绞股蓝皂苷LI与顺铂联用对食管癌EC109细胞生长的抑制作用

目的研究绞股蓝皂苷LI(Gyp LI)与顺铂(DDP)联用对食管癌EC109细胞存活的抑制作用,以及对细胞凋亡、周期和迁移的影响。方法(1)将Gyp LI 0~200μmol·L^(-1)、DDP 0~800μmol·L^(-1)、Gyp LI3.125μmol·L^(-1)+DDP 0~200μmol·L^(-1)分别作用EC109细胞24 h,MTT法检测细胞存活率并计算半抑制浓度(IC_(50))值,利用CompuSyn软件计算联合指数(CI)。(2)将EC109细胞分为细胞对照组、Gyp LI60μmol·L^(-1)组、DDP 35μmol·L^(-1)组及Gyp LI 3.125μmol·L^(-1)和DDP 10μmol·L^(-1)联用组,给药24 h后,显微镜下观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染、PI/RNase染色和流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,采用划痕实验检测细胞迁移,Western印迹法检测促凋亡因子Bax、细胞色素c、细胞周期蛋白A、细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达。结果(1)Gyp LI和DDP单用组EC109细胞存活率的IC_(50)值分别为(55.34±3.52)μmol·L^(-1)和(37.48±2.99)μmol·L^(-1),Gyp LI 3.125μmol·L^(-1)与不同浓度DDP联用时,IC_(50)值降至(8.05±5.34)μmol·L^(-1),CI值均<1,表明两药联用具有协同作用。(2)Gyp LI与DDP联用时细胞出现生长缓慢、形态不规则、细胞脱落等特征。与细胞对照组比较,Gyp LI 60μmol·L^(-1)组、DDP35μmol·L^(-1)组和联用组的细胞凋亡率从(1.30±0.08)%分别上升至(4.87±0.04)%,(6.44±0.37)%和(9.12±0.20)%(P<0.01),联用组细胞凋亡率比DDP单用组显著升高(P<0.01)。Gyp LI组、DDP组和联用组细胞周期分别阻滞于S期,G_(2)/M期和G_(0)/G_(1)期。与细胞对照组比较,Gyp LI 60μmol·L^(-1)组、DDP 35μmol·L^(-1)组和联用组细胞迁移率从(29.54±5.56)%分别降至(15.30±3.64)%,(13.61±0.06)%和(5.95±0.56)%(P<0.01)。Western印迹法结果显示,与细胞对照组相比,DDP 35μmol·L^(-1)组和联用组促凋亡因子Bax表达水平均显著升高(P<0.01),Gyp LI 60μmol·L^(-1)组、DDP 35μmol·L^(-1)组和联用组细胞色素c表达水平均显著升高(P<0.01),其中联用组Bax和细胞色素c相对表达含量最高;与细胞对照组相比,Gyp LI 60μmol·L^(-1)组细胞周期蛋白A表达水平显著降低(P<0.01),联用组细胞周期蛋白D1表达水平显著降低(P<0.05);与细胞对照组相比,Gyp LI 60μmol·L^(-1)组、DDP 35μmol·L^(-1)组和联用组MMP-9表达均下降(P<0.05,P<0.01),其中联用组MMP-9表达水平最低。结论Gyp LI具有较好的抑制EC109细胞存活作用,与DDP联用能够协同抑制EC109细胞增殖,联用机制可能与上调Bax和细胞色素c表达、下调细胞周期蛋白D1和MMP-9表达有关。