SPE-HPLC-UV法测定绞股蓝提取物中皂苷的含量

本试验旨在建立固相萃取-高效液相色谱-紫外检测法(SPE-HPLC-UV)对绞股蓝提取物中绞股蓝皂苷XLIX和皂苷A进行定量分析。样品经甲醇提取,采用C_(18)固相萃取柱净化,使用Kinetex C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,2.6μm)分离,流动相乙腈/水,柱温40℃,检测波长203 nm。依照此法测定绞股蓝粗提物中三萜皂苷XLIX和皂苷A的含量。结果表明:2种绞股蓝皂苷在一定质量浓度范围内线性关系良好(r≥0.999),平均回收率为91.38%~98.4%,相对标准偏差为0.69%~2.48%。该方法的灵敏度、准确度和精密度均符合检测技术要求,且简便快速,适用于绞股蓝提取物中绞股蓝皂苷XLIX和皂苷A含量的准确测定。

绞股蓝总皂苷激活Atgl诱导结肠癌细胞凋亡的作用研究

目的分析绞股蓝总皂苷(gypenosides,Gyp)对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用,并阐明其机制。方法采用Cell counting kit-8(CCK-8)法和流式细胞术检测细胞活力、细胞周期分布及凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印记(Western blot)分别检测mRNA和蛋白质表达水平;采用Bodipy染色检测脂滴数量。结果Gyp呈浓度依赖性和时间依赖性抑制HCT116细胞增殖;Gyp显著增加G_(0)/G_(1)期HCT116细胞的比例,下调周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs,包括CDK2、CDK4和CDK6)蛋白的表达水平并上调p21和p27蛋白的表达水平;Gyp显著增加凋亡的HCT116细胞的比例,上调活化型半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、活化型聚(ADP-核糖基)转移酶1[Cleaved Poly(ADP-ribose)polymerase 1,Cleaved PARP1]和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达水平并下调B淋巴细胞瘤-xl(B cell lymphoma-xl,Bcl-xl)蛋白的表达水平;Gyp显著降低HCT116细胞中脂滴的数量,下调脂肪酸合酶(fatty acid synthase,Fasn)mRNA的表达水平并上调甘油三酯脂酶(adipose triglyceride lipase,Atgl)mRNA及蛋白的表达水平;与Gyp单独处理相比,Gyp与阿格列他汀(Atgl inhibitor,Atgl抑制剂,简称Atgli)合用显著增加HCT116细胞中的脂滴数量、显著下调HCT116细胞的凋亡率,并降低Cleaved caspase-3的表达水平。结论Gyp通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制HCT116细胞增殖,其机制与Atgl介导的脂代谢有关。

绞股蓝中达玛烷型四环三萜皂苷元的波谱学特征

达玛烷型四环三萜皂苷类成分是绞股蓝中主要有效成分,该类化学成分在人参、三七、西洋参等其他药用植物中也有分布,因其具有抗肿瘤、降血脂血糖等广泛的药理活性,一直是中药领域的研究热点。由于达玛烷型四环三萜皂苷元部分在核磁共振波谱中存在大量的亚甲基、次甲基信号叠加,其化学结构鉴定难度较大。本文拟对已报道的绞股蓝中达玛烷型四环三萜皂苷类成分的波谱学数据进行归纳,总结出绞股蓝皂苷元的结构特点及其波谱学特征,为绞股蓝乃至其他药材中达玛烷型四环三萜皂苷类成分的结构解析提供科学依据。

绞股蓝皂苷调节HMGB1-RAGE信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨绞股蓝皂苷(Gyp)调节高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法使用不同浓度(0~400μmol/L)绞股蓝皂苷处理MG63细胞,CCK-8检测细胞活力。将MG63细胞分为对照组(Control组)、绞股蓝皂苷低、中、高浓度组(Gyp-L组、Gyp-M组、Gyp-H组,50、100、200μmol/L Gyp)、绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1阴性对照组(Gyp-H+pcDNA-NC组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-NC质粒)和绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1组(Gyp-H+pcDNA-HMGB1组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-HMGB1质粒)。Edu检测细胞增殖水平;Transwell小室和划痕愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力;ELISA检测转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶(MMP-9)和白介素-6(IL-6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测通路、凋亡及EMT相关蛋白。随后建立骨肉瘤移植小鼠模型,在体检验绞股蓝皂苷对骨肉瘤移植瘤生长的影响。结果25~400μmol/L的绞股蓝皂苷能降低MG63细胞活力。与Control组相比,Gyp-L组、Gyp-M组和Gyp-H组细胞Edu阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率、TGF-β、MMP-9和IL-6水平及Bcl-2、HMGB1、RAGE、N-cadherin和VEGF蛋白表达显著降低(P<0.05);细胞凋亡率及Bax和E-cadherin蛋白表达显著增加(P<0.05),且呈浓度依赖性。过表达HMGB1可部分逆转绞股蓝皂苷对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用(P<0.05)。小鼠移植瘤实验结果表明,绞股蓝皂苷可显著抑制小鼠骨肉瘤移植瘤的生长(P<0.05)。结论绞股蓝皂苷对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用可能与抑制HMGB1-RAGE信号通路有关。

绞股蓝总皂苷通过PPAR-γ与Wnt途径影响大鼠动脉粥样硬化及部分有效成分预测

目的探讨绞股蓝总皂苷对动脉粥样硬化大鼠主动脉炎症反应的影响及预测部分绞股蓝有效成分。方法将60只SD大鼠分为空白对照组(Nor组,)、模型组(Mod组)、辛伐他汀组(Sim组,5 mg/kg灌胃,13周)、绞股蓝总皂苷组(GPs组,160 mg/kg灌胃,13周)、GW9662组(PPAR-γ抑制剂,10 mg/kg灌胃,13周)及GPs+GW9662组[GPs 160 mg/kg及GW966210 mg/(kg·d),灌胃,13周],其中Nor组普通饮食,其他组予以高脂饲料联合腹腔注射维生素D 3以构建动脉粥样硬化大鼠模型;建模13周后取大鼠血液、胸主动脉和腹主动脉,HE切片染色观察胸主动脉组织学变化,ELISA测定血清中IL-6含量,Western blot检测腹主动脉过氧化酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ),Wnt3a及β-catenin蛋白表达、qRT-PCR检测腹主动脉PPAR-γ及Wnt3a及β-catenin mRNA表达;利用分子对接初步筛选绞股蓝总皂苷与PPAR-γ亲和力较高的有效成分。结果与Nor组比较,Mod组及其他干预组大鼠主动脉切片可见AS特征性病变,其中GW9662组病变明显,辛伐他汀和绞股蓝总皂苷各干预组病变较轻;与Mor组相比,GPs组大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)含量显著减少;与Mor组大鼠腹主动脉比较,GPs组PPAR-γ蛋白和mRNA的表达显著减少(P<0.05)、其他非阳性对照干预组均不同程度增高,而Mor组Wnt3a、β-catenin和mRNA表达与Nor组相比明显升高(P<0.05)、其他非阳性对照干预组均不同程度减少,其中GPs组显著降低;分子对接结果显示野黄芩苷、胆固醇、菜油甾醇、谷甾醇、3′-甲基鼠李素对PPAR-γ具有较强的亲和力。结论绞股蓝总皂苷可能是通过调节PPAR-γ与Wnt经典途径改善大鼠动脉粥样硬化,野黄芩苷、胆固醇、菜油甾醇、谷甾醇、3′-甲基鼠李素成分是绞股蓝部分有效成分。

不同水培条件对绞股蓝生长及总皂苷含量的影响

绞股蓝是一种重要的药食同源植物,因含有人参皂苷类物质而享有“南方人参”的美誉。由于野生绞股蓝资源日益枯竭,人工引种栽培绞股蓝已成为必然趋势。然而,受土壤灌溉、施肥、农药使用等因素影响,绞股蓝药材品质不稳定、重金属含量超标等问题时有发生,严重影响其规范化种植和药材质量安全。水培生产具有周期短、产量高、无连作障碍、可有效避免重金属污染等优点,被广泛应用于多种中药材生产中。对绞股蓝幼苗进行不同营养液、不同温度、不同光照强度和光周期处理,研究各处理对绞股蓝生长和总皂苷积累的影响,以期得到适合绞股蓝生长和有效成分积累的最优水培条件,研究结果表明,pH为6.0的日本园试营养液是绞股蓝水培的最佳营养液。相关性分析结果显示,不同营养液条件下,绞股蓝单株总皂苷量与株高、叶长、叶宽、叶片数、单株鲜重及单株干重呈高度正相关,表明培育高生物量植株是提高绞股蓝药材质量的关键。在环境温度为20~30℃,光周期为每天光照10~14 h,光照强度为100μmol/(m^(2)·s)条件下,绞股蓝幼苗生长较好,且干样品总皂苷含量超过3%,高于现有标准。

绞股蓝总皂甙对家兔血小板聚集释放及cAMP水平的影响

本文研究了绞股蓝总皂甙对家兔血小板聚集、5—羟色胺释放及血小板内cAMP含量的影响.结果发现绞股蓝总皂甙在体内和体外均明显抑制二磷酸腺苷,花生四烯酸和胶原诱导的血小聚集;抑制血小板5—羟色胺的释放;升高血小板内cAMP的水平.效应与剂量间呈现依赖关系.提示绞股蓝总皂甙为一血小板功能抑制剂,作用机理可能与其升高血小板内cAMP的水平,抑制血小板释放活性物质有关.

绞股蓝总皂苷及其不同提取物对实验性高血压大鼠的降压作用

目的研究绞股蓝总皂苷和绞股蓝不同提取物对大鼠血压的影响。方法将大鼠分为9组,除空白对照组外,高血压模型组、绞股蓝总皂苷对照组、绞股蓝总皂苷干预组(绞股蓝总皂苷180 mg/kg、360 mg/kg、720 mg/kg,低、中、高剂量组)、总提取物组、乙酸乙酯提取物组和正丁醇提取物组的大鼠均被喂养高脂高糖饲料和饮用糖盐水(糖4%、盐1%)和果糖水(6%)。绞股蓝总皂苷对照组、绞股蓝总皂苷干预组、总提取物组、乙酸乙酯提取物组和正丁醇提取物组的大鼠均给予相应剂量的药物灌胃。给药8周后处死大鼠,测定大鼠血清中一氧化氮(NO)、内皮素(ET)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量。结果与空白对照组相比,高糖高脂饮食能明显使大鼠血压的增高[收缩压增高(34.9±9.8)%,舒张压增高(17.9±8.5)%],差异有统计学意义(P<0.05)。与高血压模型组相比,绞股蓝总皂苷对照组收缩压降低(39.7±6.9)%、舒张压降低(36.7±7.3)%,血压显著性降低(P<0.05)。与空白对照组相比,绞股蓝总皂苷对照组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组收缩压、舒张压相差不大(P>0.05)。绞股蓝总皂苷明显降低大鼠的血压,同时能显著增加大鼠血清NO含量,降低大鼠血清ET和AngⅡ的含量。结论绞股蓝总皂苷及其乙酸乙酯、正丁醇提取物可预防高糖高脂诱导的大鼠血压的增高。绞股蓝总皂苷可能通过降低ET、AngⅡ含量和升高NO含量来发挥对大鼠的降压作用。

绞股蓝的皂甙成份及资源

本文综述了绞股蓝植物资源。皂甙含量和84种绞股蓝皂甙的化学结构及其水解转化的意义。

绞股蓝皂甙对2型糖尿病肾病的血脂、微量白蛋白尿的影响

目的研究绞股蓝皂甙(gypenoside)对2型糖尿病患者的血脂和尿蛋白的作用。方法把108例2型糖尿病患者(Cr<256mmol/L)随机分为绞股蓝皂甙治疗组38例,安博维(ARB)组36例,对照组34例,所有患者继续用降糖药物治疗,伴高血压患者可并用CCB、β阻滞剂控制血压,目标值为130/80mmHg。观察疗程24周。结果观察对比治疗前后的甘油三脂、低密度脂蛋白和尿微量白蛋白排泄率,绞股蓝皂甙组比较对照组各项指标有明显下降(P<0.01),与安博维组比较,尿AER下降接近(P>0.05),TG、LDL有明显下降(P<0.05)。结论绞股蓝皂甙对2型糖尿病患者有明显改善肾功能及降脂作用。

复方绞股蓝皂甙改善小鼠学习记忆的研究

目的:验证复方绞股蓝皂甙具有改善小鼠学习记忆的作用。方法:按卫监发(1996)第38号《保健食品功能学评价程序和方法》中的改善记忆作用检验方法进行跳台试验和避暗试验。结果:复方绞股蓝皂甙能明显地提高小鼠跳台被动回避反应再现能力和提高避暗反应再现能力。结论:复方绞股蓝皂甙具有明显改善记忆作用。

绞股蓝总皂甙升高白细胞作用探讨

绞股监Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino系葫芦科绞股蓝属植物。含80多种皂甙。具有抗肿瘤、提高免疫功能、抗衰老等多种生理活性。然而绞股蓝对低自细胞血症有何影响,未见详细报道,本文就这方面的作用进行实验研究。 1 实验材料药物:绞股蓝总皂甙(gypenosides,GP),由本所植化室提供,临用时配成所需浓度的水溶液。环磷酰胺(CTX),上海第十二制药厂生产。动物:昆明种小鼠,20±2g,雌雄兼备,由湖南医科大学实验动物中心提供。 2 方法与结果 2.1 GCP对TX所致小鼠低白细胞血症的保护作用:小鼠,按表1分组并灌胃给药,除正常对照组外,其余各组均于第5天腹腔注射CTX(80mg/kg)造成低白细胞血症模型,继续灌胃给药至第8天,尾静脉取血测定白细胞总数。结果见表1。

绞股蓝总皂甙体外对免疫细胞功能的影响

通过检测脾细胞增殖反应以及白介素１（ＩＬ－１）和白介素２（ＩＬ＿２）活性，研究了绞股蓝总皂甙（ＧＰ）体外对免疫细胞功能的影响。结果表明，ＧＰ（２～５０ｍｇ／Ｌ）可明显促进刀豆蛋白Ａ诱导小鼠Ｔ淋巴细胞增殖反应和脂多糖诱导Ｂ淋巴细胞增殖反应；ＧＰ还可促进大鼠腹腔巨噬细胞产生ＩＬ＿１活性以及脾细胞产生ＩＬ＿２活性。这些结果提示。

绞股蓝营养器官的结构及其人参皂甙的组织化学定位研究

绞股蓝是多年生草质藤本植物。根系由不定根组成 ,根的初生结构木质部为 2～ 4原型 ,次生结构中栓内层较厚。攀缘茎 ,具 5棱 ,周围纤维连成一环 ,幼茎的维管束排成两圈 ,外圈 5个 ,内圈 4或 5个 ;老茎圆柱形 ,周围纤维呈不连续环状 ,维管束具次生木质部和次生韧皮部 ,排成一圈。掌状复叶互生 ,小叶 5～ 7片 ,背腹型 ;叶柄具 5束维管束 ,进入小叶时分为 7～ 9束。茎和叶的初生维管束为双韧维管束。组织化学实验表明 ,绞股蓝人参皂甙主要分布在营养器官的同化组织及韧皮部薄壁细胞中 ,厚角组织。

绞股蓝人参皂甙的组织化学定位及其含量的变化

应用光镜技术、组织化学定位及植物化学方法,研究了人参皂甙在绞股蓝营养器官中的积累分布状态以及不同生长期、不同器官、不同性别之间的绞股蓝总皂甙含量的动态变化。结果表明,绞股蓝人参皂甙主要分布在营养器官的同化组织及韧皮部薄壁细胞中,厚角组织、表皮及周皮的栓内层也有少量分布,木质部和髓薄壁组织中无皂甙分布;叶中皂甙积累最多,茎次之,根最少。绞股蓝在营养生长期→花果期→枯萎期的生长发育过程中,其地上部分的皂甙含量呈现出低→高→低的变化趋势;叶的含量高于茎,雄株的含量高于雌株。从而认为在9-10月的花果期采收绞股蓝的地上部分而保留地下茎和根,有利于药材品质和产量的提高,又有利于药用资源的可持续开发利用。

绞股蓝皂甙对犬脑干缺血性损伤的保护作用

用基底动脉结扎法造成犬脑干缺血.在缺血前3h十二指肠灌注给予绞股蓝皂甙(150mg·kg^（-1）).脑干缺血后6h的观察表明,绞股蓝皂甙减轻神经元缺血性损害(光镜及电镜),改善脑干听觉诱发电位(BAEP)的异常变化,降低缺血导致的磷脂酶A_2(PLA_2)活性升高,增强超氧化物岐化酶(SOD)活性.结果表明绞股蓝皂甙对脑干缺血性损伤有保护作用,其机制可能与其拮抗自由基和钙相关性损伤有关.

绞股蓝皂甙对体外瘤胃微生物甲烷产量及发酵特性的影响

利用体外产气量法研究绞股蓝皂甙对山羊瘤胃微生物体外甲烷产量及发酵特性的影响。试验包括2个部分,试验一研究了绞股蓝皂甙对瘤胃微生物甲烷产量及发酵特性的影响,试验二分析绞股蓝皂甙对瘤胃微生物发酵动力学参数的影响。试验以0.42 g羊草+0.126 g玉米+0.054 g豆粕为发酵底物,60 mL培养基中的绞股蓝皂甙添加量分别为0(对照),5,10,20和40 mg,发酵24 h。与对照组比较,发酵8 h,各处理组甲烷浓度显著下降(P<0.05),分别下降30.20%,43.49%,44.67%和75.8%;12 h,20 mg组显著下降(P<0.05),40 mg组极显著下降(P<0.01),处理组甲烷浓度分别下降6.97%,9.63%,18.90%和61.82%;24 h,10 mg组显著下降(P<0.05),40 mg组极显著下降(P<0.01),处理组甲烷浓度分别下降2.34%,9.39%,6.90%和20.73%,甲烷浓度与皂甙剂量之间有极显著的线性效应(P<0.01)。10 mg组的氢利用率极显著低于对照组,其他试验组无显著变化。10 mg组显著提高了TVFA及乙酸、丙酸、异丁酸、戊酸、异戊酸和支链脂肪酸浓度(P<0.05),40 mg组丁酸的浓度极显著下降(P<0.01)。10 mg组和20 mg组乙丙比显著高于对照组(P<0.05)。随着皂甙剂量增加,乙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、支链脂肪酸、总挥发性脂肪酸浓度及乙丙比呈显著或极显著的二次方效应,丁酸同时具有极显著的线性效应。处理组原虫数量显著(P<0.05)或极显著下降(P<0.01)(40 mg组),且与皂甙剂量间存在极显著的线性和二次方效应(P<0.01)。微生物蛋白含量没有显著变化,但呈上升趋势。10 mg组和40 mg组的氨态氮浓度显著升高(P<0.05),氨态氮浓度与皂甙剂量之间有显著的线性效应(P<0.05)。高剂量绞股蓝皂甙降低了微生物发酵的理论与实际产气量,并呈显著的线性和二次方效应,产气速率与皂甙剂量之间有着显著的线性效应。以上结果表明绞股蓝皂甙能改变瘤胃微生物发酵模式,降低瘤胃微生物的甲烷产量,提高VFA的产量,有利于饲料能量的利用,同时缓解甲烷对大气环境的污染。

绞股蓝营养器官各发育阶段结构与总皂甙含量相关性的研究

应用组织化学定位技术及植物化学方法,研究了不同发育阶段绞股蓝茎叶的结构与其中人参皂甙分布积累和总皂甙含量的关系。绞股蓝内的人参皂甙通过特定的显色剂能显示从紫红到浅红的颜色反应,颜色深浅与人参皂甙含量呈正相关。结果表明,叶内的皂甙主要分布在叶肉组织内,未分化的叶肉组织比成熟组织含量高,衰老的叶片不含皂甙。茎内的皂甙主要分布于维管束的外生韧皮部薄壁细胞中,表皮、同化组织、厚角组织及周皮的栓内层也有少量分布,木质部和髓薄壁组织无皂甙积累;幼茎所含总皂甙高于发育成熟的茎和老茎,含量最高的则是具有贮藏功能的根状茎。在绞股蓝全草中,叶的总皂甙含量高于相应发育阶段的茎,而以当年生根状茎的含量最高。提出了皂甙在叶内积累、茎内运输和地下茎内贮藏的观点及科学采收绞股蓝的建议。

毛绞股蓝皂甙对体外培养小鼠脑皮层神经元损伤的保护作用

目的研究毛绞股蓝皂甙（ＳＧＰ）对谷氨酸（Ｇｌｕ）介导的神经毒作用及缺糖缺氧损害的保护作用。方法体外培养小鼠脑皮层神经元，测定孵育液中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的含量。结果ＳＧＰ２，１０ｍｇ·Ｌ－１可拮抗Ｇｌｕ介导的神经毒作用，使ＬＤＨ漏出减少，细胞死亡率降低。结论ＳＧＰ可拮抗Ｇｌｕ介导的神经毒作用，对皮层神经元缺糖缺氧致损伤亦具有保护作用。