小麦中转基因成分PCR与实时荧光PCR的定性检测低限

为了确定小麦转基因成分PCR和实时荧光PCR方法的定性检测低限,将转基因小麦B73与非转基因小麦(检测外源基因)、小麦与大米(检测内源基因)分别进行质量分数配比后提取DNA用于测定相对检测低限,再将100%转基因小麦B73的DNA进行浓度稀释用于测定绝对检测低限,并应用已知的NOS、bar、ubiquitin,ui-dA(GUS)外源基因和Wx012、GAG56 D内源基因的引物和探针对模板DNA分别进行PCR与实时荧光PCR扩增。结果表明,最终确定PCR方法检测小麦转基因成分的相对检测低限为0.1%(质量分数),绝对检测低限为0.5 ng/μL;实时荧光PCR方法的相对检测低限为0.1%(质量分数),绝对检测低限为0.01 ng/μL。所确定的检测低限可满足国家对转基因产品的最低标识要求。

重组酶聚合酶扩增技术快速检测转基因玉米Bt11

根据外源基因草丁膦乙酰转移酶基因(PAT)与载体骨架连接区序列设计引物,建立了基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的转基因玉米Bt11特异性快速检测方法。结果表明:该方法可在37℃条件下20 min内完成转基因玉米Bt11的检测,绝对检测限为100拷贝/μL,相对检测限为0.1%。