desmin和vimentin表达降低,nephrin表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。DLX6-AS1靶向并负调控miR-200a表达。结论抑制DLX6-AS1通过靶向miR-200a可减轻高糖诱导的足细胞损伤,是糖尿病肾病的潜在治疗靶点。