连续继代培养下培养基降本措施对甘薯组培苗生长的影响

为降低甘薯(Dioscorea esculenta(Lour.)Burkill)组培苗快繁培养的生产成本,提高工厂化育苗的经济效益,在MS基本培养基的基础上,通过简化培养基组成、以自来水代替去离子水、以白砂糖代替蔗糖等降本措施,研究了连续继代培养下培养基组成简化或替代措施对甘薯组培苗生长的影响。结果表明,无论是初代培养还是继代培养,以白砂糖代替蔗糖,对甘薯组培苗生长无显著影响,但去除培养基中的微量元素、有机物质或以自来水代替去离子水,均对组培苗产生不利影响,导致株高降低、增殖系数减小、根系生长变差,且这种不利影响在经历长时间的继代培养后进一步加剧,组培苗生长更差。因此,在甘薯组培苗的工厂化生产中,可以用白砂糖代替蔗糖,降低组培生产成本,而其他降本措施不宜采用。

继代培养对链格孢菌生长及产毒的影响

目的探究连续继代培养对链格孢菌(Alternaria alternata)菌株的生长以及产毒的影响。方法将10株链格孢菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potato dextrose agar,PDA)上连续继代培养,分析菌株的生长、产孢情况;利用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测并分析主要链格孢霉毒素[包括交链孢酚(alternariol,AOH)、交链孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)、交链孢烯(altenuene,ALT)、细交链格孢菌酮酸(tenuazonic acid,TeA)]的含量变化。结果在PDA培养基中,连续继代培养链格孢菌极易出现角变、菌丝变白、菌丝生长速率加快等菌株退化现象。随着继代培养次数的增加,菌株生长速度加快,菌落直径变大,角变率增大;10株链格孢菌中有7株(MY-4、MY-12、MY-15、MY-73、MY-80、MY-103、MY-117)产孢量随着继代次数的增加先增加后降低,3株(MY-65、MY-67和MY-108)产孢量随着继代次数的增加显著降低;10株链格孢菌中有4株可以产生TeA毒素,且Te A毒素的含量随着继代次数的增加先上升后下降,第五代菌株(F5)产毒能力最强。继代培养对ALT毒素含量影响较大,除MY-103以外,随着继代次数的增加,ALT毒素的含量显著降低(达91.13%~99.85%)。AOH和AME毒素含量随着继代次数的增加呈下降或者呈先上升后下降的趋势。结论连续继代培养5代对链格孢菌的生长、产孢、产毒等均会产生较大影响。在菌株的实际应用过程中,应该避免菌株过多次的继代培养,尽量使用5代以内的链格孢菌。

继代培养周期对‘正午’牡丹不定根发生及生理指标的影响

【目的】研究继代培养周期对牡丹试管苗不定根发生的影响及其生理机制,为牡丹试管苗工厂化生产提供参考。【方法】以‘正午’牡丹试管苗为材料,在增殖培养过程中定期(20,30,40,50,60 d)选取单芽进行生根培养,测定试管苗生根指标(生根率、平均根数、平均根长)和不同培养时期内源激素吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、细胞分裂素(ZR)和赤霉素(GA 3)含量,过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、吲哚乙酸氧化酶(IAAO)活性,以及可溶性糖、可溶性蛋白和总酚含量,分析生根状况与生理指标的相关性。【结果】‘正午’牡丹继代培养40 d的试管苗生根效果最佳,此时的生根率(30.86%)显著高于其他处理,平均根数1.17条,平均根长0.83 cm,愈伤组织小,生根质量较高。继代培养过程中,内源激素IAA、ABA、ZR含量的动态变化一致,而GA 3含量与之相反;IAA、ABA含量与平均根数呈显著正相关,而GA 3含量与平均根数呈显著负相关;IAA/ZR、IAA/GA 3与平均根数呈显著和极显著正相关。POD、PPO、IAAO活性波动较大,其中PPO活性与生根率呈显著负相关,IAAO活性与平均根数呈显著正相关。可溶性糖含量与生根率呈极显著正相关。【结论】‘正午’牡丹试管苗的最佳继代培养周期为40 d,该时期试管苗的生理状态更适宜生根,IAA、可溶性糖含量对试管苗生根的正向影响较大。

继代培养对灵芝胞外酶活力及品质的影响

为探究菌种继代培养对灵芝栽培过程中胞外酶活力和灵芝子实体品质的影响,采用比色法、高效液相色谱法等研究了不同传代次数菌种对灵芝胞外酶活力、子实体干基生物学效率、浸出物、多糖、三萜及甾醇、灵芝酸类成分的影响,并通过相关性分析探讨胞外酶活力和灵芝品质之间的相关性。结果表明,随着菌种继代培养次数的增加,灵芝漆酶、滤纸酶、纤维素酶和淀粉酶酶活力呈下降趋势;相关性分析表明,漆酶、滤纸酶、纤维素酶和淀粉酶酶活与子实体干基生物学效率、浸出物、多糖质量分数及灵芝酸A、灵芝酸D、灵芝酸F、灵芝烯酸A和灵芝烯酸D质量浓度呈极显著正相关;进一步通径分析发现滤纸酶是影响灵芝干基生物学效率及多糖、灵芝酸F质量浓度的关键胞外酶,纤维素酶是影响灵芝烯酸A质量浓度的关键胞外酶。因此,在实际生产中,应将灵芝菌种继代培养次数控制在5代以内,基质中主要胞外酶具有高活力,灵芝干基生物学效率高且品质最好。

羊肚菌连续继代培养对菌丝老化的影响

选取羊肚菌“六妹”“七妹”以及“六妹”与“七妹”融合种3个品种共10个菌株,通过组织分离获得母种,对其菌丝体进行多次继代培养,测定所有供试菌株不同代数的菌丝生长速度和长势变化,从而探究母种的连续继代培养对菌丝老化的影响,以期为羊肚菌菌种使用和继代培养对菌丝退化的研究提供理论基础。结果表明:同一个子实体分离得到的菌株继代培养生长曲线和菌丝形态变化并不相同,菌株之间具有明显的差异性,但连续多次继代后,10个菌株均或早或晚出现了老化至死亡的现象。

人脐带静脉内皮细胞的继代培养

人脐带静脉内皮细胞继代培养25代。应用光镜、电镜及Ⅷ因子相关抗原的免疫荧光方法进行鉴定与观察。在RPMI-1640培养液中加入20%人血清,内皮细胞生长因子200μg/ml,肝素100μg/ml及培养皿的明胶覆膜是人内皮细胞长期培养的重要条件。

TDZ和6-BA对枣树继代培养的影响

以狗头枣和骏枣试管苗为材料，研究了TDZ和6-BA在枣树试管苗继代培养中的效应并筛选了适宜组合。结果表明，在枣试管苗继代培养中，TDZ与6-BA分别与IBA配合使用时，附加6-BA 1．2～1．6mg／L比较适合；TDZ的活性高于6-BA。其诱导的不定芽比6-BA的多但芽曲质量显著降低。二者结合使用则可显著促进不定芽的增殖并提高成苗质量，在CY＋TDZ 0．005～0．01mg／L＋6-BA1．0mg／L＋IBA0．2mg／L的组合培养基上可获得最佳繁殖效果。TDZ与IBA配合使用时能抑制试管枣苗生根，但可促使茎段愈伤组织的诱导。说明TDZ具有强烈地刺激细胞分裂的作用，并且在枣试管苗继代培养中与6-BA具有很好的协同促进作用。

兰州百合继代培养过程中的染色体变异

对兰州百合 (Liliundavidiivar Unicolor(hong)cotton)组培过程中的染色体行为进行了研究 .随着其继代次数的增加 ,愈伤组织细胞染色体数目变异随之增加 .而继代次数对诱导小鳞芽的染色体数目影响不大 ,仅与诱导成芽率成负相关 .

龙眼胚性愈伤组织长期继代培养及其染色体数目变异

从龙眼幼胚培养诱导并筛选出的松散型胚性愈伤组织 ,在继代培养基上已培养 6 a以上 ,所保持的若干愈伤组织仍具有强烈的体细胞胚胎发生能力 .经细胞学检查 ,其中个别愈伤组织系的部分愈伤组织团发现有2 n=3x=4 5,或 2 n=4 x=6 0等染色体数目的变异细胞 。

苹果离体新梢外植体继代培养次数对其再生的影响

对不同继代培养次数的富士、金冠、乔纳金苹果(Malus domestica Borkh.)组培离体新梢外植体分别进行新梢增殖倍数、生根和叶片不定芽再生能力研究。结果表明,3个品种无菌繁殖系建立后第5次继代培养的离体新梢外植体的增殖倍数、生根和叶片不定芽再生能力均较低;随继代次数增加,以上各种器官再生能力稳定在较高水平,继代76、164代的富士及76、84、116代的金冠和乔纳金新梢外植体间均无明显差别。说明苹果新梢外植体达到离体培养状态后经20年100余次继代培养,其器官再生能力没有显著变化。

不同培养基继代培养球孢白僵菌对西花蓟马毒力和产孢量的影响

【目的】通过开展连续继代培养对高毒菌株产孢和毒力的影响研究,获得对西花蓟马（Frankliniella occidentalis）毒力和产孢量均高且稳定的球孢白僵菌（Beauveria bassiana）菌株,进一步提出有效防止菌株退化、优良菌株保存和改良的方法与措施,为高效菌株的规模化生产提供参考。【方法】室内条件下,采用浸虫法,用浓度为1×10^7个孢子/mL球孢白僵菌悬浮液处理西花蓟马初羽化成虫,分别测定28株不同来源的菌株对西花蓟马的毒力;并将筛选出的4株高毒力菌株的分生孢子分别涂布于玉米琼脂（CMA）培养基与SDAY培养基上,比较不同菌株以及不同培养基之间产孢量的差异,筛选出高产孢菌株与产孢培养基,以筛选得到的白僵菌菌株为初始菌株F_0,把F_0代球孢白僵菌分别接种于CMA培养基、添加蝉蜕的CMA培养基和添加西花蓟马虫尸粉的CMA培养基,分别测定经过不同培养基连续5代继代培养得到的球孢白僵菌对西花蓟马成虫的毒力,并测定产孢量。使用模型模拟分析球孢白僵菌菌株经过不同培养基继代培养后培养代数与产孢量的关系,并对不同培养基培养得到的不同培养代数的白僵菌菌株的产孢量与其对西花蓟马的致死中时（LT50）进行回归分析,研究毒力与产孢量的相关关系。【结果】经过室内毒力测定,处理5 d后,菌株DZDC-9、GZGY-5、WLMQ1-8、SZ-26对西花蓟马成虫的校正累积死亡率均高于90%,LT50均在3 d内,毒力显著高于其他菌株;比较高毒力菌株在两种产孢培养基上的产孢量,发现4株球孢白僵菌的产孢量存在显著差异,菌株DZDC-9的产孢量显著高于其他3株,4株菌株在CMA培养基中的产孢量均明显高于SDAY培养基。随着白僵菌菌株在CMA培养基上连续5代的继代培养,菌株对西花蓟马成虫的致病力呈现下降趋势,从第3代开始致病力显著降低,而添加蝉蜕的CMA培养基培养得到的不同培养代数的分生孢子对西花蓟马致病力则没有显著差异,添加西花蓟马虫尸粉的CMA培养基培养得到的不同代数的分生孢子对西花蓟马致病力有一定的增强趋势;通过模型可以发现单纯以CMA培养基继代培养白僵菌的产孢量随培养代数呈现指数下降,而在培养基中添加蝉蜕或西花蓟马虫尸粉白僵菌产孢量则随培养代数呈现指数上升,蝉蜕或西花蓟马虫尸粉的添加对产孢量有一定的增强作用。白僵菌菌株产孢量与毒力存在一定正相关关系,产孢量相对较高的菌株对西花蓟马成虫的致病力相对较高,致死中时短。【结论】筛选得到一株对西花蓟马高效的白僵菌菌株DZDC-9,产孢培养基中加入蝉蜕和西花蓟马虫尸可以维持菌株生长特性,延缓毒力退化趋势;同一菌株的产孢量可以作为菌株毒力评价的一个指标。

高产黄酮苷银杏悬浮培养细胞系选育和继代培养稳定性研究

Investigate the influence of culture media to growth and flavonol glycoside synthesis of calli introduced from seedling of \%Ginkgo biloba\%. 6 cell lines were selected from calli by hypoxia stress. Among these cell lines the best one TZ\|1 which growth index was 4.12 and the flavonol glycoside content was 1.25% in dried cell which was enhanced 257.1% compared with callus. The stability in subcultures was investigated: The average content of flavonol glycoside was 1.25% in dried cells and the growth index was 3.99 during 6 subcultures. Which variation coefficient was separately 0.065 and 0.048. The results show that hypoxia stress is a efficient method to select suspension cell line of higher productivity of flavonol glycoside.

曼地亚红豆杉愈伤组织诱导和继代培养中抑制褐化的研究

对曼地亚红豆杉茎段和叶片的愈伤组织诱导条件和愈伤组织继代培养条件进行了探讨,同时对愈伤组织继代培养中的褐化问题进行了分析.结果表明:具有较强分生能力的新生茎段和叶片能够得到很高的诱导率,与NAA相比,2,4 D在诱导中作用显著.含有3mg/L2,4 D+0 5mg/LNAA+0 2mg/L6 BA的MS培养基有利于愈伤组织的诱导.在继代培养中,2,4 D比NAA对愈伤组织生长的促进作用显著,6 BA对愈伤组织生长的促进作用极显著.在继代培养中发现在第20天就开始转移继代和提高愈伤组织与培养基接触面的氧气供给能够较好克服褐化.在含有5mg·L-12,4 D5+0 5mg·L-16 BA+1g·L-1AC的B5培养基上,愈伤组织细胞增殖倍数最大,达到4 7,褐化也得到部分控制.

甘蔗组培苗继代培养中内源激素与绿苗生根率关系研究

对甘蔗继代培养绿苗中的内源激素进行测定、分析 ,同时进行生根诱导。结果表明 :甘蔗组培苗在继代过程中 ,IAA ,CTK ,GA1+ 3 有积累效应 ,其中IAA的积累较慢 ,CTK ,GA1+ 3 积累在第 9代后较快 ,同时第 9代后生根率也明显下降 ,在第 10代出现不能诱导生根的矮化丛生苗。绿苗中IAA ,CTK ,GA1+ 3

芋芽继代培养中激素、水解乳蛋白、碳源的调节研究

在继代培养中，为提高芋组培苗的增殖效果，降低组培苗生产成本，获得健壮的芋头组培苗。实验从激素、水解乳蛋白、碳源三个方面研究了其对芋组培芽继代培养的调节作用。结果表明：BA4．0mg／L＋NAA0．1～0．2,mg／L的激素配比有利于芋芽的增殖，但当NAA的浓度为0．1mg／L时，可大大抑制多次继代后根的发生。不同浓度水解乳蛋白（LH）对芋芽的分化率无显著差异，但添加LH可提高芋芽的生长速度，当LH为500mg／L时，芋苗最高。蔗糖、食用白糖、葡萄糖对芋芽的增殖和生根效果较好，麦芽糖稍差；从降低生产成本度考虑，可选用食用白糖作为芋芽继代培养的碳源。

杜仲愈伤组织继代培养及抑制褐化的研究

对杜仲愈伤组织的继代培养及其褐化现象的抑制进行了研究,结果表明:B5培养基+0.5mg/LNAA+1.0mg/L6-BA是杜仲愈伤组织继代培养和褐化控制的适合培养基;培养基中添加0.5%活性炭(AC)能有效的抑制杜仲愈伤组织的褐化;与中强光和红光相比,蓝光和黑暗能减轻组织的褐化。

棉胚珠继代培养纤维体系的建立(英文)

针对传统的棉胚珠培养方法因纤维在发育中途夭亡而不能用于研究次生壁增厚和强度形成的机理 ,本文建立了棉胚珠继代培养纤维体系 ,即根据花铃的形态特征选取 类发育状态的胚珠作外植体 ,以 14d为周期连续 3次继代 ,在继代培养基中添加 5 g· L-1活性碳 ,并根据纤维发育不同阶段的特点调整植物生长物质的种类和浓度。结果使纤维重现了植株条件下的发育历程 ,其比强度、长度和细胞壁厚度等品质指标达到或接近植株条件下发育的纤维 。

棕榈藤继代培养增殖和成苗特性的研究

本文研究了黄藤、短叶省藤、单叶省藤及其同一藤种不同家系之间在组织继代培养过程中增殖和成苗特性及其变化规律；观察比较繁殖体的各继代增殖速度及增殖芽苗的形态特征和生长情况；揭示继代繁殖３个发育过程，即驯化适应期、适应繁殖期和衰老期，讨论了繁殖体在一代培养过程中愈伤恢复、迅速增殖和增殖衰老的阶段性变化特性。确定３个藤种继代培养合适的代数和培养时间。

烟草愈伤组织继代培养期间呼吸途径与活性氧水平动态变化

继代培养期间的烟草愈伤组织总呼吸速率分别在第 11天和第 19天出现两次跃升 ,同时抗氰呼吸的发生与运行逐渐加强 ,在两呼吸高峰之间达到极大值 ,随后则逐渐下降 ,但愈伤组织的电子传递仍以细胞色素途径为主 .通过对愈伤组织衰老过程中活性氧代谢变化分析 ,发现抗氰呼吸发生与H2 O2 含量 ,其实际运行则与O-2· 含量呈平行关系 ,但交替途径容量的降低则与·OH含量显著上升紧密相关 ,用活性氧清除剂处理愈伤组织也得到上述相似的结果 .由此推测愈伤组织在衰老过程中产生的活性氧诱导抗氰呼吸参与烟草愈伤组织起始衰老 .

不同继代培养次数对苹果八棱海棠离体培养和遗传转化的影响

以苹果八棱海棠离体新梢和幼叶为外植体,研究不同继代次数对其离体繁殖、再生和遗传转化的影响。结果表明,随着继代培养次数的增加,继代10次和48次的八棱海棠离体增殖倍数、生根能力、不定芽的再生频率、每外植体再生芽数和GUS基因瞬时表达率均显著高于继代5次的;继代10次的增殖倍数和GUS阳性率明显多于继代48次的,其它指标相互间差异不显著;说明继代10次的芽苗较适合用于八棱海棠离体培养的外殖体材料,其幼叶较适于遗传转化研究。