UPLC-MS/MS法测定腰息痛胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量

目的建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定腰息痛胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量。方法液相条件为Waters ACQUITY UPLC®BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(梯度洗脱),流速为0.3 mL/min,柱温35℃,进样量5μL;质谱条件为电喷雾离子源(ESI)、正离子扫描模式,以多反应监测模式(MRM)进行数据采集,川续断皂苷Ⅵ的定量离子对为m/z 946.4→455.3。结果川续断皂苷Ⅵ在0.0787~3.9327μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9987),精密度、重复性、稳定性的RSD分别为2.5%、4.1%、5.3%,平均加标回收率为95.9%。16批样品中川续断皂苷Ⅵ的含量范围为18.07~659.78μg/g。结论所建立的方法能对腰息痛胶囊中川续断皂苷Ⅵ的含量进行快速测定,有助于提升该制剂的质量。

电喷雾检测器高效液相色谱法测定复方北豆根氨酚那敏片中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙

建立电喷雾检测器高效液相色谱法测定复方北豆根氨酚那敏片中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙。选用Waters XBridge C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,以甲醇为流动相A,0.05%三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱,检测器温度为35℃。灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的质量浓度分别在2.33~291.57μg/mL、2.42~302.40μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数分别为0.9996、0.9992,检出限分别为1.17、1.21μg/mL,定量限分别为2.33、2.42μg/mL。测定结果的相对标准偏差分别为2.54%和0.66%(n=6),样品加标平均回收率分别为104.8%和101.5%。该方法简单快捷,可为控制制剂中金银花投料的规范性提供技术支持。

川续断皂苷Ⅵ调控Notch1信号通路对大鼠正畸牙移动及骨改建的作用

目的探讨川续断皂苷Ⅵ在大鼠正畸牙移动、牙槽骨改建以及Notch1信号通路中的作用。方法40只大鼠建立正畸牙移动模型,随机分为模型组、川续断皂苷Ⅵ组、抑制剂组和抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组,每组10只,另设对照组。川续断皂苷Ⅵ组大鼠在双侧上颌第一磨牙近中牙龈黏膜下注射川续断皂苷Ⅵ10 mg/kg,抑制剂组大鼠在同样位置注射γ-外分泌酶抑制剂(DAPT)溶液0.6 mL/kg,抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组大鼠在同样位置注射DAPT溶液0.6 mL/kg,1 h后再注射川续断皂苷Ⅵ10 mg/kg,1次/2 d,共注射7次。测量各组大鼠第一磨牙移动距离,HE染色观察牙周组织病理学改变,TRAP染色检测破骨细胞数,RT-PCR法和蛋白印迹法检测牙周组织中Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch1、Jagged1 mRNA和蛋白水平。结果模型组和抑制剂组大鼠牙周膜纤维排列紊乱,宽度增加,骨吸收陷窝少,抑制剂组表现的更明显;川续断皂苷Ⅵ组和抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组牙周膜纤维排列较规则,增宽不明显,骨吸收陷窝增多,川续断皂苷Ⅵ组大鼠以上各变化更显著;与模型组比较,川续断皂苷Ⅵ组大鼠第一磨牙移动距离增长,破骨细胞数增多,Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch 1、Jagged 1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);与川续断皂苷Ⅵ组比较,抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组大鼠第一磨牙移动距离缩短,破骨细胞数减少,Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch 1、Jagged 1 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);与抑制剂组比较,抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组大鼠第一磨牙移动距离增长,破骨细胞数增多,Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch 1、Jagged 1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。结论川续断皂苷Ⅵ可加速正畸牙移动,增加牙周组织中破骨细胞数量,促进牙周改建,其可能是通过激活Notch1信号通路发挥作用。

川续断皂苷Ⅵ对睡眠剥夺小鼠神经发生及认知功能的改善作用研究

本文旨在探讨川续断皂苷Ⅵ(asperosaponin Ⅵ,ASA Ⅵ)对睡眠剥夺小鼠认知功能的改善作用及相关机制。采用多平台水环境法对C57BL/6J小鼠进行睡眠剥夺,期间腹腔注射ASA Ⅵ进行干预,采用新物体识别实验及Morris水迷宫实验评估小鼠的认知功能,运用q-PCR、免疫组化、Western blotting分别检测小鼠海马区的炎症水平、神经发生及信号通路变化。结果显示:与对照组相比,模型组小鼠海马中的小胶质细胞呈激活状态,炎症因子的表达水平显著提高(P<0.05),新生神经元数量显著减少(P<0.05),并导致认知功能下降。ASA Ⅵ干预显著改善了睡眠剥夺小鼠的认知功能,抑制海马中促炎性细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的表达(P<0.05),同时显著提高抗炎性细胞因子IL-4、IL-10和神经营养因子BDNF的表达水平(P<0.05)。ASA Ⅵ干预还显著提高了睡眠剥夺小鼠海马中的p-PI3K、PI3K、Akt蛋白表达水平及新生神经元数量(P<0.05)。PI3K/Akt抑制剂LY294002处理显著降低ASA Ⅵ的干预效果。结果表明,ASA Ⅵ可改善睡眠剥夺小鼠学习记忆能力,其机制与PI3K/Akt信号通路激活相关。因此,作为抗炎、神经保护药物,ASA Ⅵ具有潜在的开发前景。

川续断皂苷乙通过调节细胞免疫平衡对哮喘小鼠气道炎症的减轻作用

目的 旨在评估川续断皂苷乙(DB)对哮喘小鼠气道炎症的影响,并初步探讨潜在的机制。方法 采用卵清蛋白(OVA)构建哮喘小鼠模型。将小鼠按随机数字表法随机分为5组:正常对照组、模型(OVA)组、地塞米松(DEX)组[灌胃给予0.075 mg/(kg·d)地塞米松]、低剂量DB(L-DB)组[灌胃给予10 mg/(kg·d)川续断皂苷乙]和高剂量DB(H-DB)组[灌胃给予60 mg/(kg·d)川续断皂苷乙]。采用HE染色、Masson染色和过碘酸雪夫(PAS)染色进行组织病理学分析。通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清中的炎症介质水平。通过流式细胞仪分析肺细胞中的T辅助细胞(Th)和调节性T细胞(Treg)的占比。结果 与正常对照组相比,OVA组小鼠血清IgE、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平、BALF中干扰素-γ(IFN-γ)、IL-10水平显著降低,而IL-13、IL-4、IL-17、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平、BALF中嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞(LYMs)、中性粒细胞(NEU)和巨噬细胞(MAC)的数量、Th2细胞亚群和Th17细胞亚群占比显著升高,而白细胞介素-10(IL-10)水平、BALF中干扰素-γ(IFN-γ)、IL-10水平、肺组织中Th1细胞亚群和Treg细胞亚群占比显著降低(P均<0.01);与OVA组相比,DEX组和H-DB组小鼠血清IgE、TNF-α和IL-6水平、BALF中IL-13、IL-4、IL-17、TGF-β1水平、BALF中EOS、LYMs、NEU和MAC的数量、肺组织Th2细胞亚群和Th17细胞亚群占比显著降低,而IL-10水平、BALF中IFN-γ、IL-10水平、肺组织中Th1细胞亚群和Treg细胞亚群占比显著升高(P均<0.01)。结论 DB能有效改善哮喘小鼠的症状、肺组织损伤及气道炎症反应,这可能是通过调节Th1/Th2和Th17/Treg细胞免疫平衡来实现。

川续断皂苷Ⅵ对M1/M2型巨噬细胞极化的调节作用及机制

目的:研究川续断皂苷Ⅵ对M1/M2型巨噬细胞极化的调节作用及机制。方法:MTT法检测川续断皂苷Ⅵ对RAW264.7细胞活力的影响。ELISA检测脂多糖(LPS)诱导状态下RAW264.7细胞上清中TNF-α和IL-6的分泌量;Griess法检测LPS诱导状态下RAW264.7细胞上清中一氧化氮(NO)含量;荧光定量PCR检测TNF-α、IL-6、精氨酸酶-1(Arg-1)、血红素加氧酶1(HO-1)和细胞因子信号转导抑制蛋白-2(SOCS2)基因表达水平。Western blot检测一氧化氮合酶(iNOS)和p-p65蛋白表达。结果:在LPS诱导的RAW264.7细胞中,川续断皂苷Ⅵ抑制TNF-α、IL-6、iNOS和p-p65蛋白或基因表达水平,同时增加HO-1基因表达。川续断皂苷Ⅵ能抑制LPS诱导下RAW264.7细胞分泌的NO。川续断皂苷Ⅵ增加IL-4诱导下M2型巨噬细胞标志物Arg1和SOCS2基因表达。结论:川续断皂苷Ⅵ可以抑制RAW264.7巨噬细胞向M1型极化,同时促进其向M2型极化,可通过调节M1/M2型巨噬细胞极化发挥其抗炎免疫调节作用。

高效液相色谱法测定筋骨痛消液中11-羰基-β-乙酰乳香酸和川续断皂苷Ⅵ的含量

目的:建立筋骨痛消液中11-羰基-β-乙酰乳香酸和川续断皂苷Ⅵ的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定筋骨痛消液中11-羰基-β-乙酰乳香酸和川续断皂苷Ⅵ的含量,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18(4.60 mm×250 mm, 5μm),以0.05%磷酸-乙腈(20∶80)为流动相在254 nm波长下测定11-羰基-β-乙酰乳香酸;以水-乙腈(70∶30)为流动相在212 nm波长下测定川续断皂苷Ⅵ,随机挑选10批次筋骨痛消液,并对其含有的11-羰基-β-乙酰乳香酸和川续断皂苷Ⅵ分别进行测定。结果:11-羰基-β-乙酰乳香酸在0.010 2~1.020 5 mg·mL^(-1)(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率为99.11%,RSD为1.50%(n=9),10批次样品中的平均含量为1.435 3 mg·mL^(-1);川续断皂苷Ⅵ在0.010 2~1.020 0 mg·mL^(-1)(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率为99.21%,RSD为2.17%(n=9),10批次样品中的平均含量为0.816 3 mg·mL^(-1)。结论:该方法结果准确,灵敏度高,重复性好,可用于筋骨痛消液的质量控制。

一测多评法同时测定酒续断配方颗粒中6种成分的含量

目的采用UPLC法对酒续断配方颗粒的6个含量指标马钱苷酸、川续断皂苷Ⅵ、绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C进行含量测定,并应用一测多评法同时测定6个指标的含量,为其质量控制提供依据。方法采用超高效液相UPLC-UV,以ACQUITYHSST3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长为220 nm,流速0.3 ml/min,进样体积2μl,柱温30℃。同时测定酒续断配方颗粒中马钱苷酸、川续断皂苷Ⅵ、绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C 6种成分的含量,采用一测多评法,以绿原酸为内参物,通过相对校正因子测定马钱苷酸、川续断皂苷Ⅵ、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C含量,同时采用外标法测定多批酒续断配方颗粒中这6个指标成分的含量,比较计算值与实测值的差异,验证一测多评法的准确性。结果建立相对校正因子重现性良好,采用相对校正因子计算的含量值与实测值之间无明显差异。结论本研究建立的测定方法鉴别快捷、准确、重复性良好,可为酒续断配方颗粒质量控制的评价提供数据依据。

川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化的研究

目的探讨川续断皂苷Ⅵ(akebia saponin D)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的影响。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,选择合适的培养基,传代扩增。采用不同浓度的川续断皂苷Ⅵ对大鼠MSCs定向诱导分化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线;观察MSCs诱导分化过程中成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphosphatase,ALP)活性;采用ELISA法检测MSCs诱导分化过程中骨钙素(Osteo-calcin,OC)的含量;RT-PCR方法检测MSCs诱导分化过程中核心结合因子α-1(Cbfα1)mRNA表达。结果细胞生长曲线显示各组MSCs数量均随时间延长而增加,中、高浓度的川续断皂苷Ⅵ能明显提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性和骨钙素的含量,且使Cbfα1 mRNA的表达升高。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进大鼠体外MSCs向成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高Cbfα1 mRNA的表达有关。

高效液相色谱法测定续断药材中川续断皂苷Ⅵ的含量

目的：建立中药续断中川续断皂苷Ⅵ的含量测定方法，为续断质量标准建立提供依据。方法：采用反相高效液相色谱法，Kromasil ODS色谱柱，流动相为乙腈-水（30：70），检测波长为212nm。结果：续断中川续断皂苷Ⅵ在该色谱条件下获良好分离，线性范围为0．5825-9．32μg，r=0．9999，平均加样回收率为100．3％，重复性RSD为2．3％。结论：该方法方便，快速，准确，可作为续断药材及其制剂质量控制的方法。

川续断提取物续断皂苷Ⅵ防治骨质疏松症的研究进展

随着我国老年人绝对数量的增长以及老龄化加速,骨质疏松症(osteoporosis,OP)已然成为我国需要面对的公共健康问题。近年来对续断防治OP的基础及临床研究成为热点,研究发现川续断皂苷Ⅵ具有较好的防治OP的功效,可以通过多个细胞层面及生物学通路干预骨代谢,从而发挥治疗OP的作用。笔者从续断皂苷Ⅵ对BMSCs、成骨细胞、破骨细胞及相关生物学信号通路的影响来综述续断皂苷Ⅵ防治骨质疏松的研究概况,以期为续断皂苷Ⅵ的基础研究、临床应用及新药开发等提供参考。

HPLC法同时测定艾附暖宫丸中芍药苷、阿魏酸和川续断皂苷Ⅵ

目的建立同时测定艾附暖宫丸中芍药苷、阿魏酸、川续断皂苷Ⅵ的高效液相色谱法。方法艾附暖宫丸50%甲醇提取液的高效液相色谱分析以C18色谱柱为固定相,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,体积流量1mL/min,柱温为30℃,线性梯度洗脱,芍药苷、川续断皂苷Ⅵ检测波长为230nm、阿魏酸检测波长为321nm。结果芍药苷在0.502-5.016 7μg（r=0.999 3）范围内、阿魏酸在0.147-1.760μg（r=0.999 8）范围内、川续断皂苷Ⅵ在0.975-11.480μg（r=0.999 5）范围内,对照品进样质量和色谱峰峰面积呈良好线性关系,加样回收率分别为97.8%、100.5%和97.6%,RSD值分别为2.0%、2.0%和1.8%。结论建立的高效液相色谱法简便稳定、准确可靠,可用于艾附暖宫丸的质量控制。

利用斑马鱼模型评价川续断皂苷Ⅴ和Ⅵ的抗骨质疏松活性

为探讨斑马鱼模型评价中药微量成分在体抗骨质疏松活性的适用性与合理性,以25μmol/L泼尼松龙诱导的斑马鱼幼鱼骨质疏松模型考察川续断皂苷V和川续断皂苷VI抗骨质疏松活性。采用茜素红对斑马鱼幼鱼骨骼染色,并以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果 25μmol/L泼尼松龙使斑马鱼骨量显著丢失,与模型组比较,川续断皂苷V和川续断皂苷VI及依替膦酸二钠阳性药均能阻止泼尼松龙诱导的斑马鱼骨量丢失,提示斑马鱼模型成功评价了微量川续断皂苷V和川续断皂苷VI的抗骨质疏松活性,具有在体化、微板化,简单、高效的特点。

川续断皂苷Ⅵ通过JNK信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化

【目的】探讨川续断皂苷Ⅵ诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞方向分化的机制。【方法】全骨髓贴壁法培养大鼠BMSCs。实验分为诱导组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+5μmol/L SP抑制组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+10μmol/L SP抑制组,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+20μmol/L SP抑制组等5组。采用茜素红染色和骨钙素定量法检测细胞成骨分化程度;采用碱性磷酸酶(ALP)染色测定ALP活性;采用生物信息学方法预测c-Jun氨基末端激酶(JNK)相关因子。【结果】与诱导组比较,1μmol/L续断皂苷Ⅵ组茜素红染色明显增加,ALP活性增强,骨钙素表达量增加(P<0.05)。与1μmol/L川续断皂苷Ⅵ组比较,1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+5μmol/L SP抑制组、1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+10μmol/L SP抑制组、1μmol/L川续断皂苷Ⅵ+20μmol/L SP抑制组茜素红染色程度降低,ALP活性减弱,骨钙素含量显著减少(P<0.05)。生物信息学表明c-Jun和转录激活因子4(ATF4)、骨形态发生蛋白2(BMP2)之间存在直接的相互联系。【结论】川续断皂苷Ⅵ诱导BMSCs成骨分化的机制可能与JNK信号通路的激活有关。

HPLC-UV及ELSD法测定续断皂苷VI的比较研究

目的:比较两种检测方法优劣,为丰富续断药材质量控制方法提供参考。方法:采用HPLC-UV及ELSD串联检测技术同时检测续断皂苷VI。结果:紫外检测器基线易漂移且有溶剂峰,蒸发光散射检测器基线平稳,但出峰不多;对两种检测器均有响应的续断皂苷VI,其出峰时间基本一致,蒸发光散射检测器下所得色谱峰明显高于紫外检测器;紫外检测方式的重复性、线性关系及加样回收率略优于蒸发光散射检测,两者均符合含量测定要求,且两种检测方式测定的样品结果相当。结论:紫外检测器灵敏度及稳定性较好;蒸发光散射检测器适用范围更广,能消除流动相配比变化对基线产生的影响,可以很好的支持梯度洗脱;HPLC-UV,HPLC-ELSD及HPLC-UV/ELSD串联均可作为续断药材含量测定方法。

贵州续断药材川续断皂苷Ⅵ含量的地理分布趋势分析

为了解引起贵州续断中川续断皂苷Ⅵ含量变化的内外因素,采用HPLC法测定样品中川续断皂苷Ⅵ含量,对居群内、居群间的含量与分布地海拔进行分析。结果表明:川续断皂苷Ⅵ含量与产地或种源地的海拔呈正相关,居群内和居群间川续断皂苷Ⅵ含量差异均较大,且该差异不随海拔的改变而改变。结论:海拔是影响川续断皂苷Ⅵ含量变化的主导生态因子,续断居群内和居群间丰富的遗传多样性是造成川续断皂苷Ⅵ含量差异大的根本原因,在任一居群或产地,都可能有含量较高的植株和含量较低的植株。

续断皂苷抗白血病作用的机制探讨

目的探讨续断皂苷(akebia saponinD,ASD)抗白血病细胞及其作用机制。方法用不同剂量(10、30、50、100μg/mL)皂苷处理人急性白血病细胞株U937细胞和人早幼粒白血病细胞株HL-60细胞,采用MTT比色法观察ASD对白血病细胞的作用。以Annexin-Ⅴ染色法检测细胞凋亡并以PCR法检测凋亡相关基因的表达。采用Westernblot法检测P53蛋白的变化。采用Griess分光光度法检测样品中一氧化氮(NO)的代谢产物亚硝酸盐的含量。结果与未处理组相比,50μg/mLASD能明显抑制U937细胞和HL-60细胞的生长并呈剂量依赖性,同时伴随bcl-2mRNA表达的明显下调。Western blot检测结果显示,P53蛋白的表达水平随ASD作用而升高。另外,ASD可以促使U937细胞和HL-60细胞中NO的含量显著提高(P<0.05)。结论 ASD对U937细胞和HL-60细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与bcl-2基因的下调,p53蛋白上调,以及促进白血病细胞内NO含量提高相关。

正交设计优化川续断中川续断皂苷Ⅵ的提取工艺

目的优选川续断中川续断皂苷Ⅵ的提取工艺。方法以川续断皂苷Ⅵ转移率为指标,采用单因素、正交试验的方法,优化提取工艺参数。结果选用回流法提取,6倍量65%乙醇连续回流提取3次,每次2h的提取效果最佳。结论乙醇回流提取简单且效率高,适用于川续断中川续断皂苷Ⅵ的提取。

续断皂苷Ⅵ对小鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响

目的:探讨续断皂苷VI(ASA VI)对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用机制及对小鼠骨质疏松的防治作用。方法:采用MTT法、钙浓度检测及RT-q PCR方法评价ASA VI对BMSCs细胞活力、成骨分化及Wnt通路相关基因表达的作用;通过Micro-CT定量分析ASA VI对去卵巢(OVX)小鼠骨形态计量参数的影响。结果:适宜浓度下的ASA VI能提高BMSCs的细胞活力,促进细胞基质矿化,升高BMP-2、Runx2、β-catenin、OCN的基因表达,Wnt信号阻断剂(DKK-1)能降低这些成骨基因表达。ASA VI能增加OVX小鼠的股骨骨量,改善骨小梁微结构。结论:ASA VI促进BMSCs成骨分化,Wnt信号可参与了ASA VI诱导的成骨分化过程。

不同炮制方法对续断中总皂苷和川续断皂苷Ⅵ含量的影响

目的:研究续断生品及不同炮制品中总皂苷与川续断皂苷Ⅵ的含量变化,探讨不同炮制方法对续断中总皂苷和川续断皂苷Ⅵ含量的影响。方法:采用分光光度法测定续断生品及炮制品中总皂苷的含量;采用高效液相色谱法测定川续断皂苷Ⅵ的含量。结果:与续断生品相比较,各炮制品的总皂苷含量略有增加;但炮制后川续断皂苷Ⅵ的含量增加显著。结论:不同炮制方法均能影响续断中川续断皂苷Ⅵ的含量变化,证明了传统炮制方法的合理性。