维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡卵巢繁殖基因表达和抗氧化功能的影响

试验旨在研究维生素A和维生素K3对产蛋后期蛋鸡卵巢繁殖基因表达和抗氧化功能的影响。采用3×3试验设计,维生素A添加量为0、7000、14000IU/kg,维生素K3添加量为0、2.0、4.0 mg/kg。选取1 080羽88周龄罗曼粉蛋鸡,随机分为9组,每组8个重复,每个重复15羽。预试期2周,正式试验期8周。结果表明:与0 IU/kg维生素A相比,添加7 000、14 000 IU/kg维生素A增加了卵巢中骨形态发生蛋白15和骨形态发生蛋白受体1B的mRNA相对表达量(P<0.05),降低了卵巢中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力以及核因子E2相关因子2和GSH-Px1 mRNA相对表达量(P<0.05);添加2.0 mg/kg维生素K3上调了卵巢中激活素受体I型和促卵泡激素受体的mRNA相对表达量(P<0.05);维生素A和维生素K3对血清中孕酮含量、卵巢繁殖基因雌激素受体1、抗氧化基因GSH-Px3的mRNA相对表达量以及卵巢中GSH-Px、T-SOD有显著交互作用。由此可见,添加7 000、14 000 IU/kg维生素A可降低卵巢抗氧化酶活及繁殖基因表达水平;添加2.0 mg/kg维生素K3可上调产蛋后期蛋鸡的卵巢繁殖基因表达。

维生素K3合成工艺优化

在维生素K3(亚硫酸氢钠甲萘醌,MSB)合成原有工艺基础上加入十二烷基磺酸钠和正己烷,通过正交试验确定其最佳工艺条件:铬离子浓度:2.75 mol·L^(-1),硫酸质量分数:17.5%;2-甲基萘(2-MN):氧化液(摩尔体积比)=1 mol:3.3 L;2-MN:十二烷基磺酸钠(质量比)=10:1;2-MN:正己烷(质量体积比)=1:3;投料顺序:先加入正己烷将2-MN溶解后,再加入十二烷基磺酸钠和氧化液;反应温度为30℃;反应时间为3 h;机械搅拌。并通过中试放大试验验证两步反应总收率能稳定在70%,MSB纯度可达94%,明显高于文献以及国内外各维生素K3生产厂家,为生产K系维生素其他产品提供了应用基础。

吐温80-酸性罗丹明B-维生素K3化学发光体系测定维生素K3的含量

开发了一种测定饲料添加剂中维生素K3含量的方法,并探究了其机理.以硫酸作为酸性介质,吐温80-酸性罗丹明B-维生素K3化学发光体系会产生强烈的化学发光信号,根据化学发光信号的强度可以测定饲料添加剂维生素K3粉中维生素K3的含量.在最佳实验条件下,维生素K3的浓度在0.10~8.00μg·mL-1范围内与化学发光信号强度呈现良好的线性关系,线性回归方程:I=136.47c-0.6611,r=0.9991,检出限为0.02μg·mL-1,相对标准偏差为1.4%,平均回收率为99.25%.该方法仪器设备简单,操作方便,可准确测定饲料添加剂药粉中维生素K3的含量.

β-甲基萘催化氧化合成维生素K3的研究进展

维生素K_3(VK_3)不仅是合成维生素K类的重要中间体,也是常用医药及饲料添加剂。VK_3只能由人工合成,通过绿色途径直接催化氧化β-甲基萘(β-MN)制备VK_3的工艺一直存在较大难度。本文综述了以双氧水、氧化性盐类、氧气等不同氧化剂催化氧化价格低廉的β-MN制取VK_3的研究,重点介绍了以绿色氧化剂双氧水为主的催化氧化反应的国内外研究进展。提及了气相氧化法、电解氧化法和微波氧化法的最新研究成果。液相和气相氧化法由于具有易操作性及低能耗等特点,应作为VK_3工业生产的首选操作方式。微波氧化法处于基础研究阶段,但是其高效节能、绿色环保的优势引起研究者的广泛关注。最后指出了未来VK_3研发工作在催化剂制备、氧化剂选用、溶剂选取等方面应努力的方向。

维生素K3诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其survivin基因表达的变化

目的观察维生素K3(VK3)对人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响及其survivin基因表达的变化。方法CCK8试剂检测VK3对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,Hoechst33342荧光染色法在激光共聚焦显微镜下观察凋亡细胞核的形态,用流式细胞仪检测细胞凋亡率(AnnexinV/PI法),RT-PCR法检测SMMC-7721细胞survivin mRNA的表达水平。结果(2、5、10、20、25μmol/L)VK3作用SMMC-7721细胞48h后,生长抑制率分别为33.8%、50.1%、63.9%、78.5%、84.7%;细胞的凋亡率分别是33.28%、63.97%、77.69%、87.30%、92.40%;survivin mRNA在凋亡的SMMC-7721细胞内的表达明显下降。结论VK3能抑制SMMC-7721细胞增殖,并诱导其发生凋亡,survivin表达水平的下降可能与VK3诱导的SMMC-7721细胞凋亡有关。

自噬溶酶体抑制剂氯化铵促进维生素K3诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用

目的:探讨自噬溶酶体抑制剂氯化铵(NH4Cl)在维生素K3(VK3)诱导的HeLa细胞凋亡过程中的作用。方法:实验分为4组:正常对照组、30μmol/L VK3作用组、10 mmol/L NH4Cl作用组和30μmol/L VK3+10mmol/L NH4Cl联合作用组。MTT法检测细胞存活率;吖啶橙(AO)染色观察溶酶体膜通透性变化,单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察自噬泡的变化,BCECF-AM染色流式细胞术检测细胞浆pH变化,Hoechst 33342染色检测细胞核染色质凝聚状态及细胞凋亡率。结果:与对照组相比,单独应用NH4Cl对HeLa细胞无明显影响。VK3作用组He-La细胞存活率降低,AO染色荧光没有变化,细胞内出现自噬泡,细胞浆呈酸性,细胞核染色质凝聚,细胞发生凋亡。NH4Cl与VK3联合作用于HeLa细胞时,与单独应用VK3组相比,溶酶体通透性增加,细胞内自噬泡更加聚集,细胞浆酸性增强,细胞凋亡率明显增加。结论:自噬溶酶体抑制剂NH4Cl促进了VK3诱导的HeLa细胞凋亡,表明自噬可能在VK3诱导的HeLa细胞损伤过程中起到保护作用。

碳纳米管-TiO2修饰电极伏安法测定维生素K3

利用碳纳米管、二氧化钛两种纳米材料制成碳纳米管-TiO2复合膜修饰电极,进行了维生素K3电化学行为的研究。维生素K3在碳纳米管-TiO2复合膜修饰电极的电化学响应优于碳纳米管修饰电极,表明前者具有更好的催化作用。通过条件实验的优化,结果表明维生素K3在pH=9.42的氨水-NH4Cl底液中,富集时间为10s,富集电位于-0.60V,扫描速度为0.1V/s时有稳定的灵敏的氧化还原峰。峰电流与维生素K3浓度在3.0×10-6～8.0×10-5mol/L范围内呈良好的线性关系,检出限为5.0×10-7 mol/L。考查了修饰电极的重现性,5次平行测量的RSD为1.78%。该方法用于片剂药品中维生素K3含量的测定,回收率在97.5%～102%之间。

维生素K3诱导人肝癌细胞SMMC-7721损伤中Bcl-2和Bax表达的变化及意义

目的:探讨Bcl-2、Bax在维生素K3(VK3)诱导人肝癌细胞SMMC-7721损伤过程中的变化,为研究VK3诱导肝癌细胞损伤的机制提供参考。方法:体外培养SMMC-7721细胞,取对数生长期细胞分为对照组和不同浓度VK3处理的实验组(20、40和60μmol.L-1),MTT法检测各组SMMC-7721细胞生存率;紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;RT-PCR检测Bcl-2及Bax mRNA表达水平;Western blotting检测Bcl-2及Bax蛋白表达水平。结果:与对照组比较,20μmol.L-1VK3组细胞存活率、LDH释放率、Bcl-2和Bax mRNA表达量及其蛋白表达量未见明显变化;与对照组比较,40和60μmol.L-1VK3组细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01);LDH释放率增加(P<0.05或P<0.01);Bcl-2 mRNA表达率降低(P<0.05);BaxmRNA表达量率升高(P<0.05);Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05);Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:40μmol.L-1剂量的VK3能够诱导SMMC-7721细胞损伤,其机制可能与下调Bcl-2和上调Bax蛋白表达有关。

荧光分光光度法测定药物制剂中维生素K3

维生素K3（Vitamin K3，VK3）是一种油溶性化合物，不发荧光。在酸性条件下，VK3可被TiCl3还原为具有荧光的甲萘酚，据此建立了一种测定药物制剂中VK3含量的荧光分光光度法新方法。实验选定甲萘酚的激发波长和发射波长分别为330nm和444nm。该法荧光强度与VK3的浓度在8．0×10^-7～1．6×10^-5mol／L范围内呈良好的线性关系，R=0．9987，检出限为8．45×10^-9mol／L，回收率为98．6％～102．3％。方法用于市售VK3注射液的测定，结果令人满意。

探讨流式细胞仪测定不同浓度维生素K3对肝癌细胞凋亡周期的影响

目的:对维生素K3诱导肝癌细胞分子凋亡机制进行初步探讨从而达到指导临床肝癌治疗的作用。方法:对人类肝癌细胞株HCC-9204进行培养并选取对数生长期的肝癌细胞,不同浓度及时间的维生素K3进行诱导,通过荧光染色法在激光共聚焦显微镜下观察凋亡细胞核形态。CKK-8法对维生素K3抑制HCC-9204细胞增值,使用流式细胞仪检测细胞凋亡率、凋亡周期及细胞膜Fas表达情况。结果:经维生素K3进行诱导CCK-8检验肝癌细胞比率明显下降,自身生长抑制率上升且呈现明显的计量依赖性,荧光染色后发现细胞凋亡中期细胞凋亡细胞核呈现波纹状或折缝样,有部分染色质出现浓缩,中晚期凋亡细胞核染色质呈现高度凝聚且边缘化,细胞核裂解呈现碎块状并产生凋亡小体。流式细胞仪检测不同浓度VK3作用的肝癌细胞珠HCC-9204在48h时2μmol/L凋亡率为31.44%,5μmol/L凋亡率为62.81%,10μmol/L凋亡率为76.89%,20μmol/L凋亡率为89.24%,25μmol/L凋亡率为93.58%。结论:维生素K3诱导肝癌细胞凋亡48h时呈现明显浓度计量依赖性,荧光染色法在能动速度态观察差细胞核凋亡变化并可以进行定量、定性分析。

维生素K3增强吉西他滨诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的研究

目的探讨维生素K3(VK3)是否能影响吉西他滨诱导人膀胱癌T24细胞凋亡。方法用噻唑蓝(MTT)法筛选出吉西他滨作用T24细胞72h后的适宜作用浓度,再用该浓度联合不同浓度的VK3(2,5,10,20μmol/L)筛选出作用72h后的适宜联合用药浓度。分为三组:空白对照组,吉西他滨组,药物联用组。用PI流式细胞术观察各组细胞凋亡情况,并通过流式软件分析细胞周期变化。结果MTT法筛选出吉西他滨与VK3的适宜药物浓度分别是1.0μg/ml和10μmol/L。药物联用组与吉西他滨组相比,可显著提高细胞抑制率和细胞凋亡率(均P<0.05)。VK3可显著增强吉西他滨诱导细胞集中于S期的作用。结论联用维生素K3可增强吉西他滨诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的作用,可能与细胞周期S期阻滞增高有关。

钙离子对维生素K3镇痛作用的影响

本文研究Ｃａ２＋对ＶｉｔＫ３镇痛作用的影响．在小白鼠辐射热甩尾模型上Ｖｉｔｋ３（６４ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ）’：有明显的镇痛作用（Ｐ＜０．０１），这种作用能被ＣａＣＩ２（１．０Ｘ１０－７ｍｏｌ，ｉｃｖ）拮抗（Ｐ＜０．０５），被Ｃａ２＋络合剂ＥＧＴＡ（５．２６×１０－７ｍｏｌ ／ｋｇ， ｉｃｖ）和Ｃａ２＋通道阻滞剂维拉帕米２５ｍｇ／ｋｇ，ｉｃｖ）增强（Ｐ值接近０．０５）。结果提示，细胞内外Ｃａ２＋浓度影响ＶｉｔＫ３的镇痛作用．

阿托品和维生素k3在足三里给药的镇吐作用临床比较

目的对比阿托品和维生素k3在足三里给药治疗呕吐的临床效果。方法60名由其他原发病引起呕吐病人随机分为治疗组和对照组,治疗组采用维生素K3足三里穴位封闭,对照组采用阿托品足三里穴位注射,两组病人依据原发病给予相应的基础治疗,分析对比两组治疗有效率及起效时间。结果治疗组有效率86.7%,对照组有效率80.0%,治疗组高于对照组("P<0.05"),平均起效时间治疗组为1.2天,对照组为1.7天,治疗组少于对照组("P<0.05"),各观察指标,具有统计学意义。结论维生素K3足三里穴位封闭临床控制呕吐效果优于阿托品足三里穴位注射,具有较好的临床效果。

HIP1在维生素K3诱导Hela细胞损伤中的表达及意义

目的:观察Huntingtin相关蛋白1(HIP1)在维生素K3诱导Hela细胞损伤中的表达及意义。方法:对数生长期Hela细胞随机分为对照组(Control)、VK3处理组(VK3)、VK3与NAC联合作用组(VK3+NAC)及NAC单独应用组(NAC);MTT法检测各组细胞存活率;Western blotting法检测各组HIP1、NFκ-B蛋白表达水平;RT-PCR方法检测各组Cyclin D1 mRNA表达水平。结果:与对照组相比,VK3组Hela细胞存活率降低(P<0.01),HIP1蛋白、NF-κB蛋白表达量降低(P<0.05),Cyclin D1 mRNA表达量明显下降(P<0.05);与VK3组相比,VK3与NAC联合应用组细胞存活率增加,能够明显拮抗HIP1蛋白,NFκ-B蛋白表达量和Cyclin D1 mRNA表达量均增加(P<0.05)。结论:VK3具有抑制细胞增殖作用,可能与降低HIP1的蛋白表达水平有关。

饲料添加剂维生素K3的合成技术及其发展

综述了β—甲萘醌(维生素 K3)的各种合成技术路线,并给合国内外研究和饲料行业应用情况提出了其发展方向。

维生素K3治疗腹痛临床疗效观察

目的:探讨维生素k3治疗腹痛的临床疗效。方法:选取近年来在我院治疗的腹痛患者226例作为研究对象,分为对照组和观察组各113例。对患者给予抗胆碱能药物进行治疗,观察组在对照组基础上增加使用维生素K3,对两组患者的疗效及不良反应情况进行统计分析。结果:观察组患者腹痛改善时间和腹痛消失时间平均为(12.2±3.2)min和(27.3±8.5)min,明显低于对照组(16.1±6.4)min和(35.7±12.6)min;观察组治疗后腹痛缓解有效率为91.2%,明显高于观察组80.5%,均具有统计学差异(P<0.05)。两组患者不良反应发生无明显差异(P>0.05),均于短期内自行缓解,均未见严重不良反应情况发生。结论:在使用抗胆碱能药物治疗基础上使用维生素K3对腹痛患者进行止痛治疗,临床有效率高,安全可靠。

维生素K3促肝癌细胞凋亡的实验研究

目的研究维生素K类药物具有抑制肿瘤生长及诱导其凋亡的作用。方法将不同浓度的维生素K3作用于肝癌细胞系HepG2细胞，观察其作用的时间效应及剂量效应。应用形态学、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法，检测细胞凋亡的发生。应用半定量逆转录仪聚合酶链反应（RT-PCR）法检测凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2mRNA表达的变化。结果维生素K3对HepG2细胞的生长有明显抑制作用，并诱导肿瘤细胞发生凋亡；细胞核固缩，核染色质聚集或断裂；DNA凝胶电泳显示清晰的DNA Ladder流式细胞术检测在G1期之前出现Sub—G1峰。在HepG2细胞凋亡过程中，凋亡相关基因Caspase-3转录水平较用药前增强，Bcl-2变化不明显。结论维生素K3具有促肝癌细胞凋亡的作用，且与Caspase-3基因表达有关。为探讨维生素K3在治疗肝癌的临床价值方面提供了一定的理论依据。

维生素K3对人膀胱癌细胞株T24凋亡的诱导作用

目的观察不同浓度的维生素K3(VK3)对人膀胱癌细胞株T24凋亡的诱导作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度VK3(0,2,5,10,20μmol/L)对T24细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测不同浓度的VK3对细胞凋亡率的影响。结果0,2,5,10,20μmol/LVK3作用T24细胞48h后,生长抑制率分别为(5.80±0.038)%,(13.30±0.036)%,(26.55±0.032)%,(42.58±0.028)%和(65.35±0.034)%,细胞凋亡率分别为(2.86±0.4)%,(5.16±0.7)%,(10.85±1.1)%,(23.01±0.8)%和(75.80±1.2)%,其中10μmol/L,20μmol/LVK3对T24细胞生长有明显抑制作用(P<0.05)。结论10-20μmol/LVK3在体外作用48h后可明显地诱导膀胱癌T24细胞株发生凋亡。

兔肝辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶在大肠杆菌中的表达及其对维生素K3的还原作用和产物的鉴定

目的:检测兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醛还原酶(NDRR)对维生素K3的催化活性并对该酶还原K3所生成的产物进行鉴定。方法:构建含6×His标签的兔NDRR的表达菌株,诱导表达并超声裂解后,通过Ni2+亲和层析纯化得到重组兔NDRR。在相对去氧隔绝空气反应体系以及存在高浓度十二烷基磺酸钠的反应条件下,利用高效液相色谱(HPLC)对兔NDRR还原K3的催化活性进行酶动力学研究。利用化学合成,HPLC及荧光光谱扫描对其还原产物进行鉴定。结果:诱导表达后的细菌裂解上清液经一步亲和层析后得到单一酶蛋白,其对K3的比活性分别是原空白菌裂解上清液和经诱导表达后的菌裂解上清液的比活性的18.6和7.3倍。经过HPLC测定,兔NDRR对K3的Km值为30.7,Vmax0.046μmoL/(min.mg)。利用四氢硼酸钠与K3化学合成的产物进行HPLC分析,其保留时间与酶反应所产生的产物峰保留时间一致,而且反应后短时间内能利用荧光光谱扫描得到K4相应的光谱图。结论:兔NDRR对K3存在还原活性,并生成K4。

维生素K3及鱼腥草超声雾化吸入佐治支气管肺炎疗效观察

目的 观察维生素K3及鱼腥草超声雾化吸入佐治支气管肺炎疗效及不良反应。方法 对120例支气管肺炎患儿随机分为两组，治疗组加用维生素K3、鱼腥草雾化吸入，每次维生素K31mg/kg、鱼腥草005ml/kg、生理盐水10ml雾化吸入，每天2次。对照组予地塞米松2mg和α-糜蛋白酶5mg，每天2次，雾化吸入，疗程各为5天。结果 治疗组疗效明显优于对照组，两组对比差异显著(x=30．39，P<0.01)，并且，治疗组无副作用。结论 维生素K3及鱼腥草超声雾化吸入佐治支气管肺炎疗效显著。