黄芪多糖对继发性胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型TGF-β_1的影响

目的:观察黄芪多糖对大鼠胆管结扎肝纤维化模型TGF-β1的影响。方法:40只SD雄性大鼠采用随机分为假手术对照组(Sham,n=15)及胆汁淤积性肝纤维化模型对照组(M,n=20)及药物干预组(Y,n=20)。M及Y组采用胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)制备胆汁淤积性肝纤维化模型,Sham组仅作胆总管分离,不作胆总管结扎。Y组于术后1周开始经灌胃给予黄芪多糖,1日1次,共4周。所有大鼠均于术后第5周处死取材。统计分析实验过程大鼠死亡率及腹水发生率,观察实验大鼠肝功能、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量及肝组织学;采用Western blot及免疫组化观察实验大鼠肝组织TGF-β1蛋白表达。结果:与Sham组比较,M组大鼠肝功能显著异常,肝组织纤维增生程度、Hyp含量及TGF-β1蛋白表达量均显著增加(P<0.01);与M组比较,Y组大鼠死亡率、腹水发生率显著下降(P<0.05),肝功能显著改善(P<0.01),肝组织纤维增生程度、Hyp含量及及TGF-β1蛋白表达量显著下降(P<0.01)。结论:黄芪多糖可有效地抑制BDL大鼠肝纤维化模型肝组织TGF-β1表达,这可能也是黄芪汤组分干预胆汁淤积性肝纤维化的主要效应机制之一。

甘草酸二胺对继发性胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型肝细胞向肌成纤维细胞转分化的影响

目的:观察甘草酸二铵对继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成中肝细胞向肌成纤维细胞转分化(EMT)的影响。方法:75只SD雄性大鼠采用随机分为假手术对照组(Sham,n=15)及胆汁淤积性肝纤维化模型对照组(M,n=30)及药物干预组(Y,n=30)。M及Y组采用胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)制备胆汁淤积性肝纤维化模型,Sham组仅作胆总管分离,不作胆总管结扎。Y组于术后1周开始经尾静脉予甘草酸二铵,1日1次,共4周。所有大鼠均于术后第5周处死取材。统计分析实验过程大鼠死亡率及腹水发生率,观察实验大鼠肝功能、观测肝脏组织学及羟脯氨酸含量(Hyp);激光共聚焦显微镜观察肝组织肝细胞特异性抗原(Hep par)及上皮α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)共定位,Western blot检测Hep par的、α-SMA蛋白表达。结果:与Sham组比较,M组大鼠肝功能显著异常,肝组织纤维增生程度、Hyp含量及α-SMA蛋白表达量均显著增加(P<0.01),而HepPar蛋白表达显著减少(P<0.01),并出现大量Hep par/α-SMA共染阳性细胞;与M组比较,Y组大鼠死亡率、腹水发生率显著下降(P<0.01),肝功能显著改善(P<0.01),肝组织纤维增生程度、Hyp含量及α-SMA蛋白表达量显著下降(P<0.01),HepPar蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:甘草酸二铵可有效地抑制BDL大鼠肝纤维化模型肝组织肝细胞向肌成纤维细胞转分化,这可能也是甘草酸二铵干预胆汁淤积性肝纤维化的主要效应机制之一。

肝细胞向胆管上皮细胞转分化在继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成中的作用及黄芪汤组分的干预效应

目的探讨肝细胞向胆管上皮细胞转分化在继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成中的作用及黄芪汤组分抑制肝纤维化的效应机制。方法 75只SD雄性大鼠,采用胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)制备继发性胆汁淤积性肝纤维化模型,假手术组(Sham)仅作胆总管分离,不作胆总管结扎。大鼠BDL术后1周随机分为对照组(M)与干预组(Y组,经灌胃给予黄芪汤组分4周),Sham组于术后1周末随机抽取5只大鼠处死取材,M组分别于术后1、2、3、4周末随机抽取5只大鼠做动态观察,余下各组大鼠均于术后第5周末处死取材。观测肝脏组织学及羟脯氨酸(Hyp)含量;激光共聚焦显微镜观察肝组织胆管上皮细胞标志物角蛋白-7(CK7)与肝细胞特异性抗原(HepPar)共定位,Western blot检测CK7、HepPar的蛋白表达,IPP软件分析肝组织天狼猩红胶原染色。结果随着造模时间推移,M组大鼠肝组织肝细胞Hep Par阳性细胞逐渐减少(Sham>M1周>M2周>M3周>M4周>M5周),胆管上皮细胞(CK7阳性细胞)及纤维化程度、Hyp含量、CK7蛋白表达均逐渐增加(Sham<M1周<M2周<M3周<M4周<M5周),CK7/Hep Par共定位细胞于术后1周即见增加,术后3周达到峰值,然后渐趋减少,肝组织Hep par蛋白表达量与CK7蛋白表达量呈显著负相关,Hep Par阳性细胞表达量与CK7阳性细胞表达量、胶原沉积程度均呈显著负相关,而CK7阳性细胞表达量与胶原沉积程度呈显著正相关;与M组比较,Y组大鼠死亡率、CK7阳性细胞、纤维化程度、肝组织Hyp含量、CK7蛋白表达量均显著下降(P<0.01),Hep Par阳性细胞及Hep Par蛋白表达含量显著增加。结论肝细胞向胆管上皮细胞转分化可能是继发性胆汁淤积性大鼠肝纤维化形成过程中的关键病理环节,抑制肝细胞向胆管上皮细胞转分化可能是黄芪汤组分有效干预继发性胆汁淤积性肝纤维化的主要效应机制之一。

不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠尿激酶型纤溶酶原激活剂的影响

目的观察补益肝肾、活血化瘀方二至丸、失笑散及其合方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的影响。方法采用胆管结扎复制胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型。造模大鼠于术后1周随机分为模型组、优思弗组、二至丸组、失笑散组及合方组;各药物干预组分别给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,至4周末处死全部动物取材。观察各组大鼠一般情况、肝功能(ALT、AST、ALP、TBil)、肝组织病理、uPA蛋白表达(Westernblot法)。结果与假手术组比较,模型组大鼠ALT、AST、ALP、TBil、纤维化程度均显著升高。与模型组比较,3个复方均能降低大鼠血清ALP、ALT、AST水平(P<0.01),失笑散及合方能降低TBil(P<0.01),合方改善ALP、ALT优于两个单方。3个复方均能不同程度地减轻模型大鼠肝纤维化程度(P<0.01),合方优于两个单方。优思弗能降低ALT、AST水平,但对肝脏纤维化无明显改善作用。与模型组比较,3个复方组uPA蛋白表达显著增加(P<0.01),其中合方组最高,失笑散组次之,再次为二至丸组,三者之间比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论二至丸、失笑散及其合方均可不同程度地干预胆汁淤积性肝纤维化形成,其机制可能与调控uPA蛋白表达有关。

二至丸与失笑散对胆汁淤积性肝纤维化大鼠uPA的调控

目的研究不同治则中药复方二至丸与失笑散对胆汁淤积性肝纤维化大鼠uPA/PAI-1纤溶途经的调控作用。方法SD雄性大鼠60只随机分为假手术组和造模组,造模组于1周后随机分为模型对照组、二至丸组、失笑散组及合方组。各治疗组分别给予相应药物灌胃,模型对照组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,4周末处死大鼠。观察内容包括一般情况、肝功能、肝组织病理、Western印迹法检测uPA蛋白表达、RT-PCR法检测肝组织PAI-1的表达。结果与模型对照组比较,3个中药复方均能降低胆汁淤积性肝纤维化大鼠血清ALP,ALT,AST水平(P<0.01),失笑散及合方能降低TBil(P<0.01);合方改善ALP,ALT优于两个单方。3个复方均能不同程度地减轻模型大鼠肝纤维化程度(P<0.01),合方优于两个单方。3个复方均能显著降低胆汁淤积性肝纤维化大鼠PAI-1mRNA表达(P<0.01),提高uPA的表达(P<0.05,P<0.01)。合方对上述环节的调控优于两个单方。结论不同治则中药复方均能改善胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能,减轻纤维化程度,合方作用优于两个单方,其机制可能与通过调控uPA/PAI纤溶途径有关。

不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠uPA纤溶途径的调控

目的:研究不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠uPA-纤溶酶-MMP级联反应纤溶途径的调控作用。方法:SD雄性大鼠60只随机分为假手术组和造模组,造模组1周后随机分为模型组、二至丸组、失笑散组及合方组。各治疗组分别给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,4周末处死大鼠。观察一般情况、肝功能(ALT、AST、ALP、TB il)、肝组织病理、W estern印迹法检测肝组织uPA蛋白表达、ELISA法检测肝组织MMP-2、MMP-9的表达。结果:与模型组比较,3个复方均能降低胆汁淤积性肝纤维化大鼠血清ALP、ALT、AST水平(P<0.01),失笑散及合方能降低TB il(P<0.01);合方改善ALP、ALT优于两个复方。3个复方均能不同程度地减轻模型大鼠肝纤维化程度(P<0.01),合方优于两个复方。3个复方均能显著提高胆汁淤积性肝纤维化大鼠uPA、MMP-2、MMP-9的表达(P<0.01),合方对上述环节的调控优于两个复方。结论:不同治则中药复方均能改善胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能,减轻纤维化程度,合方作用优于两个复方,其机制可能与通过上调uPA、MMP-2、MMP-9,从而调控uPA-纤溶酶-MMP级联反应纤溶途径有关。

内质网应激caspase-12通路在大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型中的作用研究

内质网应激（ERS）是继死亡受体活化和线粒体损伤之后第3条介导细胞凋亡的信号转导通路。既往研究[1,2]表明多种肝脏疾病的发生与内质网特有的caspase-12介导的细胞凋亡有关。但caspase-12介导的细胞凋亡是否存在于胆汁淤积性肝纤维化进展中,其作用如何尚未有文献报道。

PAI-1在大鼠胆汁淤积性肝纤维化形成中的动态变化

目的:探讨纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI- 1)mRNA在胆汁淤积性肝纤维形成中的动态变化及其作用.方法:应用胆管结扎法复制胆汁淤积性肝纤维化动物模型,分为假手术组,模型组1wk、2wk、3wk、4wk,观察模型大鼠肝组织病理、纤维化程度、RT-PCR检测PAI-1mRNA的水平、ELISA法检测MMP-2和MMP-9含量的动态变化.结果:随胆管阻塞时间延长,胆管阻塞性肝纤维化大鼠纤维化程度逐渐增加,模型组1wk、2wk、3wk、4wk组PAI-1mRNA表达与假手术组相比,逐渐增强,有显著性差异(1.53±0.01,1.84±0.03,2.06±0.04,3.62±0.04 vs 0.72±0.02,P<0.01),而MMP-2和MMP-9表达先升高后下降.结论:PAI-1mRNA表达存在动态变化,其表达升高与胆汁淤积性肝纤维化形成和发展有关.

不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠PAI-1影响的研究

目的:观察补益肝肾、活血化瘀方剂二至丸、失笑散及其组合对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织PAI-1mRNA的影响。方法:采用胆管结扎复制胆汁淤积性肝纤维化模型。术后1周,造模组随机分模型组、优思弗、二至丸、失笑散及合方组;各药物干预组分别给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,至4周末处死全部动物取材。观察内容包括一般情况、肝功能(ALT、AST、ALP、TBil)、肝组织病理、PAI-1mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠ALT、AST、ALP、TBil、纤维化程度均显著升高;与模型组比较,3个复方均能降低胆汁淤积性肝纤维化大鼠血清ALP、ALT、AST水平(P<0.01),失笑散及合方能降低TBil(P<0.01);合方改善ALP、ALT优于两个单方。3个复方均能不同程度地减轻模型大鼠肝纤维化程度(P<0.01),合方优于两个单方。优思弗能降低ALT、AST水平,但对肝脏纤维化无明显改善作用。与模型组比较,失笑散组、二至丸组及合方组PAI-1mRNA表达显著降低(P<0.01),3个中药复方组之间比较,合方组最低,二至丸组次之,再次为失笑散组。结论:补益肝肾和活血化瘀中药复方二至丸、失笑散及其组合均不同程度地干预胆汁淤积性肝纤维化形成的作用,合方作用优于两个单方,其机制可能与调控PAI-1mRNA表达有关;不同治则的中药复方对PAI-1mRNA调控的强度不同。

尿激酶型纤溶酶原激活剂在大鼠胆汁淤积性肝纤维化形成过程中的动态变化及其意义

目的:研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)在胆汁淤积性肝纤维化形成过程中的变化及其作用。方法:应用胆管结扎法复制胆汁淤积性肝纤维化动物模型,分为假手术组,模型1周组、2周组、3周组、4周组,观察模型大鼠肝组织病理、纤维化程度、Western印迹法检测肝组织中uPA蛋白含量的动态变化。结果:随胆管阻塞时间延长,胆管阻塞性大鼠肝纤维化程度逐渐增加,uPA蛋白含量逐渐显著升高(1周121.39±8.35,2周199.83±13.45,3周361.56±21.28,4周198.49±8.04 vs 32.38±5.35,P<0.01),3周时达到峰值,随后显著下降。结论:uPA在胆汁淤积性肝纤维化形成过程中存在动态变化和差异表达,与胆汁淤积性肝纤维化形成有关。

荣肝化瘀解毒汤干预大鼠胆汁淤积性肝纤维化的实验研究

目的:研究养肝化瘀利湿法有效干预大鼠胆汁淤积性肝纤维化的作用机制。方法:胆管结扎的方法制备大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,造模一周后随机分为模型组和药物干预组,药物干预经口灌胃分别给予荣肝化瘀解毒汤和小柴胡汤,模型组给予等量生理盐水,用药4周后杀鼠取材,观测内容包括肝功能、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,组织病理学、免疫组织化学观测IV型胶原(ColIV)、层粘蛋白(LM)和增殖性细胞核抗原(PCNA)。结果:(1)荣肝化瘀解毒汤显著改善胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能(P<0·05),降低肝组织Hyp含量(P<0·05);肝组织纤维化程度计分评定结果显示,荣肝化瘀解毒汤组肝组织纤维化程度显著减轻(P<0·05),而小柴胡汤组无显著性变化(P>0·05)。(2)模型组大鼠BECs增殖非常显著,肝实质细胞比例显著减少,其肝组织PCNA阳性BECs数显著增多(P<0·001),荣肝化瘀解毒汤组大鼠肝组织PCNA阳性BECs数显著减少(P<0·05),小柴胡汤组无显著性变化(P>0·05)。(3)模型组大鼠增生胆管周围的LM表达显著增加,肝窦壁ColⅣ表达未见明显变化,但强烈表达于增殖的BECs周围的基底膜上;图象分析显示荣肝化瘀解毒汤显著减少LM和ColIV的阳性表达(P<0·05)。结论:胆管上皮细胞增殖在胆管结扎大鼠胆汁淤积性肝纤维化形成中起重要作用,荣肝化瘀解毒汤抑制胆管上皮细胞增殖,抑制增殖的胆管上皮细胞基底膜上细胞外基质的沉积,是其有效干预胆汁淤积性肝纤维化的重要机制之一。

肝祖细胞移植减轻小鼠胆汁淤积性肝纤维化及其肝损伤程度

目的 研究肝祖细胞(hepatic progenitor cell, HPC)移植对胆汁淤积性肝纤维化及其肝损伤的治疗效果。方法 雄性野生型C57BL/6小鼠随机分为正常饮食组(对照组),3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydrocollidine(DDC)饮食组及HPC移植组三组,每组各15只。DDC饮食喂养小鼠6周以诱导胆汁淤积性肝损伤及其肝纤维化模型,HE染色观察肝脏损伤程度,CK19免疫组化观察胆管反应,两部灌注法分离HPC,AFP、ALB及CK19免疫荧光染色鉴定HPC,Masson染色观察肝纤维化程度,α-SMA免疫组化观察星状细胞活性,ELISA检测小鼠血清IL-6、ALT、AST及TBIL浓度。结果 与对照组比较,DDC组胆管反应明显增加(P<0.05)。HPC高表达AFP和CK19,不表达ALB。与对照组和DDC组比较,移植HPC组胆管反应较DDC组减弱,但比对照组增强(P<0.05);移植HPC组肝纤维化及星状细胞活性比DDC组明显减弱,但高于对照组(P<0.05);与Control组比较,DDC组及HPC移植组IL-6、ALT、AST及TBIL水平显著升高(P<0.05);与DDC组比较,HPC移植组肝细胞损伤标志物(IL-6、ALT、AST及TBIL)水平显著下降(P<0.05)。结论 HPC移植治疗可以显著减轻小鼠胆汁淤积性肝病模型的肝脏损伤及其纤维化程度。

长链非编码RNA H19在胆道闭锁中促进胆管细胞增殖和胆汁淤积性肝纤维化

【据《Hepatology》2019年5月报道】题:长链非编码RNAH19在胆道闭锁中促进胆管细胞增殖和胆汁淤积性肝纤维化(作者XiaoY等)胆道闭锁(BA)是一种以胆汁淤积和严重肝纤维化为特征的新生儿肝病。尽管外科手术治疗的发展取得了进步,但由于BA缺乏早期诊断标志物和肝纤维化的干预,最终导致患儿在早期死于终末期肝病。既往报道证实了可以通过敲除鞘氨醇1-磷酸受体2(S1PR2)来保护小鼠免受胆管结扎(BDL)诱发的胆管细胞增殖和肝纤维化病变。

不同配比黄芪汤干预大鼠胆汁淤积性肝硬化作用观察

目的：观察不同配比的黄芪汤（3：1、6：1、9：1）干预大鼠胆汁淤积性肝硬化的药理作用。方法：结扎大鼠胆总管制备大鼠胆汁淤积性肝硬化模型；结扎1周后，将模型大鼠随机分为模型组和药物干预组，药物干预分别给予不同配比的黄芪汤经口灌胃，模型组给予等量生理盐水；用药4周后杀鼠取材。观测内容包括大鼠一般状况、组织病理、肝功能（血清ALT、AST、ALP、GGT活性及TBil、TP、Alb的含量）、肝组织羟脯氨酸（HyP）含量。结果：造模5周时大鼠胆汁淤积性肝硬化完全形成，与假手术组大鼠比较，模型组大鼠血清GGT、ALP活性及血清TBil含量、肝组织Hyp含量显著升高（P＜0．05-0．01V8sham），血清TP、Alb含量显著下降（P＜0．05—0．01 vs sham）。与同期模型对照组比较，黄芪汤（6：1、3：1）干预治疗组肝纤维化程度显著减轻，血清AlJP、GGT活性、TBil含量及肝组织Hyp含量显著降低（P＜0．05—0．01 vs 5W model）。结论：黄芪汤（6：1、3：1）有不同程度的干预大鼠胆汁淤积性肝硬化形成的作用。

原发性胆汁性肝硬化有无黄疸的临床病理比较

原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）[1]是一类由自身免疫机制介导的以肝内小胆管进行性非化脓性破坏性炎症为特征的慢性胆汁淤积性疾病,进一步发展可导致肝纤维化和肝硬化。临床发现,部分患者黄疸的出现与病 程的进展和肝硬化的严重程度似乎无相关性。为探索PBC患者黄疸出现情况与临床病理之间的关系．我们对1998年3月至2004年12月确诊为PBC的31例患者，

原发性胆汁性肝硬化发病机制

原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）是以血清中高度特异性抗线粒体抗体（AMAs）的存在以及渐进性肝内胆管的破坏为特征,导致慢性胆汁淤积,肝门炎症,肝纤维化最终出现肝硬化甚至肝衰竭的自身免疫性肝脏疾病。早期征状主要表现为肝内小胆管的炎症和破坏,导致胆汁排泄障碍，出现淤胆性生物化学和临床改变。

贝特类药物治疗原发性胆汁性肝硬化的机制和疗效

原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）,又名原发性胆汁性胆管炎（primary biliary cholangitis,PBC）,是一种慢性肝内胆汁淤积性疾病[1]。该病的发生存在明显的性别差异,多发于中老年女性（40岁以上者发病率约1‰）,其以进展性肝脏小叶间胆管的炎症性破坏,进而引起肝纤维化、肝硬化乃至肝衰竭为特点,过程可能迁延数十年。