维生素K_(2)单独及与钙剂联合使用对斑马鱼骨骼健康的改善作用及机制研究

目的:研究维生素K_(2)单独使用及与钙剂联合使用对斑马鱼骨骼健康改善作用及机制。方法:采用转基因Tg系健康斑马鱼作为实验动物,利用泼尼松龙诱导骨质疏松斑马鱼模型,显微镜下观察并拍照,以斑马鱼成骨细胞荧光面积和荧光密度为指标,评价药物处理后斑马鱼骨骼发育情况,并采用Real-time qPCR检测相关基因表达变化。结果:在5~20μg/mL的实验安全剂量范围内,维生素K_(2)及与D_(3)和钙剂联合使用,均能显著改善由泼尼松龙诱导的斑马鱼成骨细胞荧光面积和荧光密度的降低(P<0.05);维生素K_(2)通过促进成骨细胞生成相关的alp、bmp2a和bmp4基因的表达,抑制破骨细胞生成相关的opg、rank1、trap、ctsk基因的表达以及抑制细胞外基质中骨钙化相关基因vdrb、sparc、colla2表达从而发挥功效。结论:维生素K_(2)通过促进成骨细胞生成相关基因的表达,抑制破骨细胞和细胞外基质中骨钙化相关基因的表达,发挥改善斑马鱼骨骼健康的作用,其与钙剂联合给药,可提升其改善骨骼健康能力。

枯草芽孢杆菌DC-1产维生素K_(2)的发酵条件优化

为提高微生物发酵法生产维生素K_(2)的产量和多样性,对枯草芽孢杆菌DC-1的发酵条件进行优化。采用单因素试验对其发酵条件包括碳源、氮源和无机盐进行初步优化,通过Plackett-Burman(PB)试验筛选出对DC-1产维生素K_(2)具有显著性影响的因素,应用响应面Box-Behnken设计优化获得DC-1的最优发酵条件。结果表明,DC-1产维生素K_(2)的最优发酵条件为甘油添加量36.5 g/L、糖蜜添加量31.8 g/L、黄豆粉添加量32.5 g/L、KH2PO_(4)浓度0.3 g/100 mL、K_(2)HPO_(4)·3H_(2)O浓度0.8 g/100 mL、Mg SO_(4)·7H_(2)O浓度0.7 g/100 mL、Na Cl浓度0.5 g/100 mL。在该条件下,MK-7产量达到94.66 mg/L,比初始发酵条件提高了48.04%;同时菌株DC-1产维生素K_(2)的多样性增加,经液相色谱-质谱联用(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS)鉴定能同时产5种MK同系物,分别为MK-2、MK-3、MK-4和MK-7,其中一个类似物未能在高分辨率质谱中找到,根据保留时间推测其为MK-5或MK-6,可为维生素K_(2)的工业化生产和探索维生素K_(2)同系物的生物活性奠定基础。

维生素K_(2)在化妆品中的应用研究进展

综述了维生素K_(2)的生理作用机制及在化妆品的应用研究进展,发现维生素K_(2)通过抗氧化、恢复线粒体功能、参与神经酰胺合成和改善血液循环等作用,具有皮肤修护、抗皱、舒缓等功效。作为我国化妆品的新原料,维生素K_(2)在化妆品的应用研究和开发上具有广阔前景。

维生素K_(2)对糖尿病性骨质疏松症大鼠骨组织和糖代谢指标的影响

目的讨论维生素K_(2)对糖尿病性骨质疏松症(DOP)大鼠骨组织和糖代谢指标的影响。方法将18只12周龄雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和干预组,正常组不进行造模,模型组和干预组构建DOP模型。建模成功后,干预组给予维生素K_(2)灌胃,模型组和正常组均给予等量生理盐水灌胃。干预4周后分离并收集大鼠股骨,通过Micro-CT检测大鼠股骨远端骨密度(BMD)和骨形态相关参数;通过免疫组化染色观察大鼠破骨细胞数量;通过免疫荧光染色观察大鼠成骨细胞数量;通过力学检测仪观察大鼠骨组织力学性能;取大鼠尾部静脉血测定空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG)水平;运用稳态模式评估法测定胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛素敏感指数(ISI)。结果干预组的BMD、骨体积分数、骨小梁数量、骨小梁厚度大于模型组(P<0.05)。免疫组化及免疫荧光染色结果显示,补充维生素K_(2)后破骨细胞数量显著减少,成骨细胞较模型组明显增加。干预组的极限载荷和刚度高于模型组(P<0.05)。干预组的FINS、FPG水平及HOMA-IR低于模型组,ISI高于模型组(P<0.05)。结论维生素K_(2)可显著减缓DOP大鼠的骨丢失量,改善糖代谢指标,为DOP的治疗提供了新思路。

230例妊娠期妇女维生素D、维生素K_(1)、维生素K_(2)水平及其临床意义

目的:了解妊娠期妇女孕期维生素D(VD)、维生素K_(1)(VK_(1))、维生素K_(2)(VK_(2))水平及临床意义。方法:选择2022年1月至2023年3月在本院就诊的230例妊娠期妇女作为研究对象,其中97例患有妊娠期高血压疾病(HDCP)的妇女为HDCP组,剩余133例为非HDCP组,比较两组的VD、VK_(1)、VK_(2)含量,采用相关性分析三种维生素与HDCP的关系。结果:VD缺乏率为34.78%(80/230),不足率为45.22%(104/230);VK_(1)不足率为3.92%(9/230),过量率为55.65%(128/230);VK_(2)不足率为30.00%(69/230),过量率为2.61%(6/230);非HDCP组的VD、VK_(1)、VK_(2)含量均明显高于HDCP组(P<0.05),且非HDCP组VD均衡率高于HDCP组(P<0.05);VD水平与HDCP的发生风险呈负相关(狉=-0.213,P=0.001),VK_(1)水平与HDCP的发生风险呈负相关(狉=-0.157,P=0.004)。结论:妊娠期妇女VD缺乏较为普遍,VK_(1)以过量为主,VK_(2)较为均衡;HDCP孕妇的VD、VK_(1)、VK_(2)水平较低,及时补充VD及VK_(1)可降低HDCP发生风险。

高效液相色谱法测定复配营养强化剂维生素K_(2)的含量

建立高效液相色谱法测定复配营养强化剂中维生素K_(2)(七烯甲萘醌MK-7)的含量。本方法利用维生素K_(2)在波长248nm处有最大吸收,对样品进行甲醇分散,50℃提取,甲醇为流动相,高效液相色谱测定。结果表明:MK-7标准溶液峰面积与浓度有较好的线性关系;不同样品的精密度试验,相对标准偏差均小于5%,加标回收率均在95%~105%之间。此方法重复性好,准确度高,可用于复配营养强化剂中MK-7的测定。

血维生素K_(2)和IL-6水平与慢性肾脏病患者冠状动脉钙化的相关性研究

目的探讨血维生素K_(2)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)水平与慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者冠状动脉钙化(coronary artery calcification,CAC)的相关性。方法选取2019年1月至2022年6月温州市人民医院肾内科收治的CKD患者111例,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血维生素K_(2)和IL-6水平;通过Agatston评分评价CAC;分析维生素K_(2)、IL-6与CAC的相关性。结果CAC组的年龄、高敏C反应蛋白(hypersensitive-C-reactive-protein,hs-CRP)、血磷、甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、IL-6水平较非CAC组高,而估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)、维生素K_(2)较非CAC组低;Logistic回归分析显示年龄、Hcy、IL-6是CAC独立危险因素(OR值分别为1.69、1.14及1.12,95%CI分别为1.237~2.181、1.005~1.623、1.014~1.328);eGFR、维生素K_(2)为CAC的保护因素(OR值分别为0.328、0.243,95%CI分别为0.216~0.713、0.076~0.651);重度CAC组维生素K_(2)较轻度CAC组降低,IL-6则较轻度CAC组、中度CAC组升高(F值分别为5.70、6.13,P<0.05)。结论高龄、高Hcy、高IL-6水平是CAC的独立危险因素,eGFR和维生素K_(2)是CAC的保护因素。

绿色分离纯化生产高纯度维生素K_(2)

为克服维生素K_(2)(Vitamin K_(2),VK_(2))提取工艺有毒溶剂用量大、有毒物质残留等缺点,建立一种高纯度VK_(2)绿色分离纯化工艺方法。使用天然油剂与甲醇、乙醇等有机试剂分别萃取纳豆芽孢杆菌干菌体内的VK_(2),结果表明,中链甘油三酯的萃取效果最好,最大提取量为2.7 mg/g。通过使用7种不同型号的大孔树脂分离中链甘油三酯溶剂相中的VK_(2),以及利用静态吸附与解吸附实验,筛选出最优型大孔树脂HC-200S。进一步优化大孔树脂的动态吸附和解吸附工艺,并且绘制大孔树脂的动态解吸附曲线,结果表明:上样液吸附流速为2.0 mL/min、解吸剂为无水乙醇/乙酸丁酯(1∶2,体积比)的混合溶液、解吸剂流速为1.0 mL/min时,HC-200S型大孔树脂对VK 2的吸附和解吸附效果最佳;VK_(2)纯度较纯化前提升4倍,达到87.8%,回收率达到93.1%。将树脂分离纯化得到的VK_(2)解吸液经过冷冻结晶和溶剂挥发结晶,分别得到纯度为96.7%和97.1%的VK_(2)晶体。研究将为VK 2的工业生产和绿色分离纯化提供方法依据,同时也为其他脂溶性维生素的分离纯化提供借鉴。

高效液相色谱法测定维生素和矿物质复方制剂中维生素K_(2)含量

目的建立测定维生素和矿物质复方制剂中维生素K_(2)(七烯甲萘醌)含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Thermo 30105-154630型ODS柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇,流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为50℃,进样量为50μL。结果七烯甲萘醌的质量浓度在0~1.0μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(R^(2)=0.9999,n=5);检测限为0.12μg/g,定量限为0.36μg/g;精密度、稳定性试验结果的RSD均小于3%(n=6);平均加样回收率为99.33%,RSD为2.98%(n=9)。结论该方法操作简便、结果准确、稳定性好,可用于维生素和矿物质复方制剂中维生素K_(2)的含量测定。

烷基葡萄糖胺对水生黄杆菌维生素K_(2)胞外分泌的影响

以水生黄杆菌作为出发菌株,研究了烷基葡萄糖胺对水生黄杆菌的细胞活性、形态、细胞膜通透性和胞外分泌维生素K_(2)的影响。结果表明,当在培养基中添加0.6%的烷基葡萄糖胺可提高维生素K_(2)的合成浓度。发酵到第8 d时,水生黄杆菌发酵合成胞外维生素K_(2)浓度达到18.7 mg/L,此时测得发酵合成维生素K_(2)总产量为25.3 mg/L,较未添加烷基葡萄糖胺时提高了204.82%。发酵液表面张力由37.4 mN/m降低到36.6 mN/m,利用扫描电镜观察发现烷基葡萄糖胺改变了菌体的细胞形态,流式细胞术分析发现菌株的细胞膜通透性增加。说明烷基葡萄糖胺可促进维生素K_(2)的胞外分泌,为微生物发酵法促进维生素K_(2)跨膜转运提供了参考。

多种维生素片中维生素K_(2)含量检测研究

目的:建立快速测定多种维生素片中维生素K2含量的分析方法。方法:样品使用美国Waters公司高效液相色谱仪检测,C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,流动相为甲醇,流速为1.0 mL·min^(-1)。结果:维生素K2保留时间约为54 min,在1.25~10.00μg·m L^(-1)线性关系良好,相关系数为0.998 2。重复性实验相对标准偏差为1.69%,50%加标回收率为92.21%~100.22%,检出限为0.06μg·g^(-1),定量限为0.20μg·g^(-1)。结论:该方法准确度和精密度良好,灵敏度高,分离度好,可为多种维生素片中维生素K2的检测研究提供参考。

维生素K_(2)与儿童骨健康

维生素K_(2)对骨骼代谢的积极作用在成人中已得到广泛认可及应用,但对儿童骨健康的影响目前研究较少。因此,本文根据现有文献对维生素K_(2)的生理特性、调节骨代谢的作用机制及与儿童骨健康相关的研究进行综述,为维生素K_(2)在儿童骨健康中的应用提供依据。

北京城北地区0~14岁儿童维生素K营养状况的观察研究

目的观察北京城北地区0~14岁儿童维生素K营养状况,为儿童的合理补充维生素K提供理论依据。方法选取2020年11月至2023年3月在北京积水潭医院儿童保健和生长发育门诊就诊的北京城北地区(昌平区、海淀北部地区)儿童274例,采用高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定维生素K_(1)、维生素K_(2)(MK-4、MK-7)水平;采用超声骨密度仪测定骨密度;按照纳入儿童的不同性别、年龄、季节、身高、体重、体质量指数(BMI)等临床资料,比较分析维生素K水平。结果在274例儿童中,0~14岁儿童维生素K_(1)中位水平为0.39(0.25,0.72)ng/mL,维生素K_(1)缺乏率较低,占2.2%(6/274)。维生素MK-4中位水平为0.06(0.05,0.09)ng/mL,维生素MK-4缺乏率占81.4%(223/274);维生素MK-7中位水平为0.55(0.42,0.74)ng/mL,未检测到MK-7缺乏者,维生素K_(2)缺乏主要以MK-4缺乏为主。不同年龄段儿童血清维生素MK-4缺乏率、血清维生素MK-4水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。不同季节的儿童血清维生素K_(1)水平比较差异无统计学意义(P>0.05);夏季的血清维生素MK-4、MK-7水平均最高[0.07(0.05,0.09)ng/mL、0.76(0.55,1.07)ng/mL],冬季均最低[0.05(0.05,0.06)ng/mL、0.50(0.40,0.67)ng/mL],不同季节的儿童血清维生素MK-4、MK-7水平比较差异均有统计学意义(H值分别为11.538、24.424,P<0.05)。体重>P_(10)与体重≤P_(10)的儿童血清维生素K_(1)、MK-7水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);体重>P_(10)的儿童血清维生素MK-4水平[0.06(0.06,0.09)ng/mL]高于体重≤P_(10)者[0.05(0.05,0.07)ng/mL],经比较差异有统计学意义(Z=-3.026,P<0.05)。不同BMI的儿童血清维生素MK-7水平比较差异无统计学意义(P>0.05);不同BMI的儿童血清维生素K_(1)、MK-4水平比较差异均有统计学意义(H值分别为6.627、9.582,P<0.05)。在不同性别、年龄、身高、骨密度因素中,儿童血清维生素K_(1)、MK-4、MK-7水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在北京城北地区0~14岁儿童中,维生素K_(2)缺乏率较高,以MK-4缺乏为主,维生素K_(2)水平有季节性差异,肥胖儿童维生素K水平低于正常儿童。

维生素K_(2)对股骨干骨折术后患者骨折愈合质量的影响

目的探讨维生素K_(2)对股骨干骨折术后患者骨折愈合质量的影响,以期为临床提供参考。方法选取2019年6月至2021年9月榆林市第一医院收治的90例股骨干骨折术后患者为研究对象,按照随机数字表法分为观察组和对照组,每组45例。两组患者术后均进行康复训练,观察组患者在康复训练的基础上给予维生素K_(2)干预。比较两组患者骨折愈合时间和愈合率,记录两组患者术后1个月、2个月及3个月时骨痂质量和骨密度值。比较两组患者术后膝关节恢复效果。结果观察组患者术后骨折愈合时间短于对照组,骨折愈合率显著高于对照组(P<0.05)。术后2个月、3个月时观察组患者骨痂质量评分和骨密度值均高于术后1个月时及对照组(P<0.05)。两组患者术后2个月和3个月时膝关节功能恢复效果比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论维生素K_(2)用于股骨干骨折术后患者,有助于提高骨痂质量,改善骨密度值,促进骨折早期愈合。

高效液相色谱法测定食品中维生素K_(1)和维生素K_(2)的含量

建立高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)测定食品中维生素K1和维生素K2含量的分析方法。方法:配方奶粉、酸奶、纳豆冻干粉和鸡胗冻干粉经酶解、异丙醇分散、正己烷萃取、旋转蒸发复溶后,使用Thermo Acclaim^(TM)120C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,锌粉还原柱(50 mm×4.6 mm)衍生,以900 mL甲醇:100 mL四氢呋喃(含冰醋酸0.3 mL,氯化锌1.5 g,无水乙酸钠0.5 g)为流动相,激发波长为243 nm,发射波长为430 nm,分离维生素K 1(Vitamin K 1,VK 1)、四烯甲萘醌(menaquinone-4,MK-4)、七烯甲萘醌(menaquinone-7,MK-7)和九烯甲萘醌(menaquinone-9,MK-9)。结果:VK 1、MK-4、MK-7和MK-9在20~1000μg/L范围内与峰面积有良好线性关系。配方奶粉、酸奶、纳豆冻干粉和鸡胗冻干粉中VK1、MK-4、MK-7、MK-9含量的相对标准偏差(RSD)均小于5%,表明精密度好。配方奶粉、酸奶和纳豆冻干粉不同水平加标回收率分别为85.0%~107.8%、85.8%~109.6%、85.1%~102.7%,回收率的RSD均小于5%,表明回收率高,相对标准偏差小。结论:实验建立的方法重复性好、准确度高,可以精准定量食品中维生素K_(1)和维生素K_(2)的含量。

乳及乳制品中维生素K2的发展现状及展望

维生素K_(2)是一种重要的脂溶性维生素,与人体健康有密切联系。目前我国作为食品营养强化剂允许使用的维生素K2仅有七烯甲萘醌分型,且仅允许用在个别乳粉。乳及乳制品作为摄取维生素K_(2)的重要食品来源,越来越受重视。对现行法律法规规定的适用范围和检测方法进行比较,提出针对性对策建议,为生产企业、检测机构和监管部门提供参考。

维生素K_(2)对去卵巢大鼠股骨干骨折愈合及骨密度影响的实验研究

目的:研究维生素K_(2)对去卵巢股骨干骨折模型大鼠骨折愈合及骨密度的影响。方法:将90只雌性SD大鼠随机分为假手术组、骨折组及干预组,每组30只。三组大鼠均实施卵巢切除干预,其中骨折组与干预组均建立股骨干骨折模型。干预组采用维生素K_(2)灌胃,假手术组与骨折组均予以等量0.9%氯化钠溶液,连续干预5周。比较三组大鼠骨折愈合状况、骨密度[包括全长骨密度(tBMD)、中1/3段骨密度(mBMD)以及远1/3段骨密度(dBMD)],以及骨代谢指标[包括骨钙素(BGLAP)、碱性磷酸酶(ALP)及抗酒石醋酸酸性磷酸酶(TRACP)]、血清血管内皮生长因子(VEGF)和骨形成蛋白-2(BMP-2)表达水平。结果:X线检查发现,骨折组大鼠不完全愈合,而干预组存在明显的骨痂组织形成、重塑以及骨愈合。骨折组大鼠右股骨tBMD、mBMD及dBMD均低于假手术组,而干预组各项指标水平均高于骨折组(均P<0.05)。骨折组大鼠BGLAP、ALP及抗TRACP水平均明显高于骨折组,而干预组大鼠各项指标水平均明显低于骨折组(均P<0.05)。骨折组大鼠血清VEGF、BMP-2表达水平均明显低于假手术组,而干预组VEGF、BMP-2表达水平均高于骨折组(均P<0.05)。结论:维生素K_(2)可促进去卵巢股骨干骨折模型大鼠的骨折愈合并增加骨密度。

1732例儿童血清维生素K_(2)临床分析及其与骨代谢标志物关系的研究

目的分析儿童血清维生素K_(2)(vitamin K_(2),VitK_(2))临床特征及其与骨钙素(osteocalcin,OC)、Ⅰ型前胶原氨基端前肽(typeⅠprocollagen amino-terminal peptide,PINP)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(typeⅠcollagen carboxy-terminal peptide,CTX)的相关性。方法前瞻性选取2020年10月至2021年10月门诊常规体检儿童1732例,测定血清VitK_(2)、25羟维生素D[25-hydroxyvitamin D,25(OH)D]水平,按年龄段分为<1岁组、1~3岁组、>3~6岁组、>6~14岁组,进行血清VitK_(2)相关临床分析。筛选出25(OH)D≥50 nmol/L的儿童共309例,测定血清OC、PINP、CTX水平,分析不同年龄段水平及其与血清VitK_(2)的相关性。结果血清VitK_(2)缺乏率为52.31%(906/1732)。VitK_(2)缺乏组超重/肥胖、生长痛(≥3岁)发生率均高于VitK_(2)正常组(P<0.05);1~3岁组和>6~14岁组血清VitK_(2)缺乏率(P<0.0083)、血清VitK_(2)水平(P<0.05)差异有统计学意义。<1岁组儿童血清CTX水平高于>3~6岁组和>6~14岁组,而<1岁组儿童血清PINP水平低于>3~6岁组和>6~14岁组(P<0.05);<1岁组血清OC水平低于>6~14岁组(P<0.05)。血清VitK_(2)与OC呈正相关(r_(s)=0.347,P<0.01),CTX与PINP呈负相关(r_(s)=-0.317,P<0.01)。结论VitK_(2)缺乏可能与超重/肥胖有关;血清VitK_(2)可影响OC水平进而影响骨骼健康。

盐酸表柔比星联合维生素K_(2)的药效学考察

目的考察不同剂量盐酸表柔比星(epirubicin hydrochloride,EPI)脂质体联合维生素K_(2)(Vitamin K_(2),VK_(2))纳米乳的抗肿瘤效果。方法制备唾液酸(sialic acid,SA)修饰的EPI脂质体(EPISAL)、维生素K_(2)纳米乳(VK_(2)-E)、SA修饰的维生素K_(2)纳米乳(VK_(2)-SAE),并对制剂进行了表征和稳定性及药动学考察。使用S180肉瘤为模型,采用多个参数综合评价VK_(2)-E、VK_(2)-SAE分别联合不同剂量EPI-SAL的体内抗肿瘤效果。结果剂量分别为0.75、1.5、3.0 mg·kg^(-1)EPI-SAL,5 mg·kg^(-1)VK_(2)-E和5 mg·kg^(-1)VK_(2)-SAE的单独使用均具有一定的抗肿瘤作用;当不同剂量的EPI-SAL与VK_(2)-E、VK_(2)-SAE联合治疗后,效果均优于EPI-SAL的单独治疗;其中EPI-SAL与VK_(2)-SAE的联合治疗效果优于EPI-SAL联合VK_(2)-E;值得注意的是,低剂量的EPI-SAL与VK_(2)-SAE联用后,体内抗肿瘤效果与单独使用高剂量EPI-SAL的治疗效果相当。结论VK_(2)可以协同EPI发挥抗肿瘤作用,进而减少EPI的使用剂量,可降低EPI剂量过大带来的心脏毒性等副作用。

维生素K_(2)的生物学效应及临床意义的研究进展

维生素K_(2)是一种强抗氧化生物活性的甲萘醌系列衍生物,能激活人体中的多种关键蛋白,包括凝血因子、骨钙素和基质Gla蛋白等,进而发挥促进凝血功能、促进骨代谢、减少癌变、调节血糖、保护神经以及防止血管硬化等生物学效应,具有重要的临床意义。目前维生素K_(2)已经受到全世界的广泛关注并成为研究热点。本文主要对维生素K_(2)的生物学意义和临床意义进行综述,并展望其研究前景。