联合检测维甲酸受体α、β及雌孕激素受体在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:通过检测子宫内膜癌组织中维甲酸受体α、β(RARα、β)、雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)的表达情况,探讨维甲酸受体和雌孕激素受体与子宫内膜癌的手术病理分期、组织学分类及肌层浸润的关系。方法:收集手术病理确诊的子宫内膜癌的石蜡切片48例,用免疫组化技术检测RARα、RARβ、ER及PR的表达,评估其与临床病理参数之间的关系。结果:①RARα及RARβ的阳性表达率分别为47.92%(23/48)、25.00%(12/48),RARα的表达高于RARβ(P<0.05)。②随着手术病理分期的增加,RARα的阳性表达率逐渐增加(P<0.05),随着组织分化程度的增加,RARα的阳性表达率却逐渐下降(P<0.05),但与组织学类型、肌层浸润深度无关(P>0.05)。③RARβ、ER和PR的表达随着组织分化程度的降低而减少(P<0.05;P<0.01;P<0.05),但与手术病理分期、组织学类型、肌层浸润深度无关(P>0.05)。④ER、PR表达率随着RARβ的阳性表达率增高而增高,随着RARα的表达率增高而降低。结论:子宫内膜癌中存在RARα、RARβ的表达,RARβ的表达缺失及RARα的高表达与子宫内膜癌的组织分化程度有关。ER、PR的表达和RARα、RARβ表达有明显的互补性。

维甲酸受体α、β在卵巢组织中的表达及与卵巢肿瘤的关系

目的:探讨维甲酸受体(RAR)α和β在正常卵巢及卵巢上皮性肿瘤中的表达及其与上皮性卵巢癌发生的关系。方法:112例标本,其中正常卵巢组织20例、良性上皮性肿瘤20例、交界性上皮性肿瘤20例、上皮性卵巢癌52例。采用免疫组织化学法检测维甲酸受体α和β的表达。结果:卵巢癌、卵巢交界性肿瘤、良性肿瘤和正常组织中维甲酸受体α的阳性表达率分别为81%、50%、15%和20%,在肿瘤的不同组织学类型、病理分级、临床分期卵巢癌患者间表达差异有统计学意义;卵巢癌、卵巢交界性肿瘤、良性肿瘤和正常组织中维甲酸受体β的阳性率分别为85%、45%、30%和30%,在肿瘤的不同组织学类型、病理分级卵巢癌患者间表达差异有统计学意义。结论:RARα和β在卵巢癌组织中呈高表达,且可能与卵巢癌的发展有关,本研究为维甲酸治疗进展期卵巢癌提供依据。

维甲酸受体α、β及雌孕激素受体在子宫内膜癌中的表达及意义

目的通过检测患者体内维甲酸受体α、β(RARα、RARβ)及雌孕激素受体(ER、PR)的表达情况,探讨维甲酸受体α、β及雌孕激素受体在子宫内膜癌手术中的意义。方法收集我院已经确诊的子宫内膜癌石蜡切片50例,并使用免疫组化技术检测RARα、RARβ、ER及PR的表达,根据结果分析其与临床各个参数之间的关系。结果随着手术病理分期的增加,RARα的阳性表达率逐渐升高,RARβ的表达率逐渐下降,RARβ、ER、PR的表达随着组织分化程度的降低而减少,ER、PR的表达率随着RARβ的阳性表达率升高而升高,随着RARα的升高而降低。结论 RARα、RARβ的表达程度与子宫内膜癌的组织分化程度有关,且ER、PR的表达与RARα、RARβ的表达有明显的互补性。

辅助性T细胞17/调节性T细胞及维甲酸相关孤儿受体γt/叉头框转录因子P3失衡在妊娠相关疾病中的研究进展

在免疫学领域,妊娠相当于一次成功的半同种移植现象,母体对半异体胎儿的免疫耐受情况关乎妊娠的结局。辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)是最新发现的CD^(+)_(4)T淋巴细胞亚群,相关转录因子维甲酸相关孤儿受体γt和叉头框转录因子P3的表达水平与Th17/Treg之间的平衡密切相关。Th17/Treg免疫失衡会导致母体对胎儿的异常攻击,造成母胎耐受紊乱,并与复发性流产、先兆子痫、妊娠糖尿病等病理妊娠有关。

莪连颗粒对胃癌种植瘤裸鼠肿瘤生长及维甲酸相关孤核受体γt表达的影响

目的:探讨莪连颗粒对胃癌种植瘤裸鼠肿瘤生长及维甲酸相关孤核受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptorγt,RORγt)表达的影响。方法:构建裸鼠人胃癌SGC-7901种植瘤模型,实验组予莪连颗粒灌胃,对照组予生理盐水灌胃。灌胃28天后处死小鼠并测定种植瘤体积及瘤重,计算抑瘤率。采用Western-Blot法检测肿瘤组织中RORγt表达。结果:实验组小鼠瘤重及肿瘤体积均低于对照组,抑瘤率为53.3%;实验组肿瘤组织RORγt表达较对照组减少。结论:莪连颗粒可抑制胃癌肿瘤生长,该作用可能与其抑制RORγt表达,减轻由辅助性T细胞17介导的免疫调节有关。

宽体金线蛭提取物对HEK293细胞维甲酸诱导基因蛋白样受体(RLRs)通路的影响

维甲酸诱导基因蛋白样受体(RLRs)信号通路是机体重要的抗病毒作用途径。宽体金线蛭体内含有抗凝血的活性物质,主要用于治疗血栓等疾病,但对于该信号通路的影响尚无任何报道。本试验目的是采用聚肌苷酸聚胞苷酸(Poly I∶C)建立HEK293细胞RLRs信号通路激活模型,在此基础上揭示宽体金线蛭提取物(LE)对HEK293细胞RLRs信号通路的影响。试验首先转染3个不同质量浓度(1、2、4μg·mL^(-1))的Poly I∶C至HEK293细胞,并分别处理12 h、24 h和48 h,以维甲酸诱导基因I(RIG-I)的蛋白表达水平和mRNA转录水平为RLRs通路激活的指标。RLRs信号通路激活之后,采用LE对HEK293细胞进行处理,共设置4组,每组3个重复,分别为:对照组、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染组、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染且添加150μg·mL^(-1)的水蛭提取物、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染且添加300μg·mL^(-1)的水蛭提取物。处理时长分别为24 h和48 h。试验结果表明,转染3个剂量的Poly I∶C在3个处理时长均引起细胞活力降低,2μg·mL^(-1)和4μg·mL^(-1) Poly I∶C转染HEK293细胞12 h、24 h和48 h均显著提高了RIG-I蛋白的表达量,4μg·mL^(-1)的Poly I∶C转染组RIG-I mRNA转录水平在24 h和48 h显著提高。选择Poly I∶C质量浓度2μg·mL^(-1),处理24 h和48 h作为后续试验激活RLRs的处理条件。质量浓度为150μg·mL^(-1) LE可以显著抑制Poly I∶C介导的细胞活力降低;300μg·mL^(-1)的LE显著降低了RIG-I的蛋白水平;150μg·mL^(-1)和300μg·mL^(-1) LE处理24 h和48 h后均显著抑制了β干扰素的mRNA转录和生成。据此得出如下结论:Poly I∶C转染HEK293细胞成功地激活了RLRs信号通路,宽体金线蛭提取物具有促进HEK293细胞活力和抑制β干扰素生成的作用。

维甲酸相关孤核受体α抵抗小鼠压力负荷型心肌损伤的作用及机制研究

目的探究维甲酸相关孤核受体α(RORα)在小鼠压力负荷引起的心肌损伤中的具体作用。方法通过小鼠主动脉弓缩窄手术(TAC)后8周建立压力负荷型心肌损伤模型。实验小鼠分为以下4组:假手术(Sham)+空载病毒(null)处理组(Sham+null组)、Sham+心肌特异性过表达RORα病毒处理组(Sham+RORα组)、TAC+null组、TAC+RORα组。TAC后8周检测心肌RORα表达水平;心脏收缩功能;心肌纤维化指标包括心肌血管周纤维化百分比、组织间隙纤维化百分比、结缔组织生长因子(CTGF)、I型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达水平;心肌肥厚指标包括心脏体重比、心肌细胞平均横截面积、脑钠肽(BNP)表达水平;氧化应激指标包括活性氧(ROS)产量、丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、核因子红系2相关因子2(Nrf2)、超氧化物歧化酶2(SOD2)表达水平;炎症反应指标包括核因子-κ-基因结合(NF-κB)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果与TAC+null组相比,TAC+RORα组小鼠心脏RORα表达水平明显增高;心脏收缩功能显著改善;心肌纤维化指标包括心肌血管周纤维化百分比、组织间隙纤维化百分比、CTGF、CollagenⅠ表达水平显著降低;心肌肥厚指标包括心脏体重比、心肌细胞平均横截面积、BNP表达水平显著降低;氧化应激指标包括心肌ROS生成、MDA含量显著降低,而Nrf2、SOD2表达水平明显增高;炎症反应指标包括心肌NF-κB、TNF-α表达水平显著降低(均P<0.05)。结论心肌特异性过表达RORα处理可通过抑制心肌组织氧化应激和炎症反应、延缓TAC所致的心肌肥厚和心肌纤维化,最终发挥减轻压力负荷型心肌损伤的保护作用。

维甲酸致小鼠胚胎畸形发生过程中维甲酸受体α/β及β-catenin和caspase-3基因的表达变化 (英文)

流行病学研究显示,在胚胎发育过程中摄入过多维甲酸可致各种发育缺陷,其中神经管畸形最为常见. 因此有必要探明维甲酸致各种发育缺陷的发生机制,以便为各种生长缺陷的预防和治疗提供实验依据. 用 RT-PCR 及蛋白质印迹技术,探测了过量维甲酸对昆明小鼠胚胎神经管中维甲酸受体α/β及β-catenin 和 caspase-3 基因表达的调整. 结果显示,在神经管闭合期过量维甲酸显著降低了维甲酸受体α/β及β-catenin 和 caspase-3 的基因表达,神经管闭合后,维甲酸受体β、β-catenin 及 caspase-3 的基因表达又出现了一个明显的回升过程. 提示,过量维甲酸改变了昆明小鼠胚胎神经管中维甲酸受体α/β及β-catenin 和 caspase-3 基因的正常时间表达模式,这种异常的基因表达模式可能参与了维甲酸致昆明小鼠胚胎畸形的发生机制.

维甲酸诱导前后异维甲酸受体α在银屑病中的变化

目的 研究他扎罗汀治疗进行期寻常型银屑病前后异维甲酸受体α(RXRα)的变化 ,并探讨其作用机制。方法 用原位杂交的方法检测进行期银屑病皮损用药前后RXRαmRNA的表达。结果 在银屑病皮损中 ,可见基底层和基底上层RXRαmRNA的表达 ,他扎罗汀治疗后可见RXRα表达于表皮全层 ,基底上层有显著上升的趋势 (P<0 .0 1)。结论 他扎罗汀通过促进RARγ RXRα的结合 ,上调银屑病表皮基底上层中RXRα的表达 ,抑制表皮角质形成细胞的增殖并诱导凋亡。

维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型的建立

目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的以维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型,用于筛选治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、银屑病、痤疮以及肿瘤的新型药物。方法用分子生物学的方法,构建含有8个串连维甲酸受体应答元件(RARE)并连接报告基因E-GFP的重组载体。将体外培养的细胞株用该重组载体进行稳定转染,然后进行单克隆培养,最终挑选出敏感、高效、稳定表达的单克隆细胞,用于筛选针对维甲酸受体的小分子有机药物。结果建立了高效的药物筛选细胞模型。此模型筛选方法简便,适用范围广,灵敏度高,结果稳定。结论挑选出的细胞株作为药物筛选模型可用于大规模高通量药物筛选。

9-顺维甲酸诱导的肺癌细胞RXR_S受体转录水平的变化

目的 :检测用 9 cis RA处理前后肺腺癌细胞株PG和A54 9维甲酸受体RXRS 不同时相的表达变化。方法 :将两细胞株分别分为 9 cis RA组和对照组 ,应用细胞计数方法统计每组各时相细胞数 ,相对定量RT PCR方法检测组加药前后RXRS 各亚型在不同时相的表达变化。结果 :加入 9 cis RA后 ,PG和A54 9细胞RXRSmRNA转录水平检测结果显示 :(1)RXRγ 在两细胞株中均有一定水平的基础转录 ,而RXRα、RXRβ 均无基础转录。 (2 )应用 1uM 9 cis RA后 ,两细胞株的RXRγ 有短暂增高 ,其余受体转录无明显变化。结论 :RXRγ 可能参与介导 9 cis

Am80通过促进KLF4与维甲酸受体α相互作用抑制血管内膜增生

目的:通过大鼠颈总动脉球囊损伤手术,探讨维甲酸受体α(RARα)激动剂Am80是否通过上调Krüppel样因子4(KLF4)与RARα相互作用而抑制血管新生内膜增生。方法:用球囊损伤大鼠颈总动脉,腹腔注射Am80 14 d后,HE染色观察血管新生内膜增生的情况;通过免疫组化方法检测KLF4和血管壁中cyclin D1的表达;用Western blotting方法检测血管壁中KLF4和RARα的表达,用免疫共沉淀法检测KLF4和RARα的相互作用。结果:与球囊损伤模型组比较,Am80腹腔注射组中,内膜与中膜厚度比率明显降低,KLF4和RARα表达水平升高;而且Am80可以促进损伤血管中KLF4和RARα的相互作用。结论:Am80促进KLF4与RARα的相互作用,从而抑制血管新生内膜的增生。

维甲酸受体在各类组织细胞中分布的研究

研究人不同组织中维甲酸受体（RAR）的分布及早幼粒白血病（APL）细胞中RAR的一些生物学特性。方法：使用受体放射配体结合分析的方法。结果：在所研究的肝、脾、胃、结肠、肾、脑、肺等组织和白细胞中，组织间RAR的含量差异较大，其中以脑、脾、结肠组织中的含量较高。在APL细胞中除正常RARa外，尚存在融合受体（PML－RARα），该受体与全反式维甲酸（ATRA）的亲和力较RARα为低（9.5±0.51nM／3．3±0．25nM）。结论：这种分布差异反映了这些组织接受维甲酸调控能力的差异，及维甲酸受体不同亚型之间的比例不同。PML－RARα的存在可能是ATRA作用的分子基础，也可能是APL发病的环节之一。

维甲酸受体-β基因联合维甲酸对Tca8113细胞的凋亡诱导作用

目的 研究已证实维甲酸受体 -β( Retinoic acid receptor-beta,RARβ)对某些类型的恶性肿瘤细胞有诱导分化和凋亡作用。现观察转导 RARβ基因联合全反式维甲酸 ( all trans retinoic acid,ATRA)对 Tca8113细胞的凋亡作用。方法 先应用脂质体将 RARβ基因导入 Tca8113细胞中 ,然后采用活细胞计数、透射电镜、流式细胞仪等方法观察 ATRA对转基因细胞的凋亡影响和生长抑制作用。结果 转 RARβ基因 Tca8113细胞在 1μmol/LATRA作用 10天后 ,细胞生长抑制率达 90 .2 % ;光镜和透射电镜下观察都可见到典型形态变化的凋亡细胞 ;FCM测定结果表明 ,细胞凋亡率高达 80 .7%。而母本细胞 Tca8113凋亡率小于 2 0 %。结论 RARβ基因可能是 ATRA诱导 Tca8113细胞产生显著凋亡作用的“靶分子”。 RARβ基因联合维甲酸治疗某些口腔鳞癌将是有效和可行的。

维甲类化合物构效关系研究──维甲酸核受体与选择性配体相互作用的分子模拟

目的：研究维甲酸核受体蛋白α，β和γ３种亚型的氨基酸序列差异性，确定可能与抑制剂选择性结合有关的氨基酸残基，揭示维甲酸类药物的毒副作用和与其结合多种受体亚型的关系，设计、开发受体选择性的维甲类分子。方法和结果：基于已解析的γ受体亚型的晶体结构，利用分子图形学和计算化学方法预测了未知的α，β亚型的三维结构；通过３种维甲酸核受体分别与其泛激动剂、选择性激动剂及无结合活性的维甲酸分子之间的分子对接研究，定性解析了抑制剂立体结构上的微小差异导致不同受体产生选择性的本质原因。结论：有选择性受体结合活性的维甲类化合物是进行低毒作用的新型维甲类药物研究和开发的基础。

维甲酸受体在脑胶质母细胞瘤组织中的表达

目的:探讨脑胶质母细胞瘤中维甲酸受体表达在维甲酸分化抵抗中的角色。方法:应用免疫组织化学及免疫荧光双染法检测80例原发胶质母细胞瘤组织中维甲酸受体的表达。结果:胶质母细胞瘤组织中维甲酸受体阳性细胞比例为(40±12)%,显著低于正常脑组织中的表达,其阳性细胞比例约为(75±10)%(P<0.05)。约(85±10)%的分化肿瘤细胞呈现维甲酸受体阳性,约(50±8)%的胶质瘤干和(或)前体细胞呈现维甲酸受体阳性,阳性染色均一致的定位于胞浆。结论:胶质母细胞瘤中维甲酸受体的低表达以及异常的胞浆分布,可能是胶质瘤细胞维甲酸抵抗的可能机制。

肝脏异维甲酸受体α调控脂代谢通路的基因组靶点分析

目的探讨肝脏异维甲酸受体α(RXRα)的基因组靶点特征及其下游通路与脂代谢的关系。方法将6只小鼠随机分为观察组和对照组各3只,分别给予维甲酸150 mg/(kg·d)和等量生理盐水灌胃,共7 d,测定血脂,并用染色体免疫沉淀测序和定量PCR比较RXRα靶基因谱和基因表达差异。结果观察组血清胆固醇和三酰甘油浓度较对照组显著降低(P<0.05),肝脏RXRα的基因组靶点和靶基因数均较对照组增加,以转录起始区靶点增幅最大(约58%)。RXRα的下游通路包括氧化还原、脂肪酸代谢和脂质转运等。观察组脂代谢相关靶基因中约48%(11/23)显著下调,22%(5/23)上调。结论肝脏RXRα及其下游通路是介导维甲酸调控脂代谢通路的重要因子。

乙型肝炎肝硬化患者辅助性T淋巴细胞17和调节性T淋巴细胞及维甲酸相关核孤儿受体γt和叉状头/翅膀状螺旋转录因子3 mRNA表达水平的变化及其临床意义研究

目的通过对乙型肝炎肝硬化患者外周血辅助性T淋巴细胞17(Th17)、调节性T淋巴细胞(Treg)及其特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)和叉状头/翅膀状螺旋转录因子3(Foxp3)mRNA表达水平的检测探讨其临床意义。方法选取2015年7—12月昆明医科大学第一附属医院诊治的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者64例,其中慢性乙型肝炎(CHB)患者21例(CHB组)、代偿期肝硬化(CLC)患者21例(CLC组)、失代偿期肝硬化(DCLC)患者22例(DCLC组)。同期选取本院体检健康者20例为对照组。收集研究对象一般资料〔性别、年龄及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)〕;应用流式细胞术检测研究对象外周血Th17、Treg表达率,计算Th17/Treg比值;应用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-q PCR)法测定外周血RORγt、Foxp3 mRNA表达水平。结果 4组年龄、ALT、AST、TBIL比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组Th17、Treg表达率及Th17/Treg比值均高于对照组(P<0.05);DCLC组Th17、Treg表达率及Th17/Treg比值均高于CHB组,Th17表达率及Th17/Treg比值均高于CLC组(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05);DCLC组RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平均高于CHB组、CLC组(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组外周血Th17表达率与RORγt mRNA表达水平均呈正相关(P<0.05);CHB组、CLC组、DCLC组外周血Treg表达率与Foxp3 mRNA表达水平均呈正相关(P<0.05);CHB组、CLC组、DCLC组外周血Th17表达率、RORγt mRNA表达水平与ALT呈正相关(P<0.05);CHB组外周血Foxp3mRNA表达水平与ALT呈正相关(P<0.05);CHB组RORγt mRNA表达水平、Foxp3 mRNA表达水平与AST、TBIL呈正相关(P<0.05)。结论 Th17、Treg及其特异性转录因子RORγt、Foxp3可能与乙型肝炎肝硬化患者的疾病进展与肝功能有关。

河南食管癌高、低发区居民食管癌前病变和癌组织维甲酸受体β的表达

目的 :探讨食管癌高、低发区人群正常食管上皮和各级癌前病变组织中维甲酸受体 β(RARβ)蛋白表达变化的特征及其与形态变化之间的关系。方法 :食管癌高发区患者 70例 ,低发区患者 77例 ,采用卵白素 生物素 辣根过氧化氢酶复合物 (ABC)法 ,检测高、低发区居民食管组织中RARβ蛋白表达。 结果 :RARβ免疫阳性反应主要定位于细胞膜和细胞浆。高、低发区居民食管正常上皮和各级病变组织中均有不同程度的免疫阳性反应 ,从正常→基底细胞过度增生 (BCH)→间变 (DYS)→鳞状细胞癌 (SCC) ,高发区免疫阳性率分别为 16 %、2 7%、31%、6 0 % ,低发区分别为 13%、38%、4 0 %、6 6 %。随SCC分化程度升高 ,RARβ阳性反应百分率亦呈升高趋势 ;高发区居民高、中、低分化SCC组织中RARβ的免疫阳性率为 95 %、73%、2 5 % ,低发区分别为 95 %、77%、39% ,两地区间分化程度相似的SCC组织中RARβ阳性率相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。但是 ,高发区低分化与中、高分化SCC组织免疫反应阳性率相比差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ,与低发区SCC结果相似。结论 :RARβ蛋白表达发生于食管癌变的各个阶段 ,食管癌高、低发区存在相似的改变 ,其蛋白表达的阳性率随SCC分化程度升高而显著升高 ,提示RARβ改变可能与食管癌细胞的分?

依曲替酸和窄谱中波紫外线对正常人角质形成细胞维甲酸受体γ mRNA表达的协同影响

目的研究依曲替酸和窄谱中波紫外线(NB-UVB)对培养的正常人角质形成细胞(KC)增殖和维甲酸受体γ(RARγ)mRNA表达的影响。方法用10-6mol/L依曲替酸和/或100mJ/cm2NB-UVB处理正常人KC后,继续培养12h,用RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR法分别检测KC增殖和RARγ mRNA表达的改变。结果10-6mol/L依曲替酸或100mJ/cm2NB-UVB处理后12h,KC的增殖均受抑制,抑制率分别为8.7%和14.4%,二者联合作用时,对KC的增殖抑制作用最强,抑制率为19.7%。正常人KC可表达一定量的RARγ mRNA,10-6mol/L依曲替酸处理后,RARγ mRNA的表达增高至正常对照组的2.3倍,100mJ/cm2NB-UVB照射对RARγ mRNA的表达无明显影响,为正常对照组的0.9倍,二者联合作用时,对RARγ mRNA的表达诱导作用最强,为正常对照组的2.8倍。结论依曲替酸和NB-UVB可协同诱导RARγ mRNA表达,并可能参与介导二者对KC增殖的抑制作用。