前列腺特异性启动子rPB的改造及其载体质粒的构建和活性测定

目的 构建一个前列腺特异性的、可启动针对雄激素非依赖性前列腺癌的基因治疗的改良启动子并测定其活性。方法 选择前列腺特异性启动子rPB ,通过两次PCR对其进行改造,用维甲酸反应元件(RARE)替代雄激素反应元件(ARE)或直接插入RARE ,构建成为不同拷贝条件的rPB DR ,并与质粒连接。转染细胞后,进行荧光素酶活性测定。结果 通过电泳鉴定及基因测序,证实构建成功。结论 根据实验设计,构建出的rPB DR应具有在维甲酸的调控下,针对雄激素非依赖性前列腺癌特异性启动基因治疗的功能,现构建成功不同拷贝条件的rPB DR ,证实实验设计构想,同时通过活性测定比较各种拷贝条件的rPB DR启动子活性的优劣,为下一步与治疗基因的连接及功能测定奠定基础。

具有前列腺癌特异性的启动子rPB-DR的活性测定

目的测定本组构建的一个前列腺特异性的、可启动针对雄激素非依赖性前列腺癌的基因治疗的改良启动子rPB-DR的活性。方法将已构建的4种不同拷贝条件的rPB-DR,与质粒连接,转染细胞后,进行荧光素酶活性测定。结果测定结果显示用维甲酸反应元件(RARE)替代雄激素反应元件(ARE)或直接插入RARE,保持了该启动子的活性。结论根据实验设计,构建出的rPB-DR应具有在维甲酸的调控下,针对雄激素非依赖性前列腺癌特异性启动基因治疗的功能,现构建成功不同拷贝条件的rPB-DR,通过活性测定证实了实验设计构想,也比较了各种拷贝条件的rPB-DR启动子活性的优劣,为下一步与治疗基因的连接及功能测定奠定基础。