HPLC-UV及ELSD法测定续断皂苷VI的比较研究

目的:比较两种检测方法优劣,为丰富续断药材质量控制方法提供参考。方法:采用HPLC-UV及ELSD串联检测技术同时检测续断皂苷VI。结果:紫外检测器基线易漂移且有溶剂峰,蒸发光散射检测器基线平稳,但出峰不多;对两种检测器均有响应的续断皂苷VI,其出峰时间基本一致,蒸发光散射检测器下所得色谱峰明显高于紫外检测器;紫外检测方式的重复性、线性关系及加样回收率略优于蒸发光散射检测,两者均符合含量测定要求,且两种检测方式测定的样品结果相当。结论:紫外检测器灵敏度及稳定性较好;蒸发光散射检测器适用范围更广,能消除流动相配比变化对基线产生的影响,可以很好的支持梯度洗脱;HPLC-UV,HPLC-ELSD及HPLC-UV/ELSD串联均可作为续断药材含量测定方法。

仙灵壮骨胶囊中川续断皂苷VI的含量测定

目的：建立仙灵壮骨胶囊中川续断皂苷VI的含量测定方法。方法：采用反向高效液相色谱法,采用D iamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-水（30∶70）;流速为1.0 L/m in;检测波长为212 nm。结果：川续断皂苷VI在3.09-30.9μg范围内呈良好线性关系,r=0.9998;平均回收率为100.31%,RSD为2.84%。结论：所建立的方法可准确、快速地测定仙灵壮骨胶囊中川续断皂苷VI的含量,可用于该制剂的质量控制。

HPLC法测定续断配方颗粒中川续断皂苷VI的含量

目的：建立续断配方颗粒中川续断皂苷VI的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法定量川续断皂苷VI，色谱柱：Diamonsil C18反相柱（5um×250mm×4．6mm），流动相：乙腈-水（30：70），柱温为35℃，流速：1．0mL／min，检测波长：212nm。结果：HPLC法测定结果显示，色谱峰形好，分离度高，阴性对照无干扰。川续断皂苷VI在0．9792～19．584ug（r=1）呈良好的线性关系；供试品在24h内稳定（RSD=1．04％）；该方法精密度高（RSD=0．07％），重复性良好（RSD=1．01％），平均加样回收率为100．55％（RSD=2．10％）。结论：所建立的方法适合作为续断配方颗粒的含量测定方法。

川续断皂苷VI对大鼠正畸牙周组织改建影响的研究

目的探究局部注射川续断皂苷VI(ASD)是否通过促进大鼠正畸牙移动过程中破骨细胞分化而影响牙周组织改建。方法选择40只6周龄雌性Wistar大鼠,随机分为4组(10只/组):A组:空白对照组(局部注射生理盐水),B组:ASD低浓度组(局部注射5 mg/kg ASD),C组ASD高浓度组(局部注射10 mg/kg ASD),D组:前列腺素E2组(局部注射适宜浓度PGE_2)。实验分别于第3、7、14、21及28天5个时间点处死2只大鼠,对大鼠上颌第一磨牙近中压力侧牙周组织进行TRAP染色以观察破骨细胞数及免疫组化以观察破骨细胞分化因子(ODF)表达情况。结果从第3天到第21天,4组上颌第一磨牙近中压力侧TRAP阳性细胞的数目及ODF的表达随加力时间不断增多,第28天时出现下降。从第7天开始,与A组相比,实验组破骨细胞数量和ODF表达均增加,B组比C组、D组减少且有统计学差异,C组与D组无统计学差异。结论局部注射ASD和适宜浓度的PGE_2可有效促进压力侧牙周组织破骨细胞的分化,加快牙周改建。局部注射10 mg/kg ASD与PGE_2效果基本相近,而稍低浓度ASD效果弱于PGE_2和稍高浓度ASD。

续断皂苷VI调控Wnt/β-Catenin通路对骨质疏松的影响机制

目的探讨续断皂苷VI调控Wnt/β-Catenin通路对骨质疏松的影响并分析其作用机制。方法构建SPF级Wistar大鼠骨质疏松症模型与健康大鼠共同饲养形成对照组,将50只雌性大鼠随机分为4组。依次设置为:续断皂苷VI治疗组,模型对照组,假手术组,空白对照组。使用不同双侧卵巢摘除手术法处理实验组大鼠。除空白对照组外,模型对照组与假手术组以及续断皂苷VI处理组的大鼠均制成骨质疏松症大鼠模型,将续断皂苷VI组的大鼠连续给药12周。使用X线骨密度仪骨密度(BMD,bone mineral density)测定法检测各组大鼠BMD,观察给药前后大鼠BMD变化情况;使用生物力学测定仪测定各组大鼠后肢股骨的最大载荷差异;使用RT-PCR实验和Western Blotting实验以检测不同组Wnt3a、β-catenin、LRP5、Runx2、SOST和Osx转录组与蛋白组表达各自发生的差异。结果续断皂苷VI治疗12周可显著提高骨质疏松症大鼠模型股骨的BMD,并提高椎体在最大负荷和弹性模量下的生物力学能力,降低了骨质疏松症在骨组织中造成的致病性。对于组织形态学方面的考察发现,续断皂苷VI治疗组在治疗持续12周后,小梁排列整齐,小梁稍变薄,股骨没有明显的轻微骨折。在进行续断皂苷VI治疗处理的情况下,经典Wnt/β-catenin信号通路中涉及的LRP5、β-catenin、Runx2和Osx的表达显著上调,而在该通路中SOST的表达下调(P<0.05)。结论续断皂苷VI可显著提高骨质疏松模型大鼠的骨密度,其保护机制与激活Wnt/β-catenin信号通路,上调骨质疏松大鼠骨中β-catenin、LRP5的mRNA表达有相关。

模式生物斑马鱼对川续断皂苷VI的代谢研究

首次采用模式生物斑马鱼研究续断中主要活性成分川续断皂苷VI的代谢,探索斑马鱼用于微量中药皂苷类成分代谢的可行性及合理性。采用高效液相色谱电喷雾质谱检测,Zorbax Extend C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,0.05%甲酸乙腈0.05%甲酸水梯度洗脱,正、负离子模式同时检测,根据准分子离子峰获得化合物分子量信息,通过与文献数据或对照品对照,鉴定川续断皂苷VI经斑马鱼暴露24 h后的药液及鱼体中的代谢产物。结果川续断皂苷VI经斑马鱼作用后,产生了脱去1分子、2分子及全部糖基的5种脱糖基代谢产物和1个羟基化产物,这与川续断皂苷VI在大鼠体内的代谢机制一致,提示斑马鱼对川续断皂苷VI的代谢具合理性,更具有化合物用量少,成本低、简单、高效的优势,特别是能体现在体代谢的综合结果,有望成为快速预测少量中药成分代谢、补充现有模型不足的全新的、模式生物代谢模型。

利用斑马鱼模型评价川续断皂苷Ⅴ和Ⅵ的抗骨质疏松活性

为探讨斑马鱼模型评价中药微量成分在体抗骨质疏松活性的适用性与合理性,以25μmol/L泼尼松龙诱导的斑马鱼幼鱼骨质疏松模型考察川续断皂苷V和川续断皂苷VI抗骨质疏松活性。采用茜素红对斑马鱼幼鱼骨骼染色,并以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果 25μmol/L泼尼松龙使斑马鱼骨量显著丢失,与模型组比较,川续断皂苷V和川续断皂苷VI及依替膦酸二钠阳性药均能阻止泼尼松龙诱导的斑马鱼骨量丢失,提示斑马鱼模型成功评价了微量川续断皂苷V和川续断皂苷VI的抗骨质疏松活性,具有在体化、微板化,简单、高效的特点。

贵州续断药材川续断皂苷Ⅵ含量的地理分布趋势分析

为了解引起贵州续断中川续断皂苷Ⅵ含量变化的内外因素,采用HPLC法测定样品中川续断皂苷Ⅵ含量,对居群内、居群间的含量与分布地海拔进行分析。结果表明:川续断皂苷Ⅵ含量与产地或种源地的海拔呈正相关,居群内和居群间川续断皂苷Ⅵ含量差异均较大,且该差异不随海拔的改变而改变。结论:海拔是影响川续断皂苷Ⅵ含量变化的主导生态因子,续断居群内和居群间丰富的遗传多样性是造成川续断皂苷Ⅵ含量差异大的根本原因,在任一居群或产地,都可能有含量较高的植株和含量较低的植株。

续断皂苷Ⅵ对小鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响

目的:探讨续断皂苷VI(ASA VI)对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用机制及对小鼠骨质疏松的防治作用。方法:采用MTT法、钙浓度检测及RT-q PCR方法评价ASA VI对BMSCs细胞活力、成骨分化及Wnt通路相关基因表达的作用;通过Micro-CT定量分析ASA VI对去卵巢(OVX)小鼠骨形态计量参数的影响。结果:适宜浓度下的ASA VI能提高BMSCs的细胞活力,促进细胞基质矿化,升高BMP-2、Runx2、β-catenin、OCN的基因表达,Wnt信号阻断剂(DKK-1)能降低这些成骨基因表达。ASA VI能增加OVX小鼠的股骨骨量,改善骨小梁微结构。结论:ASA VI促进BMSCs成骨分化,Wnt信号可参与了ASA VI诱导的成骨分化过程。

续断皂苷类成分的体外抗氧化活性研究

采用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基、清除[2,2-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基和铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定方法评价续断总皂苷及其主要组成成分川续断皂苷Ⅵ的体外抗氧化活性.结果显示续断总皂苷的抗氧化活性显著优于川续断皂苷Ⅵ,DPPH自由基半数清除率IC50分别为0.9和3mg.mL-1,ABTS自由基的IC50分别是0.25和2mg.mL-1.FRAP法测得续断总皂苷铁离子的还原能力相当于88.67 mmolFeSO4,川续断皂苷Ⅵ相当于7.02mmol FeSO4.续断总皂苷和川续断皂苷Ⅵ具有一定的抗氧化能力,且呈明显的量效关系.

HPLC法测定六味颈康胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量

目的:建立高效液相色谱法测定六味颈康胶囊中川续断皂苷VI含量的方法。方法:色谱柱为ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%盐酸水溶液(68∶32);流速为1.0 m L·min-1;柱温为30℃;检测波长206 nm;进样量为20μL。结果:川续断皂苷VI线性范围为0.0941~0.941 mg·m L-1(r=0.999 7),平均加样回收率为97.79%,RSD为0.75%(n=6)。结论:该方法简便、准确、灵敏度高,结果可靠,重复性好,可有效控制六味颈康胶囊的产品质量。

不同种植密度和施肥量对川续断生长及产量和品质的影响

人工栽培管理条件下,要达到高产优质的生产目标,合理密植和科学施肥是中草药种植的关键环节。本试验研究不同种植密度和施肥量对药用植物川续断农艺性状、产量性状和品质性状的影响。结果表明:降低种植密度可促进川续断根系生长,但不利于产量提高;施用肥料对川续断生长具有明显的促进作用,但过量施用复合肥对川续断增产不利;不同种植密度对川续断皂苷Ⅵ含量无显著影响,而有机肥配合适量复合肥可显著提高川续断皂苷Ⅵ含量。苗期促进茎叶生长,成熟期促进根茎发育,保证产量和有效成分含量,最优种植行株距25 cm×30 cm,每公顷种植川续断植株390 000株;最佳经济施肥量为有机肥2 130 kg/hm^2和复合肥660 kg/hm^2。本研究为川续断合理种植管理及高产优质提供了科学理论依据。

云南省川续断种质资源的初步研究

种质资源的好坏对药材的质量与产量具有决定性作用,本研究旨在明确川续断在云南省的分布情况,筛选优质的川续断种源。本文对59份不同种质资源的生态环境进行调查,并测定主要农艺性状,采用HPLC色谱法和外标法计算样品中川续断皂苷Ⅵ的百分含量,并测定其产量。试验结果表明:川续断在云南省内广泛分布,地上部株高与茎粗与产量显著相关;不同种质间的川续断皂苷Ⅵ的和产量差异显著。在兼顾产量的前提下以有效成分含量作为首选目标,明确57号(曲靖沾益县人工种植)为最优种源,3号(大理漾濞秀林野生)和10号(腾冲县人工种植)为高含量高产种质。在兼顾含量以产量作为首选目标时,以56号(曲靖市师宗县人工种植)为最优种源,属于高产量且高含量的优质种源;49号(普洱市野生)为超高产低含量种源。

续断煮散颗粒制备工艺研究

目的:建立续断煮散颗粒的制备工艺。方法:对续断煮散颗粒制备的影响因素——粉末粒度、成型加水量及干燥时间进行了系统研究,以出粉率、川续断皂苷VI溶出量、干膏收率等为考察指标对制备工艺进行评价。结果:确定了续断煮散颗粒的最佳制备工艺,即取续断中粉,按0.4mL/g均匀喷水,充分混匀,采用挤出法制备成型,于80℃烘箱中干燥60min,取出,整粒,即得。结论:该方法简便可行,质量稳定可控,剂量准确,操作简单,对煮散颗粒的制备工艺研究具有示范作用。

盐续断配方颗粒剂的薄层色谱研究

目的:建立盐续断饮片的薄层色谱鉴别方法,对其质量进行控制。方法:采用薄层色谱法鉴别川续断皂苷VI和生物碱类有效成分。结果:薄层色谱上均检出药特征斑点,且阴性对照溶液中无干扰。结论:本方法操作简单,重现性好,可作为盐续断的鉴别方法。

发汗与不发汗续断的比较研究

续断为川续断科植物川续断Dipsacus asperoides C.Y.Chenget T.M.Ai的干燥根,具有补肝肾、行血脉、续折伤的功用,临床上多用于腰膝酸软,风湿痹痛,崩漏,胎漏,跌打损伤等症[1]。近年来,市场上存在大部分没有发汗或未发汗完全的续断药材,其颜色和性状与发汗完全的续断药材有很大区别。药物理化性质是药物发挥临床作用的基础,

川续断皂苷Ⅵ对非酒精性脂肪肝小鼠的降脂作用研究

目的研究川续断皂苷Ⅵ对非酒精性脂肪肝的降脂作用。方法利用高脂饲料建立ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝模型,并给小鼠腹腔注射不同剂量(30,60,120 mg/kg)的川续断皂苷VI,连续4周后检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,同时观察其对小鼠体重、肝指数和肝组织病理学的影响。利用油酸(oleic acid,OA)诱导人肝癌HepG2细胞发生脂肪变性,通过荧光染料Bodipy 493/503染色检测川续断皂苷VI对细胞内脂滴沉积的影响。结果在ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝动物模型中,川续断皂苷Ⅵ高、中剂量组均能显著降低TC、TG、LDL-C水平,增加HDL-C水平。川续断皂苷Ⅵ高剂量组可明显降低ob/ob小鼠体重、肝指数,减轻肝组织中肝细胞的脂肪变性。此外,川续断皂苷Ⅵ对HeG-2细胞中脂滴形成也具有明显的抑制作用。结论川续断皂苷VI具有明显的降脂做用,可明显改善肝细胞脂肪变性,可能是一种潜在的治疗非酒精性脂肪肝的药物。

HPLC法测定仙灵骨葆胶囊中川续断皂苷Ⅵ、补骨脂素及异补骨脂素

目的采用多波长HPLC法建立仙灵骨葆胶囊中川续断皂苷VI、补骨脂素及异补骨脂素的定量测定方法。方法采用月旭Ultimate？XB-C18柱,流动相采用乙腈-水系统,梯度洗脱;柱温30℃;检测波长：川续断皂苷Ⅵ为212 nm,补骨脂素、异补骨脂素为246 nm。结果 3种成分均能达到基线分离,川续断皂苷VI的进样量在144.1-5 764.0 ng（r=0.999 6）、补骨脂素在5.4-215.2 ng（r=0.998 0）、异补骨脂素在6.6-265.6 ng（r=0.998 5）与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为98.11%、97.86%、98.22%,RSD均小于2.0%。结论建立的方法操作简便、分离良好、数据准确、灵敏度高、工作效率好,可用于仙灵骨葆胶囊的多指标成分定量测定。

热痹痛合剂HPLC指纹图谱的建立和芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、川续断皂苷Ⅵ的测定

目的建立热痹痛合剂的HPLC指纹图谱和热痹痛合剂中芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、川续断皂苷VI的HPLC测定方法。方法指纹图谱分析采用Agilent 1260 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈–0.2%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长为212 nm;体积流量为1 mL/min;柱温30℃;进样量10μL。对指纹图谱进行相似度评价,并运用聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘法–判别分析分析热痹痛合剂样品图谱。采用HPLC法测定芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、川续断皂苷VI,采用Agilent 1260 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈–0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长230 nm(芍药苷)、280 nm(柚皮苷、黄芩苷)、260 nm(川续断皂苷VI);体积流量1 mL/min;柱温30℃;进样量为10μL。结果10批热痹痛合剂样品的指纹图谱中有26个共有峰,相似度均大于0.99,化学模式识别将10批样品分为2大类,OPLS-DA分析筛选出4个对制剂质量差异影响较大的化合物。含量测定中芍药苷、柚皮苷、黄芩苷、川续断皂苷VI分别在27.238~272.384、38.207~382.066、77.864~778.642、51.015~510.015μg/mL线性良好,平均回收率分别为95.34%、103.51%、103.51%、102.68%,RSD值分别0.65%、1.12%、0.86%、2.41%。结论所建立的方法准确、合理,重复性好,可用于热痹痛合剂的质量控制和评价。

跌打活血散HPLC-DAD-ELSD双通道指纹图谱分析

目的:建立跌打活血散双通道指纹图谱分析方法以评价该制剂质量。方法:以C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0 m L·min-1;蒸发光散射检测器漂移管温度:115℃;氮气流速:2.7 L·min-1;进样量:20μL,采用HPLC-DADELSD联用法建立UV 254 nm与ELSD双通道指纹图谱,对7家生产企业的14批跌打活血散进行相似度评价。结果:在上述色谱条件下,相似度评价结果表明不同企业产品间存在一定差异,经对照品比对确认了指纹图谱中14个色谱峰(儿茶素、表儿茶素、羟基红花黄色素A、阿魏酸、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1/Re、川续断皂苷VI、血竭素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、11-羰基-β-乙酰乳香酸)。结论:建立的跌打活血散HPLC-DAD-ELSD双通道指纹图谱分析方法简便、可靠,可更为全面有效地控制该产品质量。