绞股蓝皂苷ⅩⅦ对急性脊髓损伤大鼠的神经保护及细胞凋亡的影响

目的 探讨绞股蓝皂苷ⅩⅦ对急性脊髓损伤大鼠的神经保护及细胞凋亡的影响。方法 采用Allen法构建急性脊髓损伤大鼠,分为A组(假手术组)、B组(SCI模型组)、C组(SCI+低剂量组)、D组(SCI+中剂量组)、E组(SCI+高剂量组),每组15只。采用BBB评分标准评价大鼠后肢运动功能恢复情况,HE染色观察脊髓组织病变情况,TUNEL和Neun共染色观察神经细胞凋亡情况。结果 造模组较假手术组后肢运动评分下降(P<0.05);绞股蓝皂苷ⅩⅦ组BBB评分均要高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);中高剂量组在1、3、5 d的BBB评分均要高于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组在1 d的BBB评分要高于中剂量组(P<0.05);与假手术组相比,模型组的脊髓病变和组织细胞凋亡增加(P<0.05),与绞股蓝皂苷ⅩⅦ组的病变面积较模型组减少(P<0.05)。结论 绞股蓝皂苷ⅩⅦ有助于改善急性脊髓损伤大鼠的修复。

基于HPLC-QAMS法同时测定清肺散结丸中阿克苷、苦玄参苷ⅠB、苦玄参苷ⅠA、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ的含量

目的:建立高效液相一测多评法同时测定清肺散结丸中阿克苷、苦玄参苷ⅠB、苦玄参苷ⅠA、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷ⅩLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ的含量。方法:采用高效液相一测多评法,以Welch Material C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,柱温:25℃;流动相为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.9 ml·min-1;检测波长分别为264 nm(检测阿克苷、苦玄参苷ⅠB和苦玄参苷ⅠA)和203 nm(检测三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ)。以苦玄参苷ⅠA为内参物,建立其与阿克苷、苦玄参苷ⅠB、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ的相对校正因子,计算各成分含量。结果:阿克苷、苦玄参苷ⅠB、苦玄参苷ⅠA、三七皂苷R1、绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ分别在1.87~46.75μg·ml-1(r=0.9991)、2.03~50.75μg·ml-1(r=0.9997)、1.06~26.50μg·ml-1(r=0.9993)、0.97~24.25μg·ml-1(r=0.9996)、0.81~20.25μg·ml-1(r=0.9991)、1.39~34.75μg·ml-1(r=0.9997)、2.26~56.50μg·ml-1(r=0.9995)范围内线性关系良好;平均加样回收率(RSD)分别为98.83%(0.97%),100.11%(0.62%),97.92%(1.38%),96.96%(1.40%),97.74%(1.18%),99.15%(0.89%)和99.36%(1.01%)(n=9);一测多评法的计算值与外标法(ESM)测定值间无明显差异。结论:所建立的HPLC-QAMS法结果准确,可用于清肺散结丸的质量控制。

绞股蓝皂苷ⅩⅦ调控PI3K/Akt信号通路对脑缺血再灌注模型大鼠的保护作用

目的研究绞股蓝皂苷ⅩⅦ对脑缺血再灌注模型大鼠的保护作用。方法将75只SD雄性大鼠随机分为5组,假手术组、模型组和绞股蓝皂苷ⅩⅦ(25、50、100 mg/kg)组,每组15只,按照组别进行不同的给药干预,连续灌胃给药14 d。造模后,观察各组大鼠的一般情况,脑缺血再灌注24 h后,免疫组化法检测脑缺血组织蛋白激酶B(Akt)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的表达,剥离缺血半暗带脑组织,ELISA法检测白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,蛋白免疫印迹(WB)技术检测缺血组织中PI3K、Akt蛋白表达的变化。结果与假手术组相比,模型组神经功能缺损评分显著降低(P<0.01),梗死灶周围炎性细胞数量明显增多(P<0.01),Akt和PI3K的含量及蛋白表达显著升高(P<0.01),缺血半暗带组织中IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著升高(P<0.01);与模型组相比,绞股蓝皂苷ⅩⅦ50、100 mg/kg组神经功能缺损评分差异有显著统计学意义(P<0.01),梗死灶周围炎性细胞数量明显减少,Akt和PI3K的免疫组化表达及蛋白表达显著降低(P<0.05),缺血半暗带组织中IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.01),而绞股蓝皂苷ⅩⅦ25 mg/kg并没有明显的保护作用。结论绞股蓝皂苷ⅩⅦ能下调Akt和PI3K的表达,调控PI3K/Akt信号通路,从抗炎方面抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的释放对脑缺血再灌注大鼠发挥炎症保护作用。

基于Nrf2/ARE信号通路研究绞股蓝皂苷ⅩⅦ抗脑缺血/再灌注机制

目的:探讨绞股蓝皂苷ⅩⅦ调控核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路抗脑缺血/再灌注(I/R)的机制。方法:将40只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、I/R模型组及25、50和100 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ组,每组8只。绞股蓝皂苷ⅩⅦ组分别给予绞股蓝皂苷ⅩⅦ 25、50、100 mg/kg灌胃(灌胃量0.01 mL/g),连续给药14 d;其余两组给予相同剂量生理盐水灌胃。然后采用改良线栓法制备大鼠脑I/R模型;假手术组大鼠采用相同方法手术,但不产生实质性栓塞。再灌注后24 h,评估各组大鼠神经功能缺损评分;采集大鼠腹主动脉全血检测血清活性氧(ROS)、血红素加氧酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、超氧化物歧化酶(SOD)、醌NADH氧化还原酶1(NQO1)、丙二醛(MDA)水平;随后取完整大脑组织并分离大脑皮质脑梗死周围半暗带组织,观察大鼠脑组织大体情况及脑梗死体积,光镜下观察脑组织病理学变化,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA表达,采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的蛋白表达。结果:再灌注后24 h,与假手术组比较,I/R模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高,脑组织梗死体积明显增大,血清NQO1、SOD和γ-GCS水平均明显降低、血清MDA、HO-1和ROS水平均明显升高,脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA及蛋白表达均明显升高。与I/R模型组比较,50 mg/kg与100 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ能明显降低脑I/R大鼠的神经功能缺损评分(分:1.50±0.53、1.37±0.52比2.75±0.46),缩小脑组织梗死体积〔(19.8±5.1)%、(21.4±6.4)%比(42.3±5.8)%〕,明显提高血清NQO1、SOD、HO-1和γ-GCS水平〔NQO1(ng/L):186.05±10.38、220.75±16.22比131.36±5.95,SOD(kU/L):63.23±5.30、72.70±8.62比36.75±6.55,HO-1(ng/L):60.57±7.93、60.35±4.72比42.72±4.95,γ-GCS(kU/L):8.81±0.53、8.72±0.69比6.80±0.56〕,明显降低血清MDA和ROS水平〔MDA(μmol/L):5.94±0.66、5.61±0.53比10.88±1.34,ROS(kU/L):69.11±4.23、67.12±4.52比104.43±7.54〕,同时可明显提高脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA及蛋白表达〔Nrf2 mRNA(2^(-△△Ct)):1.90±0.13、2.13±0.18比1.48±0.11,Keap1 mRNA(2^(-△△Ct)):1.78±0.11、1.85±0.10比1.43±0.10,Nrf2/β-actin:0.73±0.04、0.79±0.03比0.60±0.03,Keap1/β-actin:0.71±0.01、0.76±0.03比0.61±0.01〕,比较差异均有统计学意义(均 P<0.01);25 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ无明显作用。 结论:绞股蓝皂苷ⅩⅦ (50 mg/kg和100 mg/kg)可能通过Nrf2/ARE信号通路调节NQO1、SOD、HO-1、γ-GCS、ROS及MDA起到抗脑I/R损伤的作用。

HPLC梯度洗脱法同时测定通脉降糖胶囊中7种成分含量

目的:建立HPLC梯度洗脱法同时测定通脉降糖胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、芒柄花素、太子参环肽B、绞股蓝皂苷XLIX、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ含量的含量。方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温25℃;流动相:乙腈-0.3%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min^-1;检测波长分别为260 nm(检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和芒柄花素)和203 nm(检测太子参环肽B、绞股蓝皂苷XLIX、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ)。结果:毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、芒柄花素、太子参环肽B、绞股蓝皂苷XLIX、绞股蓝皂苷A和绞股蓝皂苷ⅩⅦ分别在3.76~94.00、2.19~54.75、5.12~128.00、0.86~21.50、7.98~199.50、8.59~214.75、11.96~299.00μg·mL-1线性关系良好(r≥0.9992),平均加样回收率分别为99.50%、97.97%、98.87%、96.93%、100.00%、99.03%和98.94%,RSD分别为0.87%、1.55%、1.04%、1.18%、0.73%、1.49%和0.90%。结论:该方法操作便捷、重复性好,可用于通脉降糖胶囊中多指标性成分的质量控制。