团头鲂TYK2基因的克隆与表达分析

以团头鲂为研究对象,克隆获得络氨酸激酶2(tyrosine kinase 2,TYK2)基因的ORF序列,该序列长3489 bp,编码1162 aa。团头鲂TYK2基因包含23个外显子和22个内含子,与大多数脊椎动物的基因结构相似。蛋白质结构域预测结果显示,TYK2包含4个结构域:B41、SH2、TyrKc(假激酶区)和TyrKc(络氨酸激酶区)。氨基酸多序列比对和系统进化分析结果均显示,TYK2在进化过程中非常保守。荧光定量PCR结果显示,在健康成鱼中,TYK2在中肾的表达量最高,其次是血液、脾脏和头肾,在肠道、脑、鳃、心脏、肌肉和肝脏中的表达量较低。感染嗜水气单胞菌后,TYK2在脾脏和肠中有相似的表达模式:在感染后4 h显著降低并达到最小值,在12 h显著上升且达到最大值(P<0.05);在中肾中,在24 h极显著上升且到达最大值,在36 h极显著降低并达到最小值。以上研究结果表明,TYK2基因在团头鲂抗嗜水气单胞菌感染的过程中发挥着重要的作用。

宫颈癌组织中Ang-2及其受体Tie-2的表达变化

目的观察宫颈癌组织中血管生成素-2(Ang-2)和其受体酪氨酸激酶受体2(Tie-2)表达变化,并探讨其临床意义。方法选择2014年1月~2017年1月收治的86例宫颈癌患者的手术切除宫颈癌组织标本为观察组,同期收治的86例子宫肌瘤患者的正常宫颈组织标本为对照组。采用免疫组化法定性检测两组Ang-2、Tie-2蛋白表达情况。采用RT-PCR法定量检测两组Ang-2、Tie-2 mRNA表达量,采用Western blotting法定量检测两组Ang-2、Tie-2蛋白表达量。分析宫颈癌组织Ang-2、Tie-2蛋白定性表达情况与宫颈癌临床病理参数的关系。结果观察组Ang-2、Tie-2 mRNA及蛋白表达量均高于对照组(P均<0.05)。免疫组化染色结果观察组Ang-2表达阳性51例(59.30%)、Tie-2表达阳性54例(62.79%),对照组Ang-2表达阳性35例(40.70%)、Tie-2表达阳性37例(43.02%),观察组Ang-2、Tie-2蛋白阳性表达率均高于对照组(P均<0.05)。宫颈癌组织Ang-2、Tie-2阳性表达与宫颈癌FIGO分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与年龄、组织学类型、分化程度无关(P均>0.05)。结论宫颈癌组织Ang-2和其受体Tie-2表达上调。检测宫颈癌组织Ang-2和其受体Tie-2表达有助于判断宫颈癌患者的FIGO分期和淋巴结转移情况。

人参皂甙Rg3对胰腺癌SW-1990细胞皮下移植瘤血管生成拟态影响的研究

目的研究人参皂甙Rg3对胰腺癌SW-1990细胞皮下移植瘤生长及血管生成拟态的影响。方法用胰腺癌SW-1900细胞株建立裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,分成4组:0.9%氯化钠溶液对照组、5 mg/kg人参皂甙Rg3组、10 mg/kg人参皂甙Rg3组、20mg/kg人参皂甙Rg3组,每组7只。各组裸鼠予腹腔注射给药,隔天1次,给药4周。给药结束后3d处死裸鼠,检测各组移植瘤的体积和重量;CD31/PAS染色观察移植瘤血管生成拟态的变化;荧光定量PCR和Western blot检测各组移植瘤钙粘蛋白(VE-Cadherin)、络氨酸激酶受体2(Eph A2)、基质金属蛋白2(MMP-2)、基质金属蛋白9(MMP-9)m RNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,20mg/kg人参皂甙Rg3组裸鼠胰腺癌皮下移植瘤体积减小、重量减轻(均P<0.05)。与对照组比较,5mg/kg人参皂甙Rg3组、10mg/kg人参皂甙Rg3组、20mg/kg人参皂甙Rg3组裸鼠胰腺癌皮下移植瘤拟态、正常血管生成均减少(均P<0.05),VE-Cadherin、Eph A2、MMP-2、MMP-9 m RNA和蛋白表达水平均降低(均P<0.05)。结论人参皂甙Rg3可抑制胰腺癌SW-1900细胞皮下移植瘤生长和血管生成拟态形成,可能是通过调控VE-Cadherin、Eph A2、MMP-2、MMP-9的表达发挥抗肿瘤作用。

右归胶囊通过JAK2/STAT3通路改善高龄体外受精-胚胎移植女性卵细胞质量

目的探讨右归胶囊通过干预调节络氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路中关键因子JAK2、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及与通路相关的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平对高龄肾阳虚体外受精-胚胎移植(in vitrofertilization-embryo transfer,IVF-ET)患者卵细胞质量的影响。方法 64例高龄肾阳虚IVF-ET女性分为治疗组(右归胶囊+西药)和安慰剂组(安慰剂+西药),每组32例。另选非肾阳虚IVF-ET(男方因素)高龄女性32例为对照组。观察前两组肾阳虚证候积分变化和各组促性腺激素(Gn)天数及用量、绒毛促性腺激素(HCG)日血雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、孕酮(P)水平、获卵数、优卵率、受精率、获胚数、临床妊娠率;检测JAK2/STAT3通路中关键因子JAK2、Cyclin D1蛋白表达及与通路相关的SOD水平。结果与本组治疗前比较,治疗组HCG日证候积分降低(P<0.01),且较安慰剂组积分低更明显(P<0.01)。与安慰剂组比较,治疗组和对照组Gn天数及用量减少(P<0.01),HCG日E2水平、获卵数、获胚数、优卵率、受精率、临床妊娠率均增高(P<0.05,P<0.01),SOD水平、JAK2、CyclinD1蛋白相对表达量亦升高(P<0.05)。结论右归胶囊可能是通过JAK2/STAT3通路上调SOD、JAK2、Cyclin D1水平表达,从而改善肾阳虚症状,提高高龄肾阳虚IVF-ET患者的卵细胞质量,有助于改善IVF结局。

NMIBC组织Pyk2、IMP3、MTSS1蛋白表达与临床病理特征的关系及预后影响因素

目的研究非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)组织富含脯氨酸的蛋白络氨酸激酶2(Pyk2)、胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(IMP3)、肿瘤转移抑制蛋白1(MTSS1)蛋白表达与临床病理特征的关系及预后的影响因素。方法选取2017年1月至2020年1月本院收治的112例NMIBC患者纳入研究。采集患者NMIBC组织和癌旁正常组织,以免疫组化法检测不同组织Pyk2、IMP3、MTSS1蛋白表达情况,分析其与临床病理特征的关系。此外,通过Kaplan-Merier生存曲线分析上述蛋白表达与预后的关系,采用单、多因素Logistic回归分析影响NMIBC患者预后的影响因素。结果 NMIBC组织中Pyk2、IMP3蛋白阳性率分别为66.07%、58.04%,均明显高于癌旁正常组织的17.86%、0.00%;而MTSS1蛋白阳性率为17.86%,明显低于癌旁正常组织的73.21%;上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。病理分级G1级、肿瘤分期Ta~T1期的NMIB患者Pyk2、IMP3蛋白阳性率均低于病理分级G2~G3级、肿瘤分期T2~T4期患者,而MTSS1蛋白阳性率均高于病理分级G2~G3级、肿瘤分期T2~T4期患者,上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。Kaplan-Merier生存曲线分析发现,至随访结束Pyk2、IMP3蛋白阳性患者的无进展生存率均低于上述蛋白阴性患者,而MTSS1蛋白阳性患者的无进展生存率明显高于MTSS1蛋白阴性患者,上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。经多因素Logistic回归分析发现,病理分级、肿瘤分期以及Pyk2、IMP3蛋白阳性表达均是NMIBC患者预后的危险因素(均P<0.05),而MTSS1蛋白阳性表达是NMIBC患者预后的保护因素(均P<0.05)。结论 NMIBC组织Pyk2、IMP3蛋白均呈异常高表达,而MTSS1蛋白呈异常低表达,上述蛋白表达水平和NMIBC病理分级、肿瘤分期以及预后密切相关。

人参皂苷Rg3体外抑制胰腺癌sw-1990细胞血管生成拟态形成的作用

目的:研究人参皂苷Rg3对胰腺癌sw-1990细胞体外血管形成的作用。方法:采用不同浓度人参皂苷Rg3作用sw-1990细胞,观察sw-1990细胞在鼠尾Ⅰ型胶原蛋白形成血管网状结构特点;采用体外管道形成抑制实验检测不同浓度人参皂苷Rg3对sw-1990细胞管道形成能力;采用荧光定量PCR技术和Western blot检测不同浓度人参皂苷Rg3作用sw-1990细胞72h后VE-Cadherin和EphA2的表达情况。结果:胰腺癌sw-1990细胞在用鼠尾Ⅰ型胶原蛋白上能够形成血管生成拟态。0、25、50、100、200μm/L人参皂苷Rg3作用sw-1990细胞72h后,血管生成拟态数分别为(81.03±6.17)、(63.57±5.19)、(55.39±8.97)、(32.65±3.07)和(21.17±4.73)个,与人参皂苷Rg3负相关r=-0.344(P<0.05)。荧光PCR技术和Western blot检测发现,与对照组比较,各用药组VE-Cadherin、EphA2 mRNA水平和蛋白水平表达均下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg3能够抑sw-1990细胞体外血管生成拟态的形成,其机制可能与人参皂苷Rg3下调sw-1990细胞VE-Cadherin和EphA2表达有关。

人参皂苷Rg3对胰腺癌裸鼠皮下移植瘤新生血管的影响

目的探究人参皂苷Rg3对胰腺癌裸鼠皮下移植瘤新生血管形成的影响。方法裸鼠背侧近右后肢处sc胰腺癌SW-1900细胞建立胰腺癌皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为对照组及人参皂苷Rg3低、高剂量(10、20 mg/kg)组。给药组ip人参皂苷Rg3,对照组ip0.9%氯化钠溶液,每2天1次,连续4周。给药结束3d后裸鼠脱颈椎处死,取瘤组织。采用免疫组化法检测各组裸鼠瘤组织中内皮细胞标记物CD31表达,计算微血管密度;采用qRT-PCR和Westernblotting法检测各组裸鼠瘤组织中血管内皮钙黏素(vascularendothelialcadherin,VE-cadherin)、络氨酸激酶受体A2(erythropoietin-producing hepatocellular receptor A2,EphA2)m RNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,人参皂苷Rg3组胰腺癌裸鼠皮下移植瘤质量显著降低(P<0.05),微血管密度显著降低(P<0.05),VE-cadherin、EphA2m RNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3可能通过调控VE-cadherin、EphA2m RNA和蛋白表达,从而抑制胰腺癌裸鼠皮下移植瘤新生血管形成。