川续断总皂苷调节miR-19a对大鼠骨关节炎软骨细胞SOX9/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨川续断总皂苷调节miR-19a对大鼠骨关节炎软骨细胞SOX9/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:120只SD大鼠随机分成6组:正常对照组、模型组、地塞米松组(30 mg·kg-1)、川续断总皂苷低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg-1),每组20只。除正常对照组外,其余各组制备大鼠膝关节骨性关节炎模型,地塞米松组、川续断总皂苷各剂量组于造模成功第1天开始给予相应剂量药物灌胃(灌胃体积1.0 ml/100g),持续给药4周,正常对照组和模型组给予等体积生理盐水。给药结束后,进行大鼠关节炎症积分评分,测定机械痛阈(PWT)及热刺激潜伏期(PWTL),实时荧光定量PCR(RT-PCR)法及Western-Blot法测定膝关节软骨细胞miR-19a基因及SOX9、NF-κB基因和蛋白水平。结果:与正常对照组比较,模型组PWTL、PWT评分、miR-19a mRNA表达水平显著降低,关节炎症积分、SOX9、NF-κB mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、川续断总皂苷各剂量组PWTL、PWT评分、miR-19a mRNA表达水平显著升高,关节炎症积分、SOX9、NF-κB mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且川续断总皂苷组给药剂量与各指标变化呈正相关(P<0.05);川续断总皂苷组低、中剂量组与地塞米松组比较,各指标差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组关节软骨结构完整,未见炎症细胞浸润;模型组软骨层明显增厚,软骨细胞疏松紊乱,大量炎症细胞浸润及软骨成纤维细胞增生;地塞米松组及川续断总皂苷高剂量组关节软骨结构较为完整,纤维组织增生、炎症细胞浸润及软骨细胞坏死均减少;川续断总皂苷低、中剂量组具有少量炎症细胞浸润,但软骨结构疏松紊乱,剂量依赖效应明显。结论:川续断总皂苷能明显减轻骨关节炎软骨损伤,减轻骨关节炎软骨炎症反应;其机制与川续断总皂苷可上调miR-19a的表达进而激活SOX9 mRNA和蛋白表达,抑制NF-κB mRNA和蛋白表达有关。

续断总皂苷磷脂复合物制备工艺及大鼠在体肠吸收研究

目的:续断总皂苷生物利用度低,本实验拟通过制备其磷脂复合物,以便提高其在体吸收度。方法:采用单因素考察与正交实验相结合设计,以复合率为指标,筛选了总皂苷磷脂复合物最佳制备工艺;采用大鼠在体肠灌流法,比较续断总皂苷及其磷脂复合物的在体肠吸收情况。结果:续断总皂苷磷脂复合物比总皂苷的吸收量、吸收率有很大改善。结论:续断总皂苷磷脂复合物可以有效地提高续断总皂苷的吸收。

续断总皂苷对斑马鱼空间认知能力的影响研究

目的:研究续断总皂苷对斑马鱼空间认知能力的影响及可能的途径和机理。方法:通过斑马鱼暴露给药续断总皂苷120小时(5天),考察药物对斑马鱼认知行为和Na+,K+-ATP酶。考察斑马鱼学习和认知行为实验采用穿梭箱法;考察Na+,K+-ATP酶活力,采用Bornting法。结果:在体实验结果表明,高剂量的续断总皂苷可以显著提高斑马鱼的认知和记忆能力和Na+,K+-ATP酶的活力。结论:暴露法给予续断总皂苷,可以显著性提高斑马鱼的认知和学习能力,也可以显著性提高Na+,K+-ATP酶的活力。其作用机制可能是通过提高Na+,K+-ATP酶的活力,加速ATP的分解,提高脑部能量供给有关。

五鹤续断总皂苷对AD大鼠学习记忆及海马Ach代谢的影响

目的:研究五鹤续断总皂苷对AD大鼠学习记忆能力的影响及其作用机制。方法:将40只大鼠随机分为空白对照组、模型组、五鹤续断组和阳性对照组(n=10),观察各组大鼠一般情况,以方形水迷宫评价大鼠的学习记忆能力,采用双抗体夹心法测定大鼠海马区乙酰胆碱酯酶(Ach E)和胆碱乙酰转移酶(Ch AT)的活性变化。结果:治疗过程中,模型组大鼠一般情况无明显变化,五鹤续断组和阳性对照组大鼠一般情况逐步改善,活动能力逐渐增强。与空白对照组比,模型组不同时间的游泳时间均明显延长,错误次数显著增多,海马区Ach E活性明显增强,Ch AT活性显著降低(P<0.01);与模型组比,五鹤续断组和阳性对照组大鼠不同时间的游泳时间明显缩短,错误次数显著减少,海马区Ach E活性明显降低,Ch AT活性显著增强(P<0.01);与阳性对照组比,五鹤续断组不同时间的游泳时间、错误次数和大鼠海马区Ach E和Ch AT活性无显著性差异。结论:五鹤续断总皂苷能够改善AD大鼠学习记忆能力,其作用机制可能与其调节海马区Ach代谢有关。

续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠软骨组织中PI3K/AKT/mTOR信号通路影响的实验研究

目的观察续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠的软骨保护作用。通过检测软骨组织中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达水平,探讨续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠软骨细胞自噬调控机制。方法 SPF级成年SD大鼠28只,采用随机数字法,将大鼠随机分为4组:假手术组(7只)、模型对照组(7只)、续断总皂苷组(7只)、阳性对照组(7只)。采用前交叉韧带及内侧副韧带离断术,对模型对照组、续断总皂苷组、阳性药物对照组大鼠进行KOA模型复制,模型复制成功后,分别给予相应干预因素进行干预,连续2周。末次给药后,观察各组大鼠一般状态。取术侧膝关节软骨组织,采用HE染色方法观察膝关节软骨病理变化;采用western-blot法检测膝关节软骨组织中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR的表达。结果各组间比较,各组大鼠膝软骨组织中PI3K、AKT、mTOR表达水平均变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。与假手术组比较,模型对照组大鼠一般状态较差,关节软骨病理变化较严重,镜下可见明显的炎性细胞浸润,软骨组织中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达水平显著升高(P<0.01),差异有统计学意义;与模型对照组比较,续断总皂苷组大鼠明显好转,软骨组织病理损伤减轻,仅个别大鼠软骨组织中偶见炎性细胞浸润,软骨组织中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达水平显著降低(P<0.01)差异有统计学意义。结论续断总皂苷对膝骨关节炎模型大鼠膝软骨保护作用的机制可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的过度活化,进而上调软骨细胞自噬水平而实现的。

川续断总皂苷通过调控Aβ相关途径改善Aβ诱导的大鼠学习记忆损伤

目的:探讨川续断总皂苷改善Aβ诱导的空间学习记忆损伤大鼠的分子机制。方法:使用Aβ脑内注射法诱导大鼠AD模型,随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐组、银杏叶提取物组及川续断总皂苷高、中、低剂量组。给药26 d后进行水迷宫测试,实验结束时用ELISA法检测海马组织中Aβ1-42和Aβ1-40含量,使用WB法检测海马组织中TACE、BACE、Presenilin 2、IDE、LRP-1蛋白表达。结果:治疗26 d后,水迷宫检测发现川续断总皂苷能有效改善Aβ导致的空间学习记忆能力损伤,进一步研究发现川续断总皂苷能有效调节Aβ生成、降解及转运相关的蛋白,从而调节脑内Aβ的含量。结论:川续断总皂苷可能通过调控Aβ的代谢,从而改善大鼠空间学习记忆能力。

川续断总皂苷对血管性痴呆大鼠的神经保护作用及对海马CA1区凋亡调控基因表达的影响

目的:探讨川续断总皂苷对血管性痴呆(VD)大鼠的神经保护作用及对海马CA1区凋亡调控基因表达的影响。方法:采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法建立大鼠VD模型。模型制备成功后第30天,川续断总皂苷低、高剂量组分别灌胃给予25 mg/kg、50 mg/kg的川续断总皂苷,尼麦角林组给予7 mg/kg的尼麦角林,假手术组和模型组给予等量生理盐水。连续给予4周后进行Morris水迷宫实验,对海马组织进行病理学检查,检测海马CA1区组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、聚ADP-核糖聚合酶(PARP)、B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)水平。结果:假手术组大鼠海马CA1区细胞多且排列紧密,层次清晰;模型组大鼠海马CA1区细胞数量减少,排列紊乱,少数神经细胞明显肿胀;川续断总皂苷低剂量组大鼠海马CA1区细胞数量较多,排列较密,少数神经细胞变性、萎缩;川续断总皂苷高剂量组和尼麦角林组大鼠海马CA1区组织形态学变化介于川续断总皂苷低剂量组和假手术组之间。与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期、海马CA1区组织中MDA、PARP、Bax、Caspase-3水平显著升高(P<0.05),穿越平台次数、海马CA1区组织中GSH、SOD、Bcl-2水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,川续断总皂苷低、高剂量组和尼麦角林组大鼠逃避潜伏期、海马CA1区组织中MDA、PARP、Bax、Caspase-3水平显著降低(P<0.05),穿越平台次数、海马CA1区组织中GSH、SOD、Bcl-2水平显著升高(P<0.05)。川续断总皂苷高剂量组和尼麦角林组各指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:川续断总皂苷能改善VD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与调控海马CA1区凋亡基因表达有关。

续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠软骨组织中Atg3、Atg4、Atg7表达影响的实验研究

目的观察续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠的干预作用,通过检测软骨组织中Atg3、Atg4、Atg7的表达,探讨续断总皂苷对膝骨关节炎大鼠的干预作用机制。方法 SPF级成年SD大鼠40只,采用随机数字法将大鼠随机分为两组,即假手术组(10只)和造模组(30只)。采用大鼠前交叉韧带切断方法对造模组大鼠进行膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型复制,模型评价后,将造模成功的大鼠再次随机均分为3组,分别为模型对照组、续断总皂苷组、阳性对照组。然后分别给予相应干预因素进行干预,连续2周。末次给药后,观察各组大鼠一般状态。取术侧膝关节软骨组织,采用HE染色方法观察膝关节软骨病理变化;采用western-blot法和免疫组织化学法检测关节软骨组织中Atg3、Atg4、Atg7的表达。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠一般状态较差,关节软骨组织病理改变严重,炎性细胞浸润严重,Atg3、Atg4、Atg7表达水平显著降低(P<0.01),差异有统计学意义;与模型对照组比较,续断总皂苷组大鼠一般状态明显好转,关节软骨组织病理变化减轻,偶见炎性细胞浸润,软骨组织中Atg3、Atg4、Atg7表达水平显著升高(P<0.01),差异有统计学意义。结论续断总皂苷对膝骨关节炎模型大鼠具有明显的保护作用,其抗炎、抗凋亡作用的机制可能是通过上调软骨组织中自噬相关蛋白表达水平,激活自噬而实现的。

续断总皂苷对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力的改善作用

目的:研究续断总皂苷对阿尔茨海默病小鼠学习记忆的改善作用及机理。方法:采用三氯化铝致小鼠阿尔茨海默病模型,给小鼠造模同时即给予药物治疗,水迷宫检测3组小鼠学习记忆能力,观察各组动物体重、脑重量,HE染色观察海马组织病理改变,免疫组化方法观察老年斑沉积。结果:模型组与正常组比较,小鼠学习、记忆能力明显降低,体重无明显减少,脑重量明显减轻,海马组织神经细胞数量明显减少,颗粒细胞空泡变性,胶质细胞增生,免疫组化结果显示较多老年斑沉积;续断总皂苷组与模型组比较,小鼠学习、记忆能力明显提高,脑重量明显增加,神经细胞增多,颗粒细胞变性减少,无明显胶质细胞增生,老年斑沉积减少。结论:续断总皂苷可提高小鼠的学习记忆能力,其机制可能与减少神经细胞死亡变性和减少老年斑沉积有关。

川续断总皂苷对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的研究川续断总皂苷对大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)mRNA表达的影响。方法不同浓度的川续断总皂苷作用于体外培养的大鼠成骨细胞不同时间,采用MTT法检测成骨细胞增殖功能,PNPP法检测成骨细胞中ALP活性,半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG/RANKL mRNA。结果 20、50μg/mL川续断总皂苷可显著促进成骨细胞的增殖(P<0.05或P<0.01);20、50μg/mL川续断总皂苷可显著促进成骨细胞的分化(P<0.05或P<0.01);10、20、50μg/mL川续断总皂苷可显著上调成骨细胞中OPG/RANKL mRNA的比值,抑制破骨细胞的分化(P<0.01)。结论川续断总皂苷对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、分化及破骨细胞的分化有显著影响。

续断皂苷类成分的体外抗氧化活性研究

采用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基、清除[2,2-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基和铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定方法评价续断总皂苷及其主要组成成分川续断皂苷Ⅵ的体外抗氧化活性.结果显示续断总皂苷的抗氧化活性显著优于川续断皂苷Ⅵ,DPPH自由基半数清除率IC50分别为0.9和3mg.mL-1,ABTS自由基的IC50分别是0.25和2mg.mL-1.FRAP法测得续断总皂苷铁离子的还原能力相当于88.67 mmolFeSO4,川续断皂苷Ⅵ相当于7.02mmol FeSO4.续断总皂苷和川续断皂苷Ⅵ具有一定的抗氧化能力,且呈明显的量效关系.

不同加工工艺对续断质量的影响

目的测定川续断皂苷Ⅵ和川续断总皂苷的含量,探讨不同产业化加工工艺对川续断质量的影响。方法采用高效液相色谱法和紫外分光光度法分别对不同片型和不同干燥温度加工的续断饮片中川续断皂苷Ⅵ和川续断总皂苷的含量进行测定。结果切4 mm的续断片,50℃烘干后,川续断皂苷Ⅵ及川续断总皂苷的含量均高于其他加工工艺所得饮片。结论为保证续断饮片的质量,确定了切制片型厚度和烘干温度等工艺参数。