胃癌维甲酸信号通路相关基因启动子区协同高甲基化的研究

背景:启动子区高甲基化与胃癌中多种抑癌基因表达沉默密切相关。目的:探讨维甲酸信号通路相关基因维甲酸受体β(RARβ)、细胞维生素A结合蛋白1(CRBP1)和他扎罗汀诱导基因1(TIG1)启动子区高甲基化与胃癌的关系。方法:以甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测40例胃癌标本、10例正常胃黏膜标本和6株胃癌细胞株的RARβ、CRBP1和TIG1基因启动子区甲基化状态,分析三者甲基化状态的相关性及其与胃癌临床病理特征的关系。以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌细胞株RARβ、CRBP1和TIG1 mRNA表达。结果:40例胃癌组织的RARβ、CRBP1和TIG1基因甲基化率分别为45.0%、32.5%和57.5%,10例正常胃黏膜组织均未检测到上述基因甲基化(P<0.05)。胃癌组织中RARβ的甲基化状态与CRBP1和TIG1的甲基化状态显著相关(P<0.05),但三者的甲基化状态与胃癌临床病理特征无相关性。启动子区高甲基化胃癌细胞株相应基因mRNA表达缺失或减弱。结论:胃癌组织常发生维甲酸信号通路相关基因RARβ、CRBP1和TIG1启动子区高甲基化,高甲基化可能是相应基因转录失活的重要原因。

TGIF对胃癌细胞株SGC-7901的维甲酸信号通路的影响

目的:探讨TG-相互作用因子(TGIF)对胃癌SGC-7901 细胞株中维甲酸信号通路的影响．方法:在TGIF表达质粒稳定转染SGC-7901细胞后,用 Western blot鉴定高表达TGIF的阳性克隆．在TGIF反义寡核苷酸瞬时转染SGC-7901细胞株后,用RT-PCR检测转染效率．再用1 μmol／L ATRA分别处理稳定转染组或瞬时转染组及其对照组细胞,MTT观察细胞增殖速度的变化,流式细胞术观察细胞凋亡率的变化．结果:稳定转染TGIF表达质粒和瞬时转染TGIF反义寡核苷酸对SGC-7901细胞的增殖和凋亡没有明显影响．但在ATRA作用后,TGIF表达质粒转染组细胞的增殖速度比未转染组和空白质粒转染组细胞快(0．434± 0．035 vs 0．386±0．020,0．360±0．014,P<0．05),而细胞的凋亡率的变化比未转染组和空白质粒转染组细胞小,仅由1．14％增加至1．39％．TGIF反义寡核苷酸转染组细胞的增殖速度比未转染组和突变寡核苷酸转染组细胞慢(0．320±0．044 vs 0．388±0．024,0．409±0．041, P<0．05)．而细胞凋亡率的变化比后两组大,由3．09％上升至10．2％．结论:TGIF能拮抗ATRA抑制SGC-7901细胞增殖和诱导其凋亡的作用,TGIF可能参与了对SGC-7901细胞的维甲酸信号通路的抑制．

全反式维甲酸对骨肉瘤细胞143B生长的影响

目的研究全反式维甲酸对143B骨肉瘤细胞生长的抑制作用及可能的机制。方法利用RT-PCR(ReverseTranscription Polymerase Chain Reaction)和Western blot检测RAR和RXR在骨肉瘤细胞143B和MG63的内源性表达。通过细胞计数证实全反式维甲酸抑制143B细胞生长,利用凋亡染色和Western blot,检测全反式维甲酸是否诱导143B细胞凋亡;利用萤光素酶报告质粒测定成骨分化早期转录调节因子Runx2的转录活性,用Western blot检测骨桥素和骨钙素的表达,确证全反式维甲酸对143B细胞成骨分化不同时期标志物的影响。结果 RAR及RXR在骨肉瘤细胞143B和MG63中均存在内源性表达。全反式维甲酸能明显呈浓度依赖性抑制143B骨肉瘤细胞的生长;全反式维甲酸处理后,Caspase-3蛋白水平增加,且凋亡染色出现明显阳性;全反式维甲酸不仅使Runx2转录活性增加,而且也促进骨桥素和骨钙素的表达。结论全反式维甲酸能明显抑制143B骨肉瘤细胞生长,这种作用至少与其通过维甲酸信号通路促进143B细胞成骨分化有关。

RLR信号通路在病毒感染中作用机制研究进展

固有免疫反应构成了机体免疫系统的第一道防线,在抵抗病毒感染的过程中发挥着重要作用。在此过程中宿主细胞通过模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)识别侵入的病原微生物的病原体相关分子模型(pathogen associated molecular pattern,PAMP),激活下游信号级联反应,诱导宿主细胞释放促炎症细胞因子及Ⅰ型干扰素,抑制病毒的复制及感染。其中,维甲酸诱导基因Ⅰ受体(RIG-Ⅰlike receptors,RLR)定位于胞浆,是识别胞浆中病毒RNA的主要受体,在抗病毒固有免疫反应起着非常重要的作用。本文就RLR信号通路在病毒感染中作用机制的研究进展作一综述。

辣木叶醇提物通过LXR-α/RXR信号通路调节ZDF大鼠肝脏SREBP-1c蛋白表达的研究

目的:探究辣木叶醇提物对ZDF大鼠肝脏肝X受体α(LXR-α)/维甲酸受体(RXR)信号通路及固醇原件调节蛋白1c(SREBP-1c)蛋白表达的影响。方法:雄性已诱导的高血糖ZDF(fa/fa)大鼠24只随机分为模型组、低剂量组、高剂量组,每组8只,同窝ZL对照8只为正常组。高、低剂量组予600、300mg/kg辣木叶醇提物水溶液灌胃,其余两组大鼠予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。干预6周后处死大鼠,留取血清检测血糖、血脂、游离脂肪酸,肝脏组织-80℃冻存,RT-PCR检测大鼠肝脏LXR-α、RXR、SREBP-1c mRNA转录情况,蛋白印迹法检测大鼠肝脏SREBP-1c蛋白表达情况。结果:低、高剂量组大鼠血糖、体质量、总胆固醇(CHO)、空腹胰岛素水平、HOMA-IR均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01);低剂量组甘油三酯(TG)水平低于模型组(P<0.05),高剂量组游离脂肪酸水平低于模型组(P<0.05);与模型组比较,高、低剂量组肝脏LXR-α、RXR、SREBP-1c基因转录显著降低(P<0.05),肝脏SREBP-1c蛋白表达下降(P<0.01)。结论:辣木叶醇提物能显著改善ZDF大鼠糖脂代谢,其机制可能与改善肝脏胰岛素抵抗,下调LXR-α/RXR信号通路,降低SREBP-1c蛋白表达相关。