维甲酸和维甲类X受体各亚型基因在原发性肝癌组织中表达

目的 维甲类药物的分化诱导作用受特定组织表达受体的影响 ,了解肝癌组织表达维甲酸受体和维甲类X受体的表达 ,以便选择特异的维甲类药物治疗肝癌。方法 根据GeneBank的序列 ,设计对RARα、RARβ、RARγ、RXRα、RXRβ、RXRγ基因的 6对引物 ,用RT PCR的方法检测 18例肝癌组织和相应癌周肝硬化组织这些基因的表达。结果 这些基因在肝癌组织表达率分别为 44 4% (8/18) ,16 7%(3/18) ,77 8% (14/18% ) ,88 9% (16 /18) ,77 8% (14/18) ,16 7% (3/18) ;癌周肝硬化组织分别为 2 7 8% (5 /18) ,0 % (0 /18) ,6 1 1% (11/18) ,77 8% (14/18) ,5 5 6 % (10 /18) ,0 % (0 /18)。这些受体亚型表达的阳性率在肝癌组织似高于癌周肝硬化组织 ,但统计学无显著意义 (P >0 0 5 )。以 β actin为内标测定RARs和RXRs的相对表达量 ,RXRβ相对表达量高于癌周肝硬化组织 (配对秩和检验 ,P =0 0 2 0 8)。结论 由于肝癌组织表达有RARs和RXRs,提示除了应用全反式维甲酸治疗肝癌外 ,尚探讨RXRs选择性维甲类药物治疗价值。

维甲类化合物构效关系研究-──维甲X受体特异性配体的二维和三维定量构效关系研究

定向地设计作用于特定受体的维甲配体分子对于阐明维甲作用的分子机制、合成新作用类型的维甲类化合物有重要意义。本文在研究系列维甲Ｘ受体特异性配体的二维与三维构效关系的基础上，考察了维甲Ｘ核受体对其配体的结构及电性需求，以进一步指导设计和合成特异性的维甲Ｘ受体激动剂。

维甲类X受体与维甲酸反应元件β_2RARE结合的研究

目的 :确定人真皮成纤维细胞中维甲类 X受体 ( RXR)与维甲酸反应元件 ( β2 RARE)的结合。方法 :培养成纤维细胞 ,反式维甲酸 ( At- RA)刺激细胞不同时段 ,抽提核蛋白 ,3 2 P标记β2 RARE作为探针 ,并加入 RXRα和β抗体 ,进行凝胶阻滞分析。结果 :对照组细胞核蛋白与β2 RARE形成复合体 ;At- RA刺激细胞后 ,迅速诱导产生明显的复合体 。选择两组核蛋白 (对照组和 At- RA刺激 4 h组 ) ,分别加入 RXRα和 β抗体 ,凝胶阻滞分析发现 RXRβ抗体可使这两组核蛋白产生新的上移复合体 SS,RXRα抗体则无此作用。结论 :RXRβ能与 β2 RARE结合 ,它们的结合不受 AT- RA的影响 ;提示 RXRβ可能是作为一辅助因子参与了 RARβ2

维甲类X受体研究现状

维甲类X受体(Retinoid X Receptor,RXR)是继维甲酸受体(RAR)之后发现的又一类核受体,它的配体9-顺式维甲酸也是新发现的又一种维甲类生理活性物质。本文就维甲类X受体及其配体的最新研究进展作一综述,并就其在血液学中的研究前景作一简要展望,以推动血液学在这一新领域的深入研究。

寻常性银屑病患者表皮中维A酸类X受体α表达模式研究

目的:研究维A酸类X受体α(RXRα)在寻常性银屑病患者表皮角质形成细胞中的表达和意义。方法:采用免疫组化方法(SP法)检测RXRα在5例正常人表皮、17例寻常性银屑病患者皮损、非皮损表皮中的表达,并用图像分析方法进行半定量分析。结果:RXRα在正常人表皮角质形成细胞中呈细胞核表达;在银屑病非皮损及皮损表皮中的表达面积均较正常人明显增加(P<0.01),并伴随着由胞核向胞膜的移位;而RXRα在银屑病皮损中的表达强度较非皮损明显下降(P<0.001)。结论:RXRα在表皮的正常角化以及稳态维持中可能发挥一定作用。在银屑病表皮中,RXRα由细胞核移位至细胞膜,其表达强度的下降,尤其是细胞核中表达的缺失,可能是使银屑病表皮失去正常生长分化调控的重要原因。

维甲酸类受体、PKC-α在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨维甲酸类受体(RAR-α、RAR-β、RAR-γ;RXR-α、RXR-β、RXR-γ)及蛋白激酶C-α(PKC-α)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其临床意义。方法采用组织芯片和免疫组化法分析90例ESCC患者的癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织中维甲酸类受体、PKC-α的表达情况。结果①RAR-α、RAR-β、RAR-γ、RXR-α、RXR-β、RXR-γ、PKC-α在ESCC中的阳性表达率分别是35.6%、31.1%、20.0%、58.9%、36.7%、51.1%、62.2%,在正常食管黏膜组织中的阳性表达率分别是42.2%、53.3%、16.7%、46.7%、72.2%、55.6%、44.4%,其中RAR-β、RXR-β在ESCC中呈低表达,PKC-α呈高表达,表达差异有统计学意义(P<0.05),其余4种维甲酸类受体在ESCC与正常食管黏膜之间的表达差异无统计学意义。②RAR-β、RXR-β的表达随着肿瘤分化程度的降低而减少(P<0.01),在有淋巴结转移组中RAR-β表达低于无淋巴结转移组(P<0.05)。RXR-β在临床TNM分期较晚的组(Ⅲ～Ⅳ期)中表达低于分期较早的组(Ⅰ～Ⅱ期)(P<0.05)。PKC-α在临床TNM分期较晚的组(Ⅲ～Ⅳ期)中表达高于分期较早的组(Ⅰ～Ⅱ期)(P<0.05)。结论 RAR-β、RXR-β的低表达及PKC-α的高表达可能与ES-CC的发生、发展、预后密切相关。

维甲化合物与维甲X受体相互作用模拟及QSAR研究

用分子对接确定了一系列RXR激动剂与受体的作用方式,与X衍射测得的晶体复合物中9-cis-RA的作用方式相近.对接后的配体-受体复和物经分子力学优化后更接近药效构象,两者相互作用能与活性具有一定的相关性,相关系数R2=O.64.用活性构象建立的CoMFA模型比低能构象建立的CoMFA模型有更高的可信度,其交叉验证相关系数q2=0.791,非交叉验证相关系数r2=0.988,绝对误差SE=0.099,F6,33=456.8.

维甲酸类受体与食管癌的研究进展

食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,其发病率逐年提高,确诊即是进展期,预后差[1-3].在我国,每年约有15万人死于食管癌,病死率仅次于肺癌、胃癌、肝癌,居第4位.食管癌的发生、发展过程涉及大量基因表达水平的改变,包括细胞周期调控发生改变,DNA修复,核受体改变等.其中核受体改变就有维甲酸类受体（retinoic aid receptors, RARs）,RARs与食管癌的发生、发展关系密切.1999年Xu等[4]首次研究了RARs与食管癌的关系,指出食管癌的发生可能与维甲酸（retinoicoid, RA）β受体表达缺失有关.近年来已受到国内外学者重视,陆续有文献报道RARs在食管癌的发生、发展中的作用,本文就此进行综述.

激动核受体RXR对大鼠心肌细胞饥饿损伤中自噬和凋亡的双重调控作用

目的探讨激动维甲类X受体(RXR)对大鼠心肌细胞无糖无血清(SGD)饥饿状态下的调控作用及其机制。方法将大鼠心肌细胞株H9c2置于无糖DMEM中培养6h,建立饥饿模型。用9-顺式维甲酸(c-RA)为RXR激动剂,HX531为RXR拮抗剂,并将细胞实验按以下分组:对照组(C组)、SGD干预组(SGD组)、SGD+100nmol/L c-RA干预组(RA组)、SGD+100nmol/L c-RA+2.5μmol/L HX531干预组(HX组),MTT法检测细胞活性,流式细胞法检测细胞凋亡比例及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3活力,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9蛋白表达,以及自噬相关蛋白LC3、Beclin 1表达,透射电镜检测心肌细胞自噬小体。结果与C组比较,SGD组和HX组心肌细胞活力均下降,凋亡百分比、Bax/Bcl-2比值和Caspase-9蛋白水平均上升(均P<0.01);与SGD组比较,RA组心肌细胞活力均上升,凋亡百分比、Bax/Bcl-2比值和Caspase-9蛋白水平均下降(均P<0.01)。SGD组平均荧光强度(MFI)波峰明显右移,为C组的2.3倍(P<0.01);而RA波峰出现明显左移,MFI值仅为C组的1.3倍,明显低于SGD组(P<0.01);HX组波峰与SGD组相似,MFI值显著高于C组(P<0.01)。透射电镜下观察到C组中细胞质内细胞器完整,而SGD组和HX组自噬小体数增加,内含有被吞噬的线粒体等结构,部分呈空泡样改变,同时自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值上升,Beclin 1表达增加(均P<0.01);RA组心肌细胞自噬小体数量明显减少,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值下调,Beclin 1蛋白表达水平降低(均P<0.01)。结论激动核受体RXR可以保护心肌细胞SGD状态下的损伤,其机制与对凋亡和自噬通路的双重调控作用有关。

中华绒螯蟹RXR基因全长cDNA克隆及表达分析

根据陆地蟹RXR基因保守区序列设计上下游引物,采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)以及cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆中华绒螯蟹RXR基因并进行各组织间的表达分析。序列分析表明,中华绒螯蟹RXR cDNA全长1 517 bp,编码433个氨基酸。经BLASTn和BLASTx分析表明,中华绒螯蟹RXR基因的氨基酸序列与陆地蟹RXR基因的氨基酸序列相似性最高,为96%。系统进化树分析显示,中华绒螯蟹RXR的氨基酸序列与陆地蟹RXR聚为一支。荧光定量PCR结果显示,RXR在所有检测的组织中均有表达,且在中华绒螯蟹Y器官中表达量最高,肝胰腺、鳃和肌肉中少量表达,心脏、胃、肠、胸神经节和脑神经节中微量表达。在中华绒螯蟹不同的蜕皮时期,Y器官中RXR表达量在D期最高,与AB期、C期呈显著性差异(P<0.05);肌肉中RXR在AB期表达量最高,与其他蜕皮时期呈显著性差异(P<0.05);肝胰腺和鳃中RXR在AB期表达量最高,E期表达量最低,但各蜕皮时期表达量之间差异不显著。

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)RXR基因克隆及其在蜕皮过程中的表达分析

本研究通过转录组测序和RACE技术克隆了三疣梭子蟹类维甲酸X受体2(PtRXR2)基因cDNA全长(登录号:KF914662),并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)技术研究了该基因在三疣梭子蟹不同组织及不同蜕皮阶段的表达情况。结果表明,(1)PtRXR2基因cDNA全长1718bp,包括5’非编码区(5’-UTR)141bp、3’-UTR 209bp和开放阅读框1368bp,编码455个氨基酸,预测分子量和等电点为49.75kDa和6.79。(2)PtRXR2推导氨基酸序列的Blastp结果显示,PtRXR2与已知甲壳动物RXR的一致性为74%—99%,系统进化树分析表明PtRXR2与其它甲壳动物RXR聚为一支。(3)qRT-PCR结果显示PtRXR2在C期三疣梭子蟹Y器官、鳃、眼柄和大颚器中表达水平较高,肝胰腺中的表达水平最低。其它6个组织中的表达水平居中。(4)不同蜕皮阶段,PtRXR2在Y器官、眼柄和胸神经中均是AB期表达水平最高,E期最低,这可能与上述器官的细胞增殖主要发生在AB期有关;肌肉中的PtRXR2表达水平在AB和C期较高,E和D期最低,与肌肉的生长和营养物质积累主要发生在这两个阶段相对应;肝胰腺中的PtRXR2表达水平在AB期最高,C期最低,这暗示PtRXR2主要参与肝胰腺中的上皮细胞增殖和分化,对于C期的营养代谢调控可能不起关键作用。

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231诱导分化作用及可能的机制研究

目的观察4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-anino-2-trifluoromethyl-phenyl retimate,ATPR)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231抑制增殖诱导分化作用,探讨其可能的作用机制。方法体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT检测细胞增殖,绘制细胞生长曲线,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态变化,酶联免疫法检测粘蛋白MUC-1活性,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测维甲酸受体(retinoic acid receptors,RAR)RARα、RARβ、RARγ和维甲类受体(retinoid X receptors,RXR)RXRα、RXRβ、RXRγ基因和蛋白的表达。结果 ATPR能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,具有浓度-时间依赖性,染色后镜下观察MDA-MB-231细胞生长密度降低,形态趋于正常。ELISA结果显示,ATPR作用后明显降低MDA-MB-231细胞培养上清中MUC-1的浓度;流式细胞术结果显示,MDA-MB-231细胞中G0/G1期表达量增加,S期表达量减少,细胞阻滞在G0/G1期比例增加。q-RT-PCR和Western blot结果显示,ATPR作用后,RARγ的mRNA和蛋白表达水平降低,RXRs mRNA和蛋白水平无明显变化。结论 ATPR可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖并诱导其分化,其机制可能与RARγ的表达有关。

RXRγ、RARβ在9-cis-RA抑制人胃癌SGC7901细胞生长中的作用

目的:探讨维甲类X受体(RXR)γ、RARβ在RXR激动剂9-顺维甲酸(9-cis-RA)抑制人胃癌SGC7901细胞生长中的作用。方法:体外培养SGC7901细胞给予9-cis-RA干预,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、HE染色、免疫组化染色、Western-blot检测9-cis-RA作用后SGC7901细胞生长情况、凋亡率、细胞周期的改变、RXRγ及RARβ表达情况。结果:SGC7901细胞与9-cis-RA共同培养48h后,肿瘤细胞生长受到抑制,其作用具有浓度及时间依赖性。流式细胞仪检测显示处于G0/G1期的细胞增多,凋亡率增高,免疫组化及Western-blot检测显示20μmol/L的9-cis-RA作用72h后,RXRγ、RARβ蛋白表达增加。结论:9-cis-RA可通过上调RXRγ、RARβ蛋白表达诱导细胞凋亡从而抑制人胃癌SGC7901细胞生长。

ATRA对肺腺癌A549细胞RXRα及CAV1表达和分布的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对肺腺癌A549细胞维甲类X受体α(RXRα)、小窝蛋白1(CAV1)表达和分布的影响。方法 MTT法检测ATRA对A549细胞增殖的影响;免疫荧光法检测RXRα、CAV1在A549细胞中的表达和分布;Western blot法检测ATRA处理A549细胞后对RXRα、CAV1表达的影响。结果 ATRA可抑制A549细胞增殖并呈剂量依赖性;ATRA处理A549细胞3 d后,RXRα表达降低并有向细胞核集中的现象,CAV1表达量降低且在胞膜分布增加。结论 ATRA可抑制A549细胞增殖并影响RXRα和CAV1的表达和分布,下调RXRα和CAV1在A549细胞中的表达并分别使其向核内和胞膜转移,从而可能参与调控细胞增殖。

激动维甲类X受体抑制心肌细胞缺氧／复氧损伤

目的探讨激动维甲类X受体（retinoid X receptor，RXR）对大鼠心肌细胞H9c2缺氧／复氧（ hypoxia-reoxygenation, H/R）损伤的保护作用及其机制。方法将心肌细胞缺氧2h／复氧4h，建立H／R损伤模型。以9-顺式维甲酸（9-cis retinoid acid, c-RA）为RXR激动剂，HX531为RXH拮抗剂，实验随机（随机数字法）分4组：健康对照组（N组）、H／R损伤组、H／R＋100nmoL／Lc-RA组（RA组）、I-I／R＋100nmo]／Lc—RA＋2．5ixmoL／LHX531组（HX组），MTT法检测细胞活性，流式细胞技术检测细胞凋亡比例，荧光探针JC-1测定线粒体膜电位，Westernblot印迹法检测Bcl-2、Bax及活性片段Caspase-9蛋白表达。所有计量资料以均数±标准差（i±5）表示，采用单因素方差分析，Dennett-t检验，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果c-RA明显抑制H／R损伤引起的细胞活性下降、凋亡增加、线粒体膜电位下降，Westernblot印迹检测发现，H／R损伤组Bax、Caspase-9活性片段蛋白表达明显增加，Bcl-2表达明显下降，c—RA预处理后能明显下调Bax、Caspase-9活性片段蛋白表达及上调Bcl-2表达，而所有这些保护作用均被RXR拮抗剂HX531阻断。结论激动核受体RXR可以保护心肌细胞H／R氧化应激损伤，其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。

激动维甲类X受体抑制过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨维甲类X受体（retinoid X receptor，RXR）激动剂9-顺式维甲酸（9-cis retinoid acid，c-RA）对过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）诱导的体外培养大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法以培养的新生Sprague-Oawley（SD）大鼠心肌细胞为实验对象，随机分为三组：正常对照组（N组）、100μmol／L H2O2刺激组（H组）和100nmol／L c-RA干预组（H＋R组）。应用MTF法检测细胞活力，以Hoechst 33258荧光染色观察凋亡细胞，流式法检测细胞凋亡比率，JC-1荧光染色法检测细胞线粒体膜电位（△Ψm）变化，CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平。所有计量资料以均数±标准差（-↑x±s）表示，采用单因素方差分析，Dunnett-t检验，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果c-RA明显增强H2O2刺激后的心肌细胞活力，减少凋亡比例，稳定线粒体膜电位，减轻细胞活性氧产生。结论RXR受体激动剂c-RA能够部分抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡，其机制可能与减轻细胞氧化应激损伤有关。

β-淀粉样蛋白影响维甲类X受体α到细胞质的穿梭

目的 探讨β-淀粉样蛋白（Aβ）对维甲类X受体α（RXRα）生成及到细胞质迁移的影响。方法 将野生型小鼠脑神经瘤细胞（N2awt）分为对照组和实验组，采用Aβ短肽及淀粉样肽前体蛋白（APP）695过表达处理实验组，应用核质分离结合Western blot方法，检测RXRα在细胞核和细胞质中的含量；分别对上述2组N2awt细胞及阿尔茨海默病（AD）患者及健康对照者的脑组织切片进行免疫荧光定位染色，观察RXRα在细胞核与细胞质中分布的改变。结果 在N2awt细胞中，APP或Aβ增多不影响RXRα的表达但导致RXRα在细胞质中含量与分布增多，分别从对照组的3.2％增加至APP处理组的17.6％及从对照组的3.8％增加至Aβ处理组的14.3％；与健康人比较，AD患者脑皮质细胞中RXRα在细胞质分布增加。结论 Aβ可能影响RXRα到细胞质的穿梭。

维甲类受体亚型化合物对NB4细胞增殖分化作用及分子机制研究

目的 探讨RARβ特异性激动剂 /RARα特异性拮抗剂 (RARβ +/RARα - )BMS45 3与RXR特异性激动剂 (RXR +)BMS6 49对NB4细胞增殖、分化作用及分子机制。方法 应用细胞计数法、细胞形态学观察、硝基四氮唑蓝 (NBT)还原试验、间接免疫荧光、流式细胞仪、RT PCR等方法对药物处理不同时间的NB4细胞进行研究。结果 BMS45 3+BMS6 49对NB4细胞的生长具有剂量依赖性抑制作用 ;明显诱导NB4细胞向粒系成熟方向分化 ;药物作用NB4细胞 0 ,1,3,12 ,2 4,48h ,RARα基因表达在 1h开始上调 ,RARβ基因表达在 3h开始上调 ,RXRα基因表达在 3h开始上调 ;与全反式维甲酸 (ATRA)相比差异无显著性。BMS45 3和BMS6 49单用对NB4细胞系无此作用。结论 RARβ +/RARα -这一维甲类受体亚型化合物与RXR激动剂联合应用抑制NB4细胞生长并诱导NB4细胞分化成熟 ,二者具有协同作用 ,其作用机制可能通过RXRα的AF

金丝桃素通过抑制核受体RXR转录激活功能诱导癌细胞凋亡的研究

目的:研究金丝桃素对肿瘤细胞的诱导凋亡作用。方法:检测金丝桃素对维甲类X受体(RXRα)的转录活性的调控,并研究金丝桃素对乳腺癌细胞MCF-7和人皮肤基底癌细胞A431凋亡的作用。结果:金丝桃素对2种癌细胞有很强的诱导凋亡的作用,加入RXRα的天然配体9-顺视黄酸(9cis-RA)共同处理会缓解这种细胞凋亡作用。报告基因实验发现金丝桃素对RXRα同源和异源二聚体的转录激活有抑制作用。蛋白免疫印迹实验发现金丝桃素能够降低RXRα蛋白的表达。结论:金丝桃素具有诱导乳腺癌细胞MCF-7和人皮肤基底癌细胞A431凋亡的作用。金丝桃素抑制9cis-RA对RXR转录激活作用以及9cis-RA一定程度地拮抗金丝桃素对乳腺癌细胞MCF-7和人皮肤基底癌细胞A431的凋亡,是通过调控RXRα的蛋白表达,并以RXR转录非依赖性的方式起作用。