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人呼吸道合胞病毒qRT-PCR绝对定量检测法的建立
被引量:
4
1
作者
刘春源
杨筱萌
+7 位作者
罗语思
何淼
张勇
刘鉴
牟荣
沈祥春
李金福
张科
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020年第9期1033-1037,共5页
目的建立检测人呼吸道合胞病毒(human Respiratory Syncytial Virus, hRSV)实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)绝对定量检测法。方法提取人呼吸道合胞病毒mRNA并逆转录为cDNA,以cDNA为模板,用hRSV的N基因作为目的基...
目的建立检测人呼吸道合胞病毒(human Respiratory Syncytial Virus, hRSV)实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)绝对定量检测法。方法提取人呼吸道合胞病毒mRNA并逆转录为cDNA,以cDNA为模板,用hRSV的N基因作为目的基因设计的引物进行PCR扩增,扩增产物连接到pMDTM 18-T载体,构建标准检测质粒。以构建的标准检测质粒进行qRT-PCR,建立绝对定量检测的标准曲线。结果 PCR扩增获得714 bp产物,与pMDTM 18-T载体连接构建的标准检测质粒测序验证成功。qRT-PCR检测目的基因扩增效率E为105.2%,R^2=0.998,在1.0×10^2~1.0×10^8拷贝范围内具良好线性关系,最低检测限为100拷贝/反应。结论成功建立了hRSV qRT-PCR绝对定量检测法,该方法快速、特异、灵敏,为hRSV诊断试剂盒的研制奠定了基础。
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关键词
人呼吸道合胞病毒
实时荧光
定量
PCR
N基因
绝对定量检测法
原文传递
题名
人呼吸道合胞病毒qRT-PCR绝对定量检测法的建立
被引量:
4
1
作者
刘春源
杨筱萌
罗语思
何淼
张勇
刘鉴
牟荣
沈祥春
李金福
张科
机构
贵州医科大学基础医学院
贵州医科大学附属医院急诊科
贵州医科大学
贵州医科大学药学院
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020年第9期1033-1037,共5页
基金
国家自然科学基金项目(No.81860752)
贵州省卫生计生委科学技术基金项目(No.gzwjkj2018-1-022)。
文摘
目的建立检测人呼吸道合胞病毒(human Respiratory Syncytial Virus, hRSV)实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)绝对定量检测法。方法提取人呼吸道合胞病毒mRNA并逆转录为cDNA,以cDNA为模板,用hRSV的N基因作为目的基因设计的引物进行PCR扩增,扩增产物连接到pMDTM 18-T载体,构建标准检测质粒。以构建的标准检测质粒进行qRT-PCR,建立绝对定量检测的标准曲线。结果 PCR扩增获得714 bp产物,与pMDTM 18-T载体连接构建的标准检测质粒测序验证成功。qRT-PCR检测目的基因扩增效率E为105.2%,R^2=0.998,在1.0×10^2~1.0×10^8拷贝范围内具良好线性关系,最低检测限为100拷贝/反应。结论成功建立了hRSV qRT-PCR绝对定量检测法,该方法快速、特异、灵敏,为hRSV诊断试剂盒的研制奠定了基础。
关键词
人呼吸道合胞病毒
实时荧光
定量
PCR
N基因
绝对定量检测法
Keywords
human respiratory syncytial virus
quantitative real-time PCR
N gene
method of absolute quantitative detection
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人呼吸道合胞病毒qRT-PCR绝对定量检测法的建立
刘春源
杨筱萌
罗语思
何淼
张勇
刘鉴
牟荣
沈祥春
李金福
张科
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020
4
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参考文献
引证文献
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