辅助性T细胞17/调节性T细胞及维甲酸相关孤儿受体γt/叉头框转录因子P3失衡在妊娠相关疾病中的研究进展

在免疫学领域,妊娠相当于一次成功的半同种移植现象,母体对半异体胎儿的免疫耐受情况关乎妊娠的结局。辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)是最新发现的CD^(+)_(4)T淋巴细胞亚群,相关转录因子维甲酸相关孤儿受体γt和叉头框转录因子P3的表达水平与Th17/Treg之间的平衡密切相关。Th17/Treg免疫失衡会导致母体对胎儿的异常攻击,造成母胎耐受紊乱,并与复发性流产、先兆子痫、妊娠糖尿病等病理妊娠有关。

莪连颗粒对胃癌种植瘤裸鼠肿瘤生长及维甲酸相关孤核受体γt表达的影响

目的:探讨莪连颗粒对胃癌种植瘤裸鼠肿瘤生长及维甲酸相关孤核受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptorγt,RORγt)表达的影响。方法:构建裸鼠人胃癌SGC-7901种植瘤模型,实验组予莪连颗粒灌胃,对照组予生理盐水灌胃。灌胃28天后处死小鼠并测定种植瘤体积及瘤重,计算抑瘤率。采用Western-Blot法检测肿瘤组织中RORγt表达。结果:实验组小鼠瘤重及肿瘤体积均低于对照组,抑瘤率为53.3%;实验组肿瘤组织RORγt表达较对照组减少。结论:莪连颗粒可抑制胃癌肿瘤生长,该作用可能与其抑制RORγt表达,减轻由辅助性T细胞17介导的免疫调节有关。

不同肺癌细胞RARγ受体转录水平对9-顺维甲酸诱导的反应

目的检测用9-cis-RA处理前后肺腺癌细胞株PG和A549维甲酸受体RARγ不同时相的表达变化。方法将两细胞株分别分为9-cis-RA组和对照组,应用细胞计数方法统计每组各时相细胞数,相对定量RT-PCR方法检测加药前后RARγ在不同时相的表达变化。结果加入9-cis-RA前,PG和A549细胞RARγmRNA转录水平检测结果显示RARγ在PG细胞株中有一定水平的基础转录,而在A549细胞中无基础转录。应用1uM9-cis-RA后,PG细胞的RARγmRNA的转录水平受到抑制,而A549细胞的RARγ的转录水平在各时相有较弱的诱导表达。结论RARγ受体对9-cis-RA的诱导在不同细胞株中的反应不同,表明9-cis-RA对不同肿瘤细胞株的作用存在特异性。

人维甲酸受体RAR α基因在大肠杆菌中的表达

采用Ｔ７ＲＮＡ启动子将ＲＡＲαｃＤＮＡ定向亚克隆至ＰＴ７－７质粒，构建了重组维甲酸受体ＲＡＲα表达质粒ＰＴ７－ＲＡＲα并在大肠杆菌中得到稳定表达。方法（１）载体构建：将ＰＴ７－７，ＲＡＲα分别用ＥｃｏＲⅠ酶切后，电泳回收１．９ｋｂＲＡＲα并与ＰＴ７－...

宽体金线蛭提取物对HEK293细胞维甲酸诱导基因蛋白样受体(RLRs)通路的影响

维甲酸诱导基因蛋白样受体(RLRs)信号通路是机体重要的抗病毒作用途径。宽体金线蛭体内含有抗凝血的活性物质,主要用于治疗血栓等疾病,但对于该信号通路的影响尚无任何报道。本试验目的是采用聚肌苷酸聚胞苷酸(Poly I∶C)建立HEK293细胞RLRs信号通路激活模型,在此基础上揭示宽体金线蛭提取物(LE)对HEK293细胞RLRs信号通路的影响。试验首先转染3个不同质量浓度(1、2、4μg·mL^(-1))的Poly I∶C至HEK293细胞,并分别处理12 h、24 h和48 h,以维甲酸诱导基因I(RIG-I)的蛋白表达水平和mRNA转录水平为RLRs通路激活的指标。RLRs信号通路激活之后,采用LE对HEK293细胞进行处理,共设置4组,每组3个重复,分别为:对照组、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染组、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染且添加150μg·mL^(-1)的水蛭提取物、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染且添加300μg·mL^(-1)的水蛭提取物。处理时长分别为24 h和48 h。试验结果表明,转染3个剂量的Poly I∶C在3个处理时长均引起细胞活力降低,2μg·mL^(-1)和4μg·mL^(-1) Poly I∶C转染HEK293细胞12 h、24 h和48 h均显著提高了RIG-I蛋白的表达量,4μg·mL^(-1)的Poly I∶C转染组RIG-I mRNA转录水平在24 h和48 h显著提高。选择Poly I∶C质量浓度2μg·mL^(-1),处理24 h和48 h作为后续试验激活RLRs的处理条件。质量浓度为150μg·mL^(-1) LE可以显著抑制Poly I∶C介导的细胞活力降低;300μg·mL^(-1)的LE显著降低了RIG-I的蛋白水平;150μg·mL^(-1)和300μg·mL^(-1) LE处理24 h和48 h后均显著抑制了β干扰素的mRNA转录和生成。据此得出如下结论:Poly I∶C转染HEK293细胞成功地激活了RLRs信号通路,宽体金线蛭提取物具有促进HEK293细胞活力和抑制β干扰素生成的作用。

维甲类X受体与维甲酸反应元件β_2RARE结合的研究

目的 :确定人真皮成纤维细胞中维甲类 X受体 ( RXR)与维甲酸反应元件 ( β2 RARE)的结合。方法 :培养成纤维细胞 ,反式维甲酸 ( At- RA)刺激细胞不同时段 ,抽提核蛋白 ,3 2 P标记β2 RARE作为探针 ,并加入 RXRα和β抗体 ,进行凝胶阻滞分析。结果 :对照组细胞核蛋白与β2 RARE形成复合体 ;At- RA刺激细胞后 ,迅速诱导产生明显的复合体 。选择两组核蛋白 (对照组和 At- RA刺激 4 h组 ) ,分别加入 RXRα和 β抗体 ,凝胶阻滞分析发现 RXRβ抗体可使这两组核蛋白产生新的上移复合体 SS,RXRα抗体则无此作用。结论 :RXRβ能与 β2 RARE结合 ,它们的结合不受 AT- RA的影响 ;提示 RXRβ可能是作为一辅助因子参与了 RARβ2

9-顺维甲酸对人肺癌组织RAR_α、RAR_β及RXR_α转录的影响

目的:观察经9-顺维甲酸(9-cis-RA)处理前后肺癌组织和对照肺组织维甲酸受体α?β及维甲酸类受体α转录水平的变化,以进一步探讨维甲酸抑瘤的分子机制?方法:用组织块法培养肺癌组织和对照肺组织,用RT-PCR技术检测RARα?RARβ及RXRα的mRNA水平?结果:肺癌组织的RARα和RXRα基础转录水平高于对照肺组织,而RARβ基础转录水平低于对照肺组织;应用9-cis-RA 24 h后对照肺组织RARα转录水平升高;肺癌组织RARβ转录水平升高(P<0.01),与对照肺组织基础转录水平相近?结论:肺癌组织中RARβ受体表达异常可能与肺癌发生有关;9-cis-RA可诱导肺癌组织RARβ的表达显著升高,达对照肺组织mRNA相同表达水平?

维甲酸相关孤核受体α抵抗小鼠压力负荷型心肌损伤的作用及机制研究

目的探究维甲酸相关孤核受体α(RORα)在小鼠压力负荷引起的心肌损伤中的具体作用。方法通过小鼠主动脉弓缩窄手术(TAC)后8周建立压力负荷型心肌损伤模型。实验小鼠分为以下4组:假手术(Sham)+空载病毒(null)处理组(Sham+null组)、Sham+心肌特异性过表达RORα病毒处理组(Sham+RORα组)、TAC+null组、TAC+RORα组。TAC后8周检测心肌RORα表达水平;心脏收缩功能;心肌纤维化指标包括心肌血管周纤维化百分比、组织间隙纤维化百分比、结缔组织生长因子(CTGF)、I型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达水平;心肌肥厚指标包括心脏体重比、心肌细胞平均横截面积、脑钠肽(BNP)表达水平;氧化应激指标包括活性氧(ROS)产量、丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、核因子红系2相关因子2(Nrf2)、超氧化物歧化酶2(SOD2)表达水平;炎症反应指标包括核因子-κ-基因结合(NF-κB)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果与TAC+null组相比,TAC+RORα组小鼠心脏RORα表达水平明显增高;心脏收缩功能显著改善;心肌纤维化指标包括心肌血管周纤维化百分比、组织间隙纤维化百分比、CTGF、CollagenⅠ表达水平显著降低;心肌肥厚指标包括心脏体重比、心肌细胞平均横截面积、BNP表达水平显著降低;氧化应激指标包括心肌ROS生成、MDA含量显著降低,而Nrf2、SOD2表达水平明显增高;炎症反应指标包括心肌NF-κB、TNF-α表达水平显著降低(均P<0.05)。结论心肌特异性过表达RORα处理可通过抑制心肌组织氧化应激和炎症反应、延缓TAC所致的心肌肥厚和心肌纤维化,最终发挥减轻压力负荷型心肌损伤的保护作用。

维甲酸致小鼠胚胎畸形发生过程中维甲酸受体α/β及β-catenin和caspase-3基因的表达变化 (英文)

流行病学研究显示,在胚胎发育过程中摄入过多维甲酸可致各种发育缺陷,其中神经管畸形最为常见. 因此有必要探明维甲酸致各种发育缺陷的发生机制,以便为各种生长缺陷的预防和治疗提供实验依据. 用 RT-PCR 及蛋白质印迹技术,探测了过量维甲酸对昆明小鼠胚胎神经管中维甲酸受体α/β及β-catenin 和 caspase-3 基因表达的调整. 结果显示,在神经管闭合期过量维甲酸显著降低了维甲酸受体α/β及β-catenin 和 caspase-3 的基因表达,神经管闭合后,维甲酸受体β、β-catenin 及 caspase-3 的基因表达又出现了一个明显的回升过程. 提示,过量维甲酸改变了昆明小鼠胚胎神经管中维甲酸受体α/β及β-catenin 和 caspase-3 基因的正常时间表达模式,这种异常的基因表达模式可能参与了维甲酸致昆明小鼠胚胎畸形的发生机制.

骨形态发生蛋白受体2在维甲酸诱导腭裂小鼠胚胎腭突中的表达

目的探讨全反式维甲酸(at RA)对小鼠胚胎腭突中骨形态发生蛋白受体2(BMPR2)表达的影响。方法通过at RA灌胃的方法建立at RA诱导的小鼠腭裂模型,取妊娠15 d(GD15)和17 d的(GD17)的胚胎腭部进行苏木精-伊红染色,并用免疫组织化学及逆转录聚合酶链式反应技术检测BMPR2在胚胎腭部的表达。结果 at RA诱导小鼠形成体积较小的畸形腭突和明显的中缝腭裂畸形。BMPR2在GD15和GD17正常胚胎腭部有高水平的阳性表达,但在腭裂胚胎腭部的表达水平明显减弱。正常胚胎腭部Bmpr2 m RNA在GD15和GD17的表达水平均明显高于腭裂胚胎(P<0.05)。结论 at RA可导致小鼠胚胎腭突发育不良形成腭裂,并显著下调BMPR2表达水平,从而影响腭部发育的正常分子调控过程。

联合检测维甲酸受体α、β及雌孕激素受体在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:通过检测子宫内膜癌组织中维甲酸受体α、β(RARα、β)、雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)的表达情况,探讨维甲酸受体和雌孕激素受体与子宫内膜癌的手术病理分期、组织学分类及肌层浸润的关系。方法:收集手术病理确诊的子宫内膜癌的石蜡切片48例,用免疫组化技术检测RARα、RARβ、ER及PR的表达,评估其与临床病理参数之间的关系。结果:①RARα及RARβ的阳性表达率分别为47.92%(23/48)、25.00%(12/48),RARα的表达高于RARβ(P<0.05)。②随着手术病理分期的增加,RARα的阳性表达率逐渐增加(P<0.05),随着组织分化程度的增加,RARα的阳性表达率却逐渐下降(P<0.05),但与组织学类型、肌层浸润深度无关(P>0.05)。③RARβ、ER和PR的表达随着组织分化程度的降低而减少(P<0.05;P<0.01;P<0.05),但与手术病理分期、组织学类型、肌层浸润深度无关(P>0.05)。④ER、PR表达率随着RARβ的阳性表达率增高而增高,随着RARα的表达率增高而降低。结论:子宫内膜癌中存在RARα、RARβ的表达,RARβ的表达缺失及RARα的高表达与子宫内膜癌的组织分化程度有关。ER、PR的表达和RARα、RARβ表达有明显的互补性。

维甲酸诱导前后异维甲酸受体α在银屑病中的变化

目的 研究他扎罗汀治疗进行期寻常型银屑病前后异维甲酸受体α(RXRα)的变化 ,并探讨其作用机制。方法 用原位杂交的方法检测进行期银屑病皮损用药前后RXRαmRNA的表达。结果 在银屑病皮损中 ,可见基底层和基底上层RXRαmRNA的表达 ,他扎罗汀治疗后可见RXRα表达于表皮全层 ,基底上层有显著上升的趋势 (P<0 .0 1)。结论 他扎罗汀通过促进RARγ RXRα的结合 ,上调银屑病表皮基底上层中RXRα的表达 ,抑制表皮角质形成细胞的增殖并诱导凋亡。

9-顺维甲酸诱导的肺癌细胞RXR_S受体转录水平的变化

目的 :检测用 9 cis RA处理前后肺腺癌细胞株PG和A54 9维甲酸受体RXRS 不同时相的表达变化。方法 :将两细胞株分别分为 9 cis RA组和对照组 ,应用细胞计数方法统计每组各时相细胞数 ,相对定量RT PCR方法检测组加药前后RXRS 各亚型在不同时相的表达变化。结果 :加入 9 cis RA后 ,PG和A54 9细胞RXRSmRNA转录水平检测结果显示 :(1)RXRγ 在两细胞株中均有一定水平的基础转录 ,而RXRα、RXRβ 均无基础转录。 (2 )应用 1uM 9 cis RA后 ,两细胞株的RXRγ 有短暂增高 ,其余受体转录无明显变化。结论 :RXRγ 可能参与介导 9 cis

全反式维甲酸诱导NB4细胞分化过程中IL-3受体系统表达变化

IL-3受体(IL-3R)是异源二聚体膜受体,由相应的α亚基(IL-3Rα,GM-CSFRα,IL-5Rα)和β共同亚基(hβc)组成,α亚基能够特异性与相应的配体结合,β共同亚基通过与相应α亚基组成高亲和力的受体,传递细胞信号,调节造血祖细胞的增殖与分化。为研究IL-3受体系统(IL-3Rα,GM-CSFRα和hβc)在髓系分化中的作用,采用实时定量RT-PCR检测全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞分化过程IL-3Rα,GM-CSFRα和hβc的表达变化,同时应用DNA序列分析检测IL-3Rα,GM-CSFRα和hβc mRNA序列变化。结果显示:全反式维甲酸处理NB4细胞后,细胞发生分化,同时细胞增殖受抑制。ATRA作用24小时NB4细胞IL-3Rα mRNA表达水平显著下调,但随着细胞分化,其表达水平又逐渐恢复;而GM-CSFRα mRNA和hβc的mRNA表达水平则随着细胞分化逐渐上调。DNA序列分析表明,NB4细胞分化前后IL-3Rα和GM-CSFRα的mRNA序列没有变化,而NB4细胞分化前hβc的mRNA序列以截短突变为主,NB4细胞分化后hβc的mRNA序列以野生型为主。结论:NB4细胞存在IL-3受体异常表达,表现为高表达IL-3Rα和hβc的胞内区截短突变,两者在NB4细胞的过度增殖与分化受阻的过程起重要作用。

维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型的建立

目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的以维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型,用于筛选治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、银屑病、痤疮以及肿瘤的新型药物。方法用分子生物学的方法,构建含有8个串连维甲酸受体应答元件(RARE)并连接报告基因E-GFP的重组载体。将体外培养的细胞株用该重组载体进行稳定转染,然后进行单克隆培养,最终挑选出敏感、高效、稳定表达的单克隆细胞,用于筛选针对维甲酸受体的小分子有机药物。结果建立了高效的药物筛选细胞模型。此模型筛选方法简便,适用范围广,灵敏度高,结果稳定。结论挑选出的细胞株作为药物筛选模型可用于大规模高通量药物筛选。

维甲酸受体在脑胶质母细胞瘤组织中的表达

目的:探讨脑胶质母细胞瘤中维甲酸受体表达在维甲酸分化抵抗中的角色。方法:应用免疫组织化学及免疫荧光双染法检测80例原发胶质母细胞瘤组织中维甲酸受体的表达。结果:胶质母细胞瘤组织中维甲酸受体阳性细胞比例为(40±12)%,显著低于正常脑组织中的表达,其阳性细胞比例约为(75±10)%(P<0.05)。约(85±10)%的分化肿瘤细胞呈现维甲酸受体阳性,约(50±8)%的胶质瘤干和(或)前体细胞呈现维甲酸受体阳性,阳性染色均一致的定位于胞浆。结论:胶质母细胞瘤中维甲酸受体的低表达以及异常的胞浆分布,可能是胶质瘤细胞维甲酸抵抗的可能机制。

维甲酸受体在各类组织细胞中分布的研究

研究人不同组织中维甲酸受体（RAR）的分布及早幼粒白血病（APL）细胞中RAR的一些生物学特性。方法：使用受体放射配体结合分析的方法。结果：在所研究的肝、脾、胃、结肠、肾、脑、肺等组织和白细胞中，组织间RAR的含量差异较大，其中以脑、脾、结肠组织中的含量较高。在APL细胞中除正常RARa外，尚存在融合受体（PML－RARα），该受体与全反式维甲酸（ATRA）的亲和力较RARα为低（9.5±0.51nM／3．3±0．25nM）。结论：这种分布差异反映了这些组织接受维甲酸调控能力的差异，及维甲酸受体不同亚型之间的比例不同。PML－RARα的存在可能是ATRA作用的分子基础，也可能是APL发病的环节之一。

维甲类化合物构效关系研究──维甲酸核受体与选择性配体相互作用的分子模拟

目的：研究维甲酸核受体蛋白α，β和γ３种亚型的氨基酸序列差异性，确定可能与抑制剂选择性结合有关的氨基酸残基，揭示维甲酸类药物的毒副作用和与其结合多种受体亚型的关系，设计、开发受体选择性的维甲类分子。方法和结果：基于已解析的γ受体亚型的晶体结构，利用分子图形学和计算化学方法预测了未知的α，β亚型的三维结构；通过３种维甲酸核受体分别与其泛激动剂、选择性激动剂及无结合活性的维甲酸分子之间的分子对接研究，定性解析了抑制剂立体结构上的微小差异导致不同受体产生选择性的本质原因。结论：有选择性受体结合活性的维甲类化合物是进行低毒作用的新型维甲类药物研究和开发的基础。

Am80通过促进KLF4与维甲酸受体α相互作用抑制血管内膜增生

目的:通过大鼠颈总动脉球囊损伤手术,探讨维甲酸受体α(RARα)激动剂Am80是否通过上调Krüppel样因子4(KLF4)与RARα相互作用而抑制血管新生内膜增生。方法:用球囊损伤大鼠颈总动脉,腹腔注射Am80 14 d后,HE染色观察血管新生内膜增生的情况;通过免疫组化方法检测KLF4和血管壁中cyclin D1的表达;用Western blotting方法检测血管壁中KLF4和RARα的表达,用免疫共沉淀法检测KLF4和RARα的相互作用。结果:与球囊损伤模型组比较,Am80腹腔注射组中,内膜与中膜厚度比率明显降低,KLF4和RARα表达水平升高;而且Am80可以促进损伤血管中KLF4和RARα的相互作用。结论:Am80促进KLF4与RARα的相互作用,从而抑制血管新生内膜的增生。

肝脏异维甲酸受体α调控脂代谢通路的基因组靶点分析

目的探讨肝脏异维甲酸受体α(RXRα)的基因组靶点特征及其下游通路与脂代谢的关系。方法将6只小鼠随机分为观察组和对照组各3只,分别给予维甲酸150 mg/(kg·d)和等量生理盐水灌胃,共7 d,测定血脂,并用染色体免疫沉淀测序和定量PCR比较RXRα靶基因谱和基因表达差异。结果观察组血清胆固醇和三酰甘油浓度较对照组显著降低(P<0.05),肝脏RXRα的基因组靶点和靶基因数均较对照组增加,以转录起始区靶点增幅最大(约58%)。RXRα的下游通路包括氧化还原、脂肪酸代谢和脂质转运等。观察组脂代谢相关靶基因中约48%(11/23)显著下调,22%(5/23)上调。结论肝脏RXRα及其下游通路是介导维甲酸调控脂代谢通路的重要因子。