维甲酸和维甲类X受体各亚型基因在原发性肝癌组织中表达

目的 维甲类药物的分化诱导作用受特定组织表达受体的影响 ,了解肝癌组织表达维甲酸受体和维甲类X受体的表达 ,以便选择特异的维甲类药物治疗肝癌。方法 根据GeneBank的序列 ,设计对RARα、RARβ、RARγ、RXRα、RXRβ、RXRγ基因的 6对引物 ,用RT PCR的方法检测 18例肝癌组织和相应癌周肝硬化组织这些基因的表达。结果 这些基因在肝癌组织表达率分别为 44 4% (8/18) ,16 7%(3/18) ,77 8% (14/18% ) ,88 9% (16 /18) ,77 8% (14/18) ,16 7% (3/18) ;癌周肝硬化组织分别为 2 7 8% (5 /18) ,0 % (0 /18) ,6 1 1% (11/18) ,77 8% (14/18) ,5 5 6 % (10 /18) ,0 % (0 /18)。这些受体亚型表达的阳性率在肝癌组织似高于癌周肝硬化组织 ,但统计学无显著意义 (P >0 0 5 )。以 β actin为内标测定RARs和RXRs的相对表达量 ,RXRβ相对表达量高于癌周肝硬化组织 (配对秩和检验 ,P =0 0 2 0 8)。结论 由于肝癌组织表达有RARs和RXRs,提示除了应用全反式维甲酸治疗肝癌外 ,尚探讨RXRs选择性维甲类药物治疗价值。

维甲类X受体与维甲酸反应元件β_2RARE结合的研究

目的 :确定人真皮成纤维细胞中维甲类 X受体 ( RXR)与维甲酸反应元件 ( β2 RARE)的结合。方法 :培养成纤维细胞 ,反式维甲酸 ( At- RA)刺激细胞不同时段 ,抽提核蛋白 ,3 2 P标记β2 RARE作为探针 ,并加入 RXRα和β抗体 ,进行凝胶阻滞分析。结果 :对照组细胞核蛋白与β2 RARE形成复合体 ;At- RA刺激细胞后 ,迅速诱导产生明显的复合体 。选择两组核蛋白 (对照组和 At- RA刺激 4 h组 ) ,分别加入 RXRα和 β抗体 ,凝胶阻滞分析发现 RXRβ抗体可使这两组核蛋白产生新的上移复合体 SS,RXRα抗体则无此作用。结论 :RXRβ能与 β2 RARE结合 ,它们的结合不受 AT- RA的影响 ;提示 RXRβ可能是作为一辅助因子参与了 RARβ2

维甲类X受体研究现状

维甲类X受体(Retinoid X Receptor,RXR)是继维甲酸受体(RAR)之后发现的又一类核受体,它的配体9-顺式维甲酸也是新发现的又一种维甲类生理活性物质。本文就维甲类X受体及其配体的最新研究进展作一综述,并就其在血液学中的研究前景作一简要展望,以推动血液学在这一新领域的深入研究。

激动维甲类X受体抑制心肌细胞缺氧／复氧损伤

目的探讨激动维甲类X受体（retinoid X receptor，RXR）对大鼠心肌细胞H9c2缺氧／复氧（ hypoxia-reoxygenation, H/R）损伤的保护作用及其机制。方法将心肌细胞缺氧2h／复氧4h，建立H／R损伤模型。以9-顺式维甲酸（9-cis retinoid acid, c-RA）为RXR激动剂，HX531为RXH拮抗剂，实验随机（随机数字法）分4组：健康对照组（N组）、H／R损伤组、H／R＋100nmoL／Lc-RA组（RA组）、I-I／R＋100nmo]／Lc—RA＋2．5ixmoL／LHX531组（HX组），MTT法检测细胞活性，流式细胞技术检测细胞凋亡比例，荧光探针JC-1测定线粒体膜电位，Westernblot印迹法检测Bcl-2、Bax及活性片段Caspase-9蛋白表达。所有计量资料以均数±标准差（i±5）表示，采用单因素方差分析，Dennett-t检验，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果c-RA明显抑制H／R损伤引起的细胞活性下降、凋亡增加、线粒体膜电位下降，Westernblot印迹检测发现，H／R损伤组Bax、Caspase-9活性片段蛋白表达明显增加，Bcl-2表达明显下降，c—RA预处理后能明显下调Bax、Caspase-9活性片段蛋白表达及上调Bcl-2表达，而所有这些保护作用均被RXR拮抗剂HX531阻断。结论激动核受体RXR可以保护心肌细胞H／R氧化应激损伤，其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。

激动维甲类X受体抑制过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨维甲类X受体（retinoid X receptor，RXR）激动剂9-顺式维甲酸（9-cis retinoid acid，c-RA）对过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）诱导的体外培养大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法以培养的新生Sprague-Oawley（SD）大鼠心肌细胞为实验对象，随机分为三组：正常对照组（N组）、100μmol／L H2O2刺激组（H组）和100nmol／L c-RA干预组（H＋R组）。应用MTF法检测细胞活力，以Hoechst 33258荧光染色观察凋亡细胞，流式法检测细胞凋亡比率，JC-1荧光染色法检测细胞线粒体膜电位（△Ψm）变化，CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平。所有计量资料以均数±标准差（-↑x±s）表示，采用单因素方差分析，Dunnett-t检验，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果c-RA明显增强H2O2刺激后的心肌细胞活力，减少凋亡比例，稳定线粒体膜电位，减轻细胞活性氧产生。结论RXR受体激动剂c-RA能够部分抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡，其机制可能与减轻细胞氧化应激损伤有关。

β-淀粉样蛋白影响维甲类X受体α到细胞质的穿梭

目的 探讨β-淀粉样蛋白（Aβ）对维甲类X受体α（RXRα）生成及到细胞质迁移的影响。方法 将野生型小鼠脑神经瘤细胞（N2awt）分为对照组和实验组，采用Aβ短肽及淀粉样肽前体蛋白（APP）695过表达处理实验组，应用核质分离结合Western blot方法，检测RXRα在细胞核和细胞质中的含量；分别对上述2组N2awt细胞及阿尔茨海默病（AD）患者及健康对照者的脑组织切片进行免疫荧光定位染色，观察RXRα在细胞核与细胞质中分布的改变。结果 在N2awt细胞中，APP或Aβ增多不影响RXRα的表达但导致RXRα在细胞质中含量与分布增多，分别从对照组的3.2％增加至APP处理组的17.6％及从对照组的3.8％增加至Aβ处理组的14.3％；与健康人比较，AD患者脑皮质细胞中RXRα在细胞质分布增加。结论 Aβ可能影响RXRα到细胞质的穿梭。

维甲酸类受体、PKC-α在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨维甲酸类受体(RAR-α、RAR-β、RAR-γ;RXR-α、RXR-β、RXR-γ)及蛋白激酶C-α(PKC-α)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其临床意义。方法采用组织芯片和免疫组化法分析90例ESCC患者的癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织中维甲酸类受体、PKC-α的表达情况。结果①RAR-α、RAR-β、RAR-γ、RXR-α、RXR-β、RXR-γ、PKC-α在ESCC中的阳性表达率分别是35.6%、31.1%、20.0%、58.9%、36.7%、51.1%、62.2%,在正常食管黏膜组织中的阳性表达率分别是42.2%、53.3%、16.7%、46.7%、72.2%、55.6%、44.4%,其中RAR-β、RXR-β在ESCC中呈低表达,PKC-α呈高表达,表达差异有统计学意义(P<0.05),其余4种维甲酸类受体在ESCC与正常食管黏膜之间的表达差异无统计学意义。②RAR-β、RXR-β的表达随着肿瘤分化程度的降低而减少(P<0.01),在有淋巴结转移组中RAR-β表达低于无淋巴结转移组(P<0.05)。RXR-β在临床TNM分期较晚的组(Ⅲ～Ⅳ期)中表达低于分期较早的组(Ⅰ～Ⅱ期)(P<0.05)。PKC-α在临床TNM分期较晚的组(Ⅲ～Ⅳ期)中表达高于分期较早的组(Ⅰ～Ⅱ期)(P<0.05)。结论 RAR-β、RXR-β的低表达及PKC-α的高表达可能与ES-CC的发生、发展、预后密切相关。

维甲酸类受体与食管癌的研究进展

食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,其发病率逐年提高,确诊即是进展期,预后差[1-3].在我国,每年约有15万人死于食管癌,病死率仅次于肺癌、胃癌、肝癌,居第4位.食管癌的发生、发展过程涉及大量基因表达水平的改变,包括细胞周期调控发生改变,DNA修复,核受体改变等.其中核受体改变就有维甲酸类受体（retinoic aid receptors, RARs）,RARs与食管癌的发生、发展关系密切.1999年Xu等[4]首次研究了RARs与食管癌的关系,指出食管癌的发生可能与维甲酸（retinoicoid, RA）β受体表达缺失有关.近年来已受到国内外学者重视,陆续有文献报道RARs在食管癌的发生、发展中的作用,本文就此进行综述.

激动核受体RXR对大鼠心肌细胞饥饿损伤中自噬和凋亡的双重调控作用

目的探讨激动维甲类X受体(RXR)对大鼠心肌细胞无糖无血清(SGD)饥饿状态下的调控作用及其机制。方法将大鼠心肌细胞株H9c2置于无糖DMEM中培养6h,建立饥饿模型。用9-顺式维甲酸(c-RA)为RXR激动剂,HX531为RXR拮抗剂,并将细胞实验按以下分组:对照组(C组)、SGD干预组(SGD组)、SGD+100nmol/L c-RA干预组(RA组)、SGD+100nmol/L c-RA+2.5μmol/L HX531干预组(HX组),MTT法检测细胞活性,流式细胞法检测细胞凋亡比例及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3活力,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9蛋白表达,以及自噬相关蛋白LC3、Beclin 1表达,透射电镜检测心肌细胞自噬小体。结果与C组比较,SGD组和HX组心肌细胞活力均下降,凋亡百分比、Bax/Bcl-2比值和Caspase-9蛋白水平均上升(均P<0.01);与SGD组比较,RA组心肌细胞活力均上升,凋亡百分比、Bax/Bcl-2比值和Caspase-9蛋白水平均下降(均P<0.01)。SGD组平均荧光强度(MFI)波峰明显右移,为C组的2.3倍(P<0.01);而RA波峰出现明显左移,MFI值仅为C组的1.3倍,明显低于SGD组(P<0.01);HX组波峰与SGD组相似,MFI值显著高于C组(P<0.01)。透射电镜下观察到C组中细胞质内细胞器完整,而SGD组和HX组自噬小体数增加,内含有被吞噬的线粒体等结构,部分呈空泡样改变,同时自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值上升,Beclin 1表达增加(均P<0.01);RA组心肌细胞自噬小体数量明显减少,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值下调,Beclin 1蛋白表达水平降低(均P<0.01)。结论激动核受体RXR可以保护心肌细胞SGD状态下的损伤,其机制与对凋亡和自噬通路的双重调控作用有关。

中华绒螯蟹RXR基因全长cDNA克隆及表达分析

根据陆地蟹RXR基因保守区序列设计上下游引物,采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)以及cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆中华绒螯蟹RXR基因并进行各组织间的表达分析。序列分析表明,中华绒螯蟹RXR cDNA全长1 517 bp,编码433个氨基酸。经BLASTn和BLASTx分析表明,中华绒螯蟹RXR基因的氨基酸序列与陆地蟹RXR基因的氨基酸序列相似性最高,为96%。系统进化树分析显示,中华绒螯蟹RXR的氨基酸序列与陆地蟹RXR聚为一支。荧光定量PCR结果显示,RXR在所有检测的组织中均有表达,且在中华绒螯蟹Y器官中表达量最高,肝胰腺、鳃和肌肉中少量表达,心脏、胃、肠、胸神经节和脑神经节中微量表达。在中华绒螯蟹不同的蜕皮时期,Y器官中RXR表达量在D期最高,与AB期、C期呈显著性差异(P<0.05);肌肉中RXR在AB期表达量最高,与其他蜕皮时期呈显著性差异(P<0.05);肝胰腺和鳃中RXR在AB期表达量最高,E期表达量最低,但各蜕皮时期表达量之间差异不显著。

RXRγ、RARβ在9-cis-RA抑制人胃癌SGC7901细胞生长中的作用

目的:探讨维甲类X受体(RXR)γ、RARβ在RXR激动剂9-顺维甲酸(9-cis-RA)抑制人胃癌SGC7901细胞生长中的作用。方法:体外培养SGC7901细胞给予9-cis-RA干预,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、HE染色、免疫组化染色、Western-blot检测9-cis-RA作用后SGC7901细胞生长情况、凋亡率、细胞周期的改变、RXRγ及RARβ表达情况。结果:SGC7901细胞与9-cis-RA共同培养48h后,肿瘤细胞生长受到抑制,其作用具有浓度及时间依赖性。流式细胞仪检测显示处于G0/G1期的细胞增多,凋亡率增高,免疫组化及Western-blot检测显示20μmol/L的9-cis-RA作用72h后,RXRγ、RARβ蛋白表达增加。结论:9-cis-RA可通过上调RXRγ、RARβ蛋白表达诱导细胞凋亡从而抑制人胃癌SGC7901细胞生长。

ATRA对肺腺癌A549细胞RXRα及CAV1表达和分布的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对肺腺癌A549细胞维甲类X受体α(RXRα)、小窝蛋白1(CAV1)表达和分布的影响。方法 MTT法检测ATRA对A549细胞增殖的影响;免疫荧光法检测RXRα、CAV1在A549细胞中的表达和分布;Western blot法检测ATRA处理A549细胞后对RXRα、CAV1表达的影响。结果 ATRA可抑制A549细胞增殖并呈剂量依赖性;ATRA处理A549细胞3 d后,RXRα表达降低并有向细胞核集中的现象,CAV1表达量降低且在胞膜分布增加。结论 ATRA可抑制A549细胞增殖并影响RXRα和CAV1的表达和分布,下调RXRα和CAV1在A549细胞中的表达并分别使其向核内和胞膜转移,从而可能参与调控细胞增殖。

维甲酸及其受体

维甲类(Retinoid)是包括自然和合成的与维生素A相关的化合物的总称.维生素A早以被确认对维持生长和分化及支持视力和生殖均至为重要.维生素A代谢为一个醛基一视黄醛和一个酸形式一维甲酸(RA).RA的自然形式是全反式衍生物,全反式维甲酸(Tretinoin,TR).RA有维持生长和分化的能力.作为分化剂,RA能诱导畸胎瘤干细胞、骨髓白血病细胞和成纤维细胞瘤细胞的分化,分化过程伴有基因表达诱导.这些基因的诱导可能是分化过程的基础.作为一种抗肿瘤剂,维甲酸已成功地用于实验动物化学诱导的肺、皮肤、膀胱和乳腺肿瘤.一种维生素A类似物亦显示可抑制放射诱导肿瘤的基因转化.核受体族系 已鉴定出二组受体:维甲酸受体(RAR)α、β、γ和维甲类X受体(RXR)α、β、γ.在人和鼠已克隆出其cDNAs.比较其DNA序列和结构组成,RARs和RXRs同属核受体大家族.

白色脂肪组织向棕色脂肪组织转化——治疗肥胖的新策略

肥胖已成为全球性健康问题,但目前仍没有安全有效的治疗方法。棕色脂肪组织和白色脂肪组织在能量代谢中发挥着截然相反的作用,人们一直试图促使白色脂肪组织向棕色脂肪组织转化,以求开辟治疗肥胖的新途径。本文对白色脂肪组织向棕色脂肪组织转化的发生机制进行总结,并对其相关问题进行了综述。

金丝桃素通过抑制核受体RXR转录激活功能诱导癌细胞凋亡的研究

目的:研究金丝桃素对肿瘤细胞的诱导凋亡作用。方法:检测金丝桃素对维甲类X受体(RXRα)的转录活性的调控,并研究金丝桃素对乳腺癌细胞MCF-7和人皮肤基底癌细胞A431凋亡的作用。结果:金丝桃素对2种癌细胞有很强的诱导凋亡的作用,加入RXRα的天然配体9-顺视黄酸(9cis-RA)共同处理会缓解这种细胞凋亡作用。报告基因实验发现金丝桃素对RXRα同源和异源二聚体的转录激活有抑制作用。蛋白免疫印迹实验发现金丝桃素能够降低RXRα蛋白的表达。结论:金丝桃素具有诱导乳腺癌细胞MCF-7和人皮肤基底癌细胞A431凋亡的作用。金丝桃素抑制9cis-RA对RXR转录激活作用以及9cis-RA一定程度地拮抗金丝桃素对乳腺癌细胞MCF-7和人皮肤基底癌细胞A431的凋亡,是通过调控RXRα的蛋白表达,并以RXR转录非依赖性的方式起作用。

凝胶阻滞检测核蛋白-DNA结合方法的探讨

目的：探讨改良的凝胶阻滞法用于核蛋白-DNA结合的检测。方法：培养人真皮成纤维细胞，用维甲酸刺激不同时段，抽提其核蛋白，与32P-标记维甲酸反应元件（RARE）及维甲类X受体α、β（RXRα、β）抗体结合，进行凝胶阻滞分析。结果：细胞于不同状态可出现迁移率不同的条带，加入RXRβ抗体可产生新的上移条带。结论：改良后的凝胶阻滞法较简单灵敏，可用于核蛋白-DNA结合的检测。

PPAR γ在子宫内膜癌中的研究进展

过氧化氢酶增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)是细胞核雌激素受体家族成员,包括PPARα、β/δ和γ。PPARγ参与脂肪与碳水化合物的代谢过程,因与多种代谢性疾病及肿瘤形成密切相关而成为研究的热点。PPARγ是配体依赖的转录因子,与子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭和转移有关,但在子宫内膜癌中的研究较少,且具体作用机制尚不明确。综述PPARγ在子宫内膜癌相关的研究进展,旨在探讨PPARγ参与子宫内膜癌发生发展的机制,为临床后续的抗肿瘤治疗提供理论依据。

PPARγ和RXR激动剂抑制人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性和其mRNA的水平

目的 探讨过氧化酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和维甲类X受体 (RXR)激动剂对人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性的调节作用。方法 测定人卵巢颗粒细胞 (KGN)在PPARγ激动剂曲格列酮、吡格列酮和前列腺素J2 以及RXR激动剂LG10 0 2 68处理前后芳香化酶活性、雌酮 (E1)的变化以及P45 0芳香化酶 (P45 0arom)mRNA的表达水平。对P45 0arom启动子Ⅱ进行分析 ,以确定PPARγ和RXR是否直接抑制P45 0arommRNA的转录。结果 (1)PPARγ激动剂和RXR激动剂均能显著抑制芳香化酶活性 ,两者结合使用抑制作用进一步增强并且使E1的生成减少 ;(2 )芳香化酶活性的降低与P45 0arommRNA水平下降有关 ;(3 )PPARγ和RXR激动剂对 1.0kb长的P45 0arom启动子Ⅱ控制的荧光素酶蛋白无调节作用。结论 PPARγ和RXR激动剂对人卵巢颗粒细胞的芳香化酶活性和P45 0arommRNA的水平有抑制作用。

孕鼠维生素A缺乏对子代鼠肾发育及肿瘤发生的影响

目的建立维生素A缺乏的孕鼠模型，观察孕鼠维生素A缺乏对子代鼠胚胎发育和肿瘤发生的作用。方法取Wistar雌鼠9只，12周龄，体重200-220g。将其分成2组：①维生素A缺乏饮食组6只，受孕前2周起无维生素A饮食直至产后；②正常对照组3只，给予正常饮食。所有雌鼠喂养2周后与健康Wistar公鼠交配成孕鼠。二组孕鼠产后均给予正常饮食，于哺乳期结束后立即处死。分娩后第二天每组分别随机抽取15只新生子代鼠立即处死。其余子代鼠生后给予正常饮食，至生后365d处死、解剖（如发现中途死亡，即刻解剖）。观察二组大鼠产子情况、新生子代鼠血清维生素A浓度、新生子代鼠肾发育形态、子代鼠肿瘤发生率和组织中RxRamRNA表达。结果维生素A缺乏饮食组孕鼠产子代鼠51只；正常对照组孕鼠产子代鼠44只。维生素A缺乏饮食组的新生子代鼠血清维生素A浓度为（0．51±0．13）μmol／L，明显低于对照组的新生子代鼠的血清维生素A浓度（0．81±0．15）μmol／L，P=0．000。二组新生子代鼠中均未发现肿瘤组织，但维生素A缺乏饮食组的新生鼠组织中未成熟的肾小球和。肾小管较对照组多见。维生素A缺乏组的新生子代鼠双肾中肾源性剩余检出率为60．0％，明显高于对照组（26．7％，P=0．018）。维生素A缺乏饮食组子代鼠36只，1只中途死亡，肾母细胞瘤发生率13．9％。对照组的子代鼠无肿瘤发生。维生素A缺乏饮食组子代鼠肾源性剩余检出率30．6%，明显高于对照组子代鼠肾源性剩余检出率（6．9％，P=0．001）。子代鼠中肾母细胞瘤组织的RXRamRNA表达强度为（3．17±0．15），明显低于对照组肾脏组织中RXRαmRNA表达强度（3．58±0．20），P=0．000。结论大鼠孕期维生素A缺乏会导致子代鼠。肾发育差，肾源性剩余增加，肾母细胞瘤发生率增高。维生素A可能通过上调RXRαmRNA的表达来促进肾脏分化和降低肿瘤发生。