绞股蓝多糖提高小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能

研究不同浓度(12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μg/mL)绞股蓝[Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino]多糖(GPP)对小鼠腹腔巨噬细胞的影响,探讨GPP对机体免疫功能的调节作用及其可能的作用机制。采用中性红法、Griess法、CCK8法、ELISA法和荧光定量PCR法检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力、增殖、细胞因子(NO、LDH、TNF-α、IL-1β)的分泌量、CaM和GSα基因的表达水平。结果表明,GPP激活小鼠腹腔巨噬细胞,随着GPP浓度的增加小鼠腹腔巨噬细胞增殖能力增强,当GPP浓度为50.0、100.0、200.0μg/mL时,吸光度与空白对照处理相比差异显著;GPP刺激小鼠腹腔巨噬细胞后,吞噬能力强于空白对照处理,GPP浓度为200.0μg/mL时,小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力最强;GPP促进小鼠腹腔巨噬细胞NO、LDH、TNF-α和IL-1β的分泌;GPP上调CaM和GSα基因的表达,GPP浓度为100.0、25.0μg/mL时CaM、GSα基因表达量分别达到最高。

玉米须绞股蓝复合提取总黄酮工艺及其降压片的制备

以玉米须(stigma maydis)、绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)(1∶1)为提取原料,总黄酮含量为考察指标,通过提取溶剂、乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比和提取次数等单因素考察对复合总黄酮含量的影响,再通过正交试验优化总黄酮的提取工艺,最后将优化提取的总黄酮过D101大孔吸附树脂精制后制备成降压片。结果表明,复方总黄酮的最佳提取工艺为乙醇体积分数50%,料液比1∶10,50℃下提取3.5 h。制备的片剂质量(片重差异±5.1%,脆碎度0.83%,崩解时限2.41 min)符合《中华人民共和国药典》(2020版)片剂的有关规定,并且降压片能降低SHR大鼠血压。

HPLC法同时检测陕西平利绞股蓝中13种酚酸含量

为建立同时检测陕西平利绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)中13种酚酸含量的测定方法,采用高效液相色谱法(HPLC),利用甲醇水溶液(80%)常温涡旋,超声波提取,色谱柱为Dimensions C18(4.6 mm×150 mm,5μm,P/N:227-30011-07,C/N:18C03033),流动相为甲醇(100%)和磷酸水溶液(0.5%),洗脱方法为梯度洗脱,检测波长为280 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min,进样体积为5μL。结果表明,13种酚酸在浓度为5~100 mg/L时线性关系良好,相关系数(R2)≥0.998;在样本加标回收试验中,平均加标回收率为61.8%~131.0%。该测定方法精密度、重复性、稳定性好,适用于陕西平利绞股蓝中酚酸含量的测定。

绞股蓝多糖对热应激小鼠睾丸氧化损伤的保护作用

为了探究不同剂量绞股蓝多糖(Gynostemma pentaphyllum polysaccharides,GPP)对热应激引起的小鼠睾丸氧化损伤的保护作用,本研究采用生物化学、酶联免疫吸附、免疫组化等技术分别对空白对照(Con),热应激对照(HS),绞股蓝多糖高(GPP-H)、中(GPP-M)、低剂量(GPP-L)组小鼠的睾丸指数、睾丸细胞凋亡、雄激素受体表达以及生精小管直径、睾丸组织抗氧化能力进行观察和测定分析。结果发现,GPP-L组和GPP-M组血清睾酮含量与HS组相比均显著升高(P<0.05);GPP-M组和GPP-L组的丙二醛(MDA)含量与HS组相比显著降低(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量、过氧化氢酶(CAT)活力、超氧化物歧化酶(SOD)活力与HS组相比显著升高(P<0.05);GPP各剂量组睾丸曲精小管直径与HS组相比均显著增大(P<0.05);各GPP剂量组凋亡细胞累计光密度值/视野下睾丸组织的面积(IOD/Area)较HS组均有所减小,其中,GPP-M组显著减小(P<0.05);各GPP剂量组AR阳性细胞IOD/Area较HS组均有所增大,其中GPP-L和GPP-M组雄性激素受体(AR)表达程度显著增强(P<0.05)。结果表明,GPP可以改善热应激导致的睾丸组织损伤和细胞凋亡,保护AR蛋白的正常表达以及提高热应激小鼠睾丸抗氧化能力,其中GPP-M效果较好。

绞股蓝多糖对免疫功能的影响

绞股蓝多糖（２５，５０１００ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ）能明显提高小鼠碳粒廓清速率，其Ｋ值分别为０．０５１７±０．０１１７，０．０４１９±０．０１１９，０．０５７６±０．０４８，与对照组（ＮＳ）０．０１６９±０．０１１７相比有显著差异（Ｐ＜０．０５）。能增强肝癌Ｈｅｐｓ小鼠ＮＫ细胞活性，其活性（％）分别为２１．４０±４．００，４１．１９±１１．５６，４９．６５±５．０６，除２５ｍｇ／ｋｇ剂量组外，均显著高于对照组１７．９９±２．３５（Ｐ＜０．０５），而对肉瘤Ｓ１８０小鼠ＮＫ细胞活性无明显影响。另外对小鼠血清溶血素和Ｓ１８０小鼠脾指数有显著提高作用，但对Ｈｅｐｓ小鼠脾和胸腺指数、Ｓ１８０小鼠胸腺指数和脾淋巴细胞转化无显著作用。

绞股蓝多糖降血糖作用的实验研究

目的探讨绞股蓝多糖(GP)的降血糖作用及其机制,体外对α淀粉酶的抑制作用及对四氧嘧啶高血糖大鼠降血糖作用。方法采用水提醇沉法提取GP。采用3,5二硝基水杨酸(DNS)比色法观察GP在体外对α淀粉酶的抑制作用。采用正常大鼠和四氧嘧啶高血糖大鼠模型,以血糖、糖耐量为指标研究GP的降血糖作用。结果GP体外对α淀粉酶有一定的抑制作用并可降低四氧嘧啶高血糖大鼠的空腹血糖及糖耐量。结论GP可降低四氧嘧啶高血糖大鼠的空腹血糖及糖耐量,其降糖机制可能与其刺激胰岛素的释放或促胰岛炎恢复,抑制α淀粉酶,延缓碳水化合物在小肠的吸收有关。

绞股蓝多糖的提取纯化和含量测定

通过正交设计实验,综合考虑提取效率和成本,优化了绞股蓝多糖的提取方法,并对绞股粗多糖进行了初步纯化,测定了提取物的糖含量,其含量水平较前有明显提高,这将为绞股蓝进一步开发生产奠定基础。

绞股蓝多糖体外抗氧化活性研究

研究绞股蓝多糖的单糖组成及抗氧化活性。采用气相色谱(GC)分析绞股蓝多糖的单糖组成,通过体外抗氧化评价体系研究绞股蓝粗多糖(GPMPP)和精制多糖(GPMP)的总还原力、清除DPPH自由基、羟自由基的活性以及抗脂质过氧化作用。结果显示,绞股蓝多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,物质的量比为1.39∶3.76∶1.00∶1.64∶4.98∶5.88。绞股蓝多糖具有较好的还原能力,对DPPH自由基和.OH具有较强的清除能力,并且对小鼠肝匀浆自发性脂质过氧化和Fe2+-H2O2诱导的小鼠肝匀浆脂质过氧化具有较好的抑制作用。以上结果表明,绞股蓝多糖具有明显的抗氧化活性。

绞股蓝多糖提取分离、化学结构及生物活性的研究进展

绞股蓝是我国特色天然资源,近年来研究发现多糖是其重要的药用活性成分,具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、降血糖、抗疲劳等生物活性。更重要的是绞股蓝多糖不仅具有显著的抗肿瘤活性,还参与和介导了免疫功能的调节,能够提高机体免疫功能而对正常细胞没有毒副作用,在恶性肿瘤、艾滋病等威胁人类健康疾病的防治和治疗方面具有广阔的应用前景,有希望开发成我国特色的创新药物。本文对绞股蓝多糖分离纯化、结构以及生物活性等方面进行详细综述,为以后进一步研究提供理论参考。

绞股蓝多糖对HepG_2细胞酒精性损伤的保护作用

目的研究绞股蓝多糖对HepG2细胞酒精性损伤的保护作用及可能作用机制。方法在HepG2细胞培养液中加入不同浓度的绞股蓝多糖,作用5h后,再加入无水乙醇,建立细胞损伤模型,继续培养12h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,同时比较各组细胞丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化;Hoechst33342进行细胞凋亡形态学染色。结果不同浓度的绞股蓝多糖均可以提高损伤后HepG2细胞的存活率,抑制AST、ALT水平的升高,减少MDA的形成,提高SOD的活性,减少细胞凋亡。结论低剂量的酒精能引起HepG2细胞的凋亡,绞股蓝多糖对HepG2细胞酒精性损伤具有保护作用,其机制可能与清除氧自由基、对抗脂质过氧化有关。

绞股蓝多糖的分离纯化及初步结构分析

本文从绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino中分离纯化得到了两个均一多糖:GPS-2和GPS-3,并对GPS-3进行了初步结构分析。结果表明:GPS-3的糖含量为78.10%,分子量为9100Dal,单糖组成及摩尔比为,鼠李糖∶木糖∶阿拉伯糖∶半乳糖(果糖)∶葡萄糖=1.75∶1∶8.70∶3.07∶5.90。

绞股蓝多糖对小鼠四氯化碳肝损伤的保护作用

目的从绞股蓝中分离纯化绞股蓝多糖,并研究绞股蓝多糖对小鼠CCl4肝损伤的保护作用。方法经去蛋白、除果胶、脱色、超滤之后得绞股蓝多糖,以绞股蓝多糖对小鼠连续灌胃7 d之后,腹腔注射0.5%的CCl4花生油溶液,建立肝损伤模型,继续给药2次,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;测定肝组织中丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽(GSH)活性;采用光学显微镜观察肝组织病理组织学变化。结果绞股蓝多糖各剂量组能明显抑制肝损伤小鼠ALT、AST活性的升高;抑制肝组织中MDA含量的升高,提高肝组织中GSH活性;减轻CCl4对肝脏细胞的病理损伤。结论绞股蓝多糖对CCl4造成的小鼠急性肝损伤具有明显保护作用。

绞股蓝多糖的抗肿瘤作用及其机制研究

通过建立小鼠移植瘤模型,采用荷瘤小鼠抑瘤率检测绞股蓝多糖对小鼠肉瘤S180的体内抗肿瘤作用;采用MTT法检测绞股蓝多糖对体外培养的肿瘤细胞增殖的抑制作用。此外,采用比色法测定了绞股蓝多糖对巨噬细胞吞噬率和产生细胞因子NO的影响;采用ELISA法测定了绞股蓝多糖对巨噬细胞产生IL—1β和TNF—α的影响。绞股蓝多糖可明显抑制移植性动物肿瘤S180的生长,并呈明显的剂量依赖关系;经绞股蓝多糖刺激后,小鼠巨噬细胞对中性红的吞噬功能明显的增强,并能显著刺激巨噬细胞分泌NO、TNF—α和IL—1β。为绞股蓝多糖的进一步开发提供了实验数据。

绞股蓝多糖对2型糖尿病大鼠血糖的影响及其机制初步研究

为研究绞股蓝多糖对实验性2型糖尿病大鼠血糖、血脂的影响及其可能的机制,采用Wistar大鼠高脂高糖饲料结合小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型。通过测定空腹血糖(FBG)和葡萄糖耐量,观察灌胃给予绞股蓝多糖对糖尿病大鼠的治疗作用,同时测定大鼠的血清胰岛素(Ins)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)及部分抗氧化系统相关指标。结果给予绞股蓝多糖后FBG明显降低,葡萄糖耐量曲线明显降低。此外,绞股蓝多糖可明显降低2型糖尿病大鼠的血清TC、TG、LDL和丙二醛水平,提高模型鼠的血清Ins、HDL、超氧化物歧化酶活性。说明绞股蓝多糖对实验性糖尿病大鼠有明显的降血糖、降血脂作用,其作用可能与增加Ins水平,增强抗氧化能力有关。

绞股蓝粗多糖的提取与初步分析

报道了绞股蓝粗多糖的提取与初步分析。绞股蓝粗多糖是从绞股蓝中提取的，其收率为６％。总多糖是由葡萄糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖等单糖组成，粗多糖中总多糖含量不低于８％。

从绞股蓝中联合提取皂苷、黄酮和多糖工艺优化

以体积分数由高至低的乙醇溶液为单一溶剂,从绞股蓝茶叶中联合提取皂苷、黄酮和多糖的工艺,利用正交试验得到的提取多糖最优工艺条件为80%乙醇溶液提取皂苷、30%乙醇溶液提取黄酮和5%乙醇溶液提取多糖。在此条件下,皂苷提取率8.75%,黄酮提取率0.75%,多糖提取率3.38%。联合提取工艺的原料利用率高于单一提取工艺,可为绞股蓝的综合利用提供参考。

绞股蓝内生真菌多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的:探究绞股蓝内生真菌JY25多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,为绞股蓝内生真菌多糖的应用提供基础数据。方法:确定4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(4-N-trophenyl-α-D-glu-copyranoside,PNPG)比色法检测α-葡萄糖苷酶活力的最佳条件,以阿卡波糖为阳性对照,采用优化后的最佳条件测定JY25多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并确定抑制类型、计算抑制常数;以Caco-2细胞作为体外产α-葡萄糖苷酶模型,测定JY25多糖的抑制效果。结果:反应时间30 min、反应温度44℃、pH 6.8、底物(PNPG)浓度5 mmol/L为PNPG比色法的最佳反应条件。以此优化条件进行比色,当JY25多糖质量浓度为6.15 mg/mL时,对α-葡萄糖苷酶抑制率达到最大(68.21%);JY25多糖的半数抑制浓度(IC_(50))为(2.46±0.42)mg/mL,抑制常数Ki为1.15 mg/mL,JY25多糖为竞争性抑制剂。在JY25多糖质量浓度为10.00 mg/mL时,对培养16 d的Caco-2细胞所产α-葡萄糖苷酶的抑制率达到16.48%。结论:体外实验证实JY25多糖具有竞争性抑制α-葡萄糖苷酶的作用。

绞股蓝多糖的分离纯化及其对神经细胞谷氨酸损伤的保护作用

本文对绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino(GP)中的多糖成分进行了分离纯化,得到了两个均一多糖:GPS-2和GPS-3,并对GPS-3进行了纯度分析、分子量测定,结果表明:GPS-3的糖含量为78.10%,分子量为9100Dal。然后在细胞水平研究了这两种多糖对神经细胞谷氨酸损伤的保护作用。结果显示,不同浓度绞股蓝多糖试验组神经细胞损伤有不同程度的减轻,与谷氨酸损伤组相比有显著性差异(P<0.01)。

绞股蓝多糖提取工艺优化及咀嚼片的研制

通过单因素料液比、提取温度、提取时间和提取次数对提取率的影响和正交实验设计方法对绞股蓝多糖水提醇沉法的工艺进行了优化及绞股蓝多糖咀嚼片研制。实验结果表明,水提醇沉法提取多糖最佳工艺条件为料液比1:16,100℃提取2次,每次1 h。绞股蓝多糖咀嚼片最佳配方为绞股蓝多糖粉20.00%、淀粉9.75%、蔗糖粉40.00%、奶粉12.30%、甘露醇14.95%、柠檬酸0.50%。

微波辅助提取绞股蓝多糖的工艺研究

采用单因素试验和正交试验,进行了微波辅助提取绞股蓝多糖的研究,得到了微波辅助提绞股蓝多糖的最佳工艺条件:料液比为1:20,微波功率为400W,微波处理时间为12min,浸提时间为50min。在此工艺条件下,多糖提取率为3.37%。与热水提取法进行比较,微波辅助提取能缩短提取时间,提高绞股蓝多糖提取率。