白细胞介素-17和维甲酸相关核孤儿受体γt在小鼠真菌性角膜炎中的表达

背景CD4＋效应T细胞（Th1／Th2）的平衡模式以往常用于解释真菌感染性疾病的免疫机制。近年来发现，除Th1和Th2细胞亚群外，Th17细胞亚群也参与抗真菌感染的免疫应答，但其在真菌性角膜炎中的作用却鲜有研究。目的探讨白细胞介素-17（IL-17）及Th17特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）在真菌性角膜炎中的表达变化及其意义。方法将清洁级BALB／c小鼠96只按随机数字表法随机分为真菌性角膜炎模型组和损伤对照组，真菌性角膜炎模型组小鼠采用角膜表面镜术辅助上皮刮除并层间注入1×10^6CFU／ml真菌菌液5μl法建立小鼠茄病镰刀菌性角膜炎模型，损伤对照组在角膜表面镜术辅助上皮刮除后层间注入等体积（5111）的PBS液。采用质量分数10％KOH湿片法检查菌丝，部分用接种法进行真菌培养并鉴定菌种，另一部分进行细菌培养以排除细菌污染。于造模后第1、3、5、7天在裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜炎症的变化特点，参照Wu和Hu的方法对角膜炎症进行评分。分别于造模后第1、3、5、7天处死小鼠并获取角膜组织行苏木精一伊红染色，观察角膜组织的病理改变。采用real—timePCR技术检测IL-17mRNA及其特异性转录因子RORγtmRNA的表达水平，并用ELISA法检测IL-17蛋白在角膜组织中的表达。结果造模后第1、3、5、7天角膜的炎症评分分别为（3．2±0．8）、（6．6±1．1）、（9．4±1．1）、（6．8±0．8）分，差异有统计学意义（F=89．786，P=0．010），其中第3天和第7天角膜炎症评分明显高于第1天，但低于第5天，差异均有统计学意义（P〈0．05）；角膜的组织病理学检测炎性细胞浸润情况与角膜炎症评分变化趋势一致。造模后第3、5、7天，IL-17mRNA在真菌性角膜炎模型组小鼠角膜的表达分别为4．12±0．73、20．72±1．81、14．16±1．88，高于损伤对照组的0．35±0．17、0．28±0．09、0．22±0．09，差异均有统计学意义（P〈0．01），且组内比较第5天时表达量高于第1、3、7天值，差异有统计学意义（P〈0．01），真菌性角膜炎模型组IL-17蛋白在造模后第1、3、5、7天的表达量均明显高于损伤对照组，差异均有统计学意义（P〈0．叭）。真菌性角膜炎模型组各时间点RORγt mRNA在角膜组织中的表达变化与IL-17mRNA的表达趋势一致（P〈0．01）。结论IL-17及其特异性转录因子RORγt在真菌性角膜炎局部组织中的表达量均上调，其表达量变化的趋势与其炎症反应程度相关，推测Th17在真菌性角膜炎的免疫反应中发挥重要作用。

乙型肝炎肝硬化患者辅助性T淋巴细胞17和调节性T淋巴细胞及维甲酸相关核孤儿受体γt和叉状头/翅膀状螺旋转录因子3 mRNA表达水平的变化及其临床意义研究

目的通过对乙型肝炎肝硬化患者外周血辅助性T淋巴细胞17(Th17)、调节性T淋巴细胞(Treg)及其特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)和叉状头/翅膀状螺旋转录因子3(Foxp3)mRNA表达水平的检测探讨其临床意义。方法选取2015年7—12月昆明医科大学第一附属医院诊治的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者64例,其中慢性乙型肝炎(CHB)患者21例(CHB组)、代偿期肝硬化(CLC)患者21例(CLC组)、失代偿期肝硬化(DCLC)患者22例(DCLC组)。同期选取本院体检健康者20例为对照组。收集研究对象一般资料〔性别、年龄及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)〕;应用流式细胞术检测研究对象外周血Th17、Treg表达率,计算Th17/Treg比值;应用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-q PCR)法测定外周血RORγt、Foxp3 mRNA表达水平。结果 4组年龄、ALT、AST、TBIL比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组Th17、Treg表达率及Th17/Treg比值均高于对照组(P<0.05);DCLC组Th17、Treg表达率及Th17/Treg比值均高于CHB组,Th17表达率及Th17/Treg比值均高于CLC组(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05);DCLC组RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平均高于CHB组、CLC组(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组外周血Th17表达率与RORγt mRNA表达水平均呈正相关(P<0.05);CHB组、CLC组、DCLC组外周血Treg表达率与Foxp3 mRNA表达水平均呈正相关(P<0.05);CHB组、CLC组、DCLC组外周血Th17表达率、RORγt mRNA表达水平与ALT呈正相关(P<0.05);CHB组外周血Foxp3mRNA表达水平与ALT呈正相关(P<0.05);CHB组RORγt mRNA表达水平、Foxp3 mRNA表达水平与AST、TBIL呈正相关(P<0.05)。结论 Th17、Treg及其特异性转录因子RORγt、Foxp3可能与乙型肝炎肝硬化患者的疾病进展与肝功能有关。

针康法对脑缺血小鼠神经功能及叉头转录因子3和维甲酸相关孤儿受体γt表达的影响

目的探索针康法对脑缺血小鼠叉头转录因子3 (Foxp3)和维甲酸相关孤儿受体γt (RORγt)蛋白表达的影响。方法 45只成年雌性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、康复组和针康组,每组9只。每组再分为3 d、7 d、14 d 3个亚组。模型组、针刺组、康复组和针康组采用线栓法建立永久性大脑中动脉栓塞模型。假手术组和模型组仅手术不予治疗,针刺组接受头穴丛刺针灸治疗,康复组接受跑台训练,针康组接受头穴丛刺结合跑台治疗。术后各时间点,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评价神经功能,Western blotting法分析缺血侧脑组织Foxp3、RORγt表达。结果术后各时间点,假手术组mNSS为0分,模型组mNSS均高于假手术组(P <0.05)。术后3 d,与模型组比较,康复组、针康组mNSS降低(P <0.05)。术后14 d,与模型组和针刺组比较,针康组mNSS降低(P <0.05)。术后各时间点,针康组Foxp3蛋白表达均低于模型组(P <0.05)。术后3 d,针康组RORγt表达量较其他组均增加(P <0.05)。术后7 d,针康组RORγt表达量较针刺组、假手术组增加(P <0.05)。结论针康法可改善脑缺血小鼠组织损伤,促进神经功能恢复,可能通过调节Foxp3、RORγt表达降低炎症的水平,发挥神经保护作用。

维甲酸相关核孤儿受体γt和4-1BB/4-1BBL在口腔扁平苔藓中的表达及意义

目的研究口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中维甲酸相关核孤儿受体γ(tRORγt)和4-1BB/4-1BBL mRNA的表达。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测30例OLP患者和30例健康人外周血中RORγt和4-1BB/4-1BBL的基因表达水平。结果在OLP患者中,RORγt、4-1BB、4-1BBL mRNA的表达水平显著高于对照组(P<0.05),结果经2-ΔΔCT转换后,OLP组3种基因mRNA表达水平分别是健康对照组的3.087、3.320和4.005倍。RORγt和4-1BB mRNA的表达水平无明显相关性(P>0.05),4-1BB和4-1BBL mRNA表达水平呈正相关(r=0.455 0,P<0.05)。结论RORγt和4-1BB/4-1BBL在OLP的发病中起了一定作用。

B细胞转录激活因子、维甲酸相关孤儿核受体γt对急性哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨B细胞转录激活因子(BATF)、白细胞介素-17及维甲酸孤儿核受体γt(RORγt)对急性哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 (1)将24只健康雌性BALB/c小鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、哮喘模型组(AS组)、地塞米松治疗组(DEX组),每组8只。第0、7、14天,AS组、DEX组小鼠用卵清蛋白(OVA)抗原液腹腔内注射致敏,NS组用等体积生理盐水腹腔内注射。第21天起,NS组超声雾化吸入生理盐水,AS组、DEX组超声雾化吸入2%的OVA液,均为每天1次,每次40 min,连续5 d。每次雾化前30 min,DEX组以地塞米松1.0 mg/kg腹腔注射,NS组、AS组则以等体积的生理盐水腹腔注射。末次雾化结束24 h后,各组小鼠留取肺组织标本进行检测。结果 (1)肺组织切片显示:NS组肺组织无明显炎症反应,AS组及DEX组均存在炎症反应,且AS组炎症反应明显高于DEX组。(2)免疫组化结果显示:AS组肺组织BATF、IL-17、RORγt的表达明显高于NS组、DEX组(P<0.05);DEX组肺组织IL-17、BATF、RORγt的表达较AS组明显降低(P<0.05)。(3)肺组织BATF的表达与BALF中白细胞(WBC)总数及中性粒细胞(NEU)计数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数呈正相关(r=0.487、0.531、0.515,P<0.05);肺组织BATF的表达与IL-17、RORγt的表达呈正相关(r=0.502、0.493,P<0.05);肺组织IL-17的表达与RORγt的表达呈正相关(r=0.536,P<0.05)。结论 (1)急性哮喘小鼠肺组织中BATF、IL-17、RORγt表达上调。(2)地塞米松可能是通过下调BATF、IL-17、RORγt的表达而减轻气道炎症性损害。

慢性牙周炎患者血清RORA的表达水平及其与Th17/Treg细胞平衡的相关性

目的 探讨慢性牙周炎(CP)患者血清维甲酸受体相关孤儿受体A(RORA)的表达水平及其与辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的相关性。方法 选取2019年1月—2021年12月于本院进行检查并接受治疗的90例CP患者作为观察组,并选择同期在本院检查的牙周健康志愿者100例作为对照组,比较两组的年龄、性别、体质指数(BMI)及合并高血压、冠心病、糖尿病等一般临床资料;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清中RORA的相对表达水平;采用流式细胞术检测两组Th17、Treg细胞水平;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组血清中转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)及白细胞介素-23(IL-23)的水平;采用Pearson法分析CP患者血清RORA与TGF-β、IL-10、IL-23、IL-23及Th17/Treg细胞比例之间的相关性;Logistic回归分析影响CP发生的因素。结果 两组年龄、性别、BMI及合并高血压、冠心病、糖尿病等指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组患者血清中Th17、IL-17、IL-23水平高于对照组,RORA、Treg、TGF-β、IL-10水平低于对照组,且Th17/Treg细胞比例高于对照组(P<0.05)。Pearson法分析结果显示,CP患者血清中RORA与TGF-β、IL-10呈正相关(P<0.05),与IL-17、IL-23及Th17/Treg细胞比例呈负相关(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,RORA、TGF-β、IL-10、IL-17、IL-23及Th17/Treg是CP发生的影响因素(P<0.05)。结论 CP患者血清中RORA低表达,Th17/Treg细胞比例失衡,RORA的表达与Th17/Treg细胞比例之间呈负相关,RORA可能通过调节Th17/Treg细胞比例影响CP的发生。

系统性红斑狼疮患者外周血CD4＋T细胞来源瘦素水平及意义

目的 探讨外周血CD4＋T细胞来源瘦素在系统性红斑狼疮发生中的作用.方法 收集2011年1月～2012年12月确诊的27例系统性红斑狼疮患者和25名健康对照外周血标本,分离PBMC,用CD4＋T细胞免疫磁珠分离CD4＋T细胞,体外进行培养,免疫酶联吸附试验（ELISA）检测上清液及血浆中瘦素水平.采用实时定量PCR（qRT-PCR）方法检测PBMC中维甲酸相关孤儿核受体γt（RORγt）相对表达量.统计学处理采用非配对t检验和Spearman相关分析.结果 系统性红斑狼疮患者CD4＋T细胞培养上清液中瘦素水平显著高于健康对照组（57.8±12.9 pg/ml vs 31.9±6.7 pg/ml,t= 9.524,P〈0.01）,而血浆中瘦素水平差异则无统计学意义（16.5±4.7 pg/ml vs 13.9±3.8 pg/ml,t= 1.912,P〉0.05）.系统性红斑狼疮患者CD4＋T细胞培养上清液中瘦素水平与RORγt相对表达量呈正相关（r=0.681,P〈0.05）,血浆中瘦素与RORγt相对表达相关性不明显（r=0.294,P=0.136）.结论 在系统性红斑狼疮的发生发展过程中,CD4＋T细胞来源瘦素诱导RORγt表达,促进Th17细胞的致病作用.

白细胞介素-10,-17及叉状/翼状螺旋转录因子,维甲酸相关孤儿受体-γt在子宫内膜癌中的表达及意义

目的探讨白细胞介素(IL)-10,-17,叉状/翼状螺旋转录因子(Foxp3)及维甲酸相关孤儿受体(ROR)-γt在子宫内膜癌组织的表达及其与子宫内膜癌发生发展的关系。方法收集本院2012年12月至2013年2月的子宫内膜癌标本16例及良性子宫病变标本6例为研究对象,分别纳入子宫内膜癌组(n=16)与对照组(n=6)。采用链霉亲和素-生物素复合物免疫组织化学(SABC-IHC)染色法分别检测两组标本组织中IL-10,-17,Foxp3及ROR-γt的表达,采用IPP 6.0图像分析软件计算积分光密度(IOD)值,并结合临床病理特征对相关结果进行统计学分析(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,并与受试者签署临床研究知情同意书)。结果子宫内膜癌组IL-10,Foxp3的IOD值明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌组中,ⅠB期、G2～G3级、有肌层浸润、有脉管癌栓者的IL-10,-17,Foxp3及ROR-γt的IOD值显著高于ⅠA期、G1级、无肌层浸润、无脉管癌栓者,差异有统计学意义(P<0.05);而在各组织类型间比较,则差异无统计学意义(P>0.05)。子宫内膜癌组与对照组IL-17,ROR-γt的IOD值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。而子宫内膜癌组中,FIGO分期、组织分级、有无肌层浸润、有无脉管癌栓及病理类型方面比较,差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-10,Foxp3的过表达参与子宫内膜癌的发生发展,IL-17,ROR-γt与子宫内膜癌发生发展无明显相关性。

1α,25-二羟维生素D_3对早期角膜移植小鼠Th17细胞的免疫调控作用

目的:观察在同种异体角膜移植的小鼠模型中,1α,25-二羟维生素D3对Th17细胞及其相关细胞因子的影响。方法:C57BL/6小鼠作为受体,BALB/c小鼠作为供体,建立小鼠穿透性角膜移植术模型。术后隔日对角膜移植小鼠腹腔注射1.0μg 1α,25二羟维生素D3(维生素D3干预组),模型组和正常对照组腹腔注射等量大豆油。在裂隙灯活组织镜下观察角膜移植物的透明情况,评估排斥反应的发生情况,并取角膜移植物做病理学检测。采用实时荧光定量PCR检测脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平,Western blotting分析外周血中RORγt及IL-17的蛋白含量,流式细胞术检测外周血IL-17和IFN-γ细胞因子的表达情况。结果:1α,25-二羟维生素D3显著地抑制了同种异体角膜移植排斥反应,同时减少了角膜移植物的炎性渗出。应用1α,25-二羟维生素D3治疗后,小鼠脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平降低;外周血中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平被下调。结论:1α,25-二羟维生素D3抑制小鼠同种异体角膜排斥反应的作用与IL-17及相关细胞因子RORγt细胞调节密切相关。

哮喘患儿外周血单个核细胞瘦素与RORγt和Foxp3表达的关系

目的:探讨哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)分泌的瘦素水平变化及其与Th17特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体γt(RORγt)和Foxp3+调节性T细胞(Treg)特异性转录因子叉头状转录因子p3(Foxp3)表达的关系。方法:选取2018年6月-2020年6月本院收治的25例哮喘患儿设为哮喘组。根据哮喘组患儿疾病所处的时期不同,分为发作期和缓解期。对哮喘发作期儿童经规则联合吸入糖皮质激素/长效β2受体激动剂(ICS/LABA)治疗后定期随访,无症状和体征超过3个月以上作为缓解期。选取同期在本院体检25例的健康儿童为对照组。比较哮喘组发作期和缓解期及对照组的瘦素、FEV1%、RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平,并分析哮喘组发作期患儿瘦素与PBMC的FEV1%、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA及RORγt mRNA与Foxp3 mRNA的相关性。结果:对照组、哮喘组发作期和缓解期的瘦素、FEV1%、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。哮喘组发作期的瘦素、RORγt mRNA相对表达量均高于对照组和哮喘组缓解期,FEV1%、Foxp3 mRNA均低于对照组和哮喘组缓解期,差异均有统计学意义(P<0.01)。对照组和哮喘组发作期的瘦素、FEV1%、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA比较,差异均无统计学意义(P>0.01)。哮喘组患儿发作期PBMC培养上清液瘦素浓度与PBMC的RORγt mRNA呈正相关(r=0.884,P<0.01);与PBMC的Foxp3 mRNA呈负相关(r=-0.926,P<0.01);与FEV1%呈负相关(r=-0.936,P<0.01);Foxp3 mRNA与RORγt mRNA呈负相关(r=-0.854,P<0.01)。结论:哮喘患儿PBMC分泌的瘦素与RORγt mRNA呈正相关,与Foxp3 mRNA呈负相关。

三子补血汤对骨髓增生异常综合征患者Treg及Th17细胞水平的影响

目的研究三子补血汤中药疗法对骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血调节性T淋巴细胞(Treg细胞)、辅助性T细胞17(Th17细胞)水平以及转录因子叉头框蛋白p3/维甲酸相关孤儿受体γt(Foxp3/RORγt)表达水平的影响。方法选取2016年1月至2022年12月在上海市东方医院经规范治疗的76例MDS患者作为研究对象,采用随机数字表法将其分为中药组(38例)和对照组(38例)。中药组患者采用三子补血汤治疗,对照组患者采用常规支持治疗。通过Prism 5.0和SPSS 20.0统计软件对临床特征、分型、中医症候群及疗效等指标进行统计学分析。通过流式细胞技术检测MDS患者外周血Treg细胞和Thl7细胞比例。采用免疫组化方法标记MDS患者骨髓中的转录因子Foxp3与RORγt并检测阳性细胞数。结果治疗6个月后,中药组患者外周血Treg和Th17细胞比例低于治疗前,差别有统计学意义(P<0.05)。中药组患者转录因子Foxp3及RORγt水平低于治疗前,差别有统计学意义(P<0.05)。中药组患者的中医症状积分、骨髓原始细胞比例以及输血依赖程度等指标均低于治疗前,差别有统计学意义(P<0.05)。结论三子补血汤中药疗法能够有效调节MDS患者外周血Treg细胞及Th17细胞比例,从而增强细胞免疫功能,改善症状,提高缓解率并降低向急性白血病转化的风险。中药组患者在治疗期间未出现严重不良反应,方剂安全性良好。因此,本研究认为三子补血汤中药疗法是一种极具潜力的MDS治疗方案,值得进一步地研究及推广应用。

电针刺激上巨虚、天枢对溃疡性结肠炎模型大鼠Th17相关特异性因子及Treg的影响

目的观察电针刺激上巨虚、天枢对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)相关特异性因子及调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)的影响,探讨合募配穴理论指导下电针刺激大肠腑下合穴、募穴治疗UC的作用机制,为特定穴的临床应用提供实验依据。方法50只SD大鼠随机分出10只作为空白组,剩余40只UC模型造模成功的大鼠随机分为模型组、合募配穴组、天枢组和上巨虚组,每组10只。2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)/乙醇法制备UC大鼠模型。合募配穴组予以电针刺激双侧天枢、上巨虚,天枢组予以电针刺激双侧天枢,上巨虚组予以电针刺激双侧上巨虚,每次20 min,每天1次,共10次。观察大鼠一般情况,计算大鼠疾病活动指数(disease active index,DAI);肉眼观察大鼠结肠黏膜损伤情况,评估结肠黏膜损伤指数(colonic mucosa damage index,CMDI),HE染色观察结肠形态学变化;流式细胞术检测大鼠脾脏CD4+T细胞中Treg细胞百分比,荧光定量PCR检测大鼠结肠组织中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、维甲酸相关孤儿受体γt(retinoid acid related orphan receptor gamma t,RORγt)、白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)mRNA相对表达量。结果(1)与空白组比较,模型组一般情况不佳,肠黏膜坏死,有明显溃疡面,炎性浸润严重,DAI及CMDI评分显著升高(P<0.05),Treg细胞百分比及TGF-βmRNA相对表达量显著降低(P<0.05),RORγt、IL-17A mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);(2)与模型组比较,合募配穴组、天枢组及上巨虚组一般情况明显好转,炎性浸润和结肠黏膜坏死情况明显减轻,DAI及CDMI评分显著降低(P<0.05),Treg细胞百分比及TGF-βmRNA相对表达量显著升高(P<0.05),RORγt、IL-17A mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);(3)与天枢组和上巨虚组比较,合募配穴组Treg细胞百分比显著升高(P<0.05),RORγt mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。结论电针刺激大肠合募穴上巨虚、天枢对UC有良好的治疗作用,合募配穴疗效优于单穴疗效,其作用机制可能是通过调节Th17/Treg平衡,降低炎性细胞因子表达,以调控肠黏膜免疫失衡状态,恢复肠黏膜免疫稳态,减轻炎症反应。

清肺抗敏合剂下调RORγt及SOCS1/3表达改善哮喘小鼠炎症反应机制研究

目的:研究清肺抗敏合剂下调维甲酸孤儿核受体γt(RORγt)及信号传导抑制因子1/3(SOCS1/3)表达改善呼吸道合胞病毒(RSV)诱发哮喘小鼠炎症反应的影响。方法:将BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组和清肺抗敏合剂低、中、高剂量组。通过RSV诱发、白蛋白致敏建立哮喘小鼠模型。末次激发后24 h,吸入乙酰胆碱(Mch)测定气道的相对阻力;制备肺泡灌洗液(BALF),用酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中CD31、免疫球蛋白E(IgE)、白介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用比色法测定髓过氧化物酶(MPO)含量;计数炎症细胞。采用RT-PCR法检测肺组织中RORγt mRNA水平。采用qPCR法测定肺组织中SOCS1/3 mRNA表达水平。结果:地塞米松组及清肺抗敏合剂不同剂量组小鼠吸入梯度浓度的Mch后气道阻力与模型组比较显著降低(均P<0.05);地塞米松和不同剂量清肺抗敏合剂均可以改善小鼠肺组织的病理学损伤,缓解炎性细胞浸润。地塞米松组及清肺抗敏合剂不同剂量组小鼠病理半定量评分显著低于模型组(均P<0.05),且随着剂量的增加评分降低。与模型组比较,地塞米松组及清肺抗敏合剂不同剂量组小鼠中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞数量显著降低(均P<0.05),小鼠BALF中CD31、IgE、IL-4、MPO和TNF-α含量显著降低(均P<0.05),肺组织RORγt及SOCS1/3 mRNA表达水平显著降低(均P<0.05)。结论:清肺抗敏合剂可以通过下调RORγt及SOCS1/3 mRNA表达改善呼吸道合胞病毒诱发哮喘小鼠炎症反应。

HNF4α、GATA-3RORγt表达变化与肝癌发生发展的相关性研究

目的探讨肝细胞核因子4α(HNF4α)、GATA结合蛋白3(GATA-3)、维甲酸孤儿素受体γt(RORγt)与肝癌发生发展的相关性。方法选取我院治疗的肝癌患者57例为研究对象(肝癌组),选取同期非肝癌患者30例作为对照(非肝癌组),采用免疫组化法检测两组肝脏组织HNF4α的表达,采用RT-PCR检测两组血浆GATA-3、RORγt mRNA的表达,分析并比较三个分子表达变化与肝癌发生发展的相关性。结果肝癌组肝脏组织HNF4α高表达率为54.39%,明显低于非肝癌组(P<0.05);肝癌组血浆GATA-3和RORγt mRNA表达量分别为(1.49±0.64)和(72.10±10.13),明显高于非肝癌组(P<0.05);肝脏组织HNF4α、血浆GATA-3、RORγt mRNA表达与患者TNM分期和病理分化程度有关(P<0.05);HNF4α高表达和低表达患者血浆GATA-3、RORγt mRNA表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HNF4α、GATA-3mRNA、RORγt mRNA的表达变化与肝癌的发生发展、TNM分期和病理分化程度相关。

Th17细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠发病中的表达及依达拉奉的保护作用研究

目的:探讨Th17细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠发病中的动态变化及依达拉奉可能的保护作用机制。方法:对比EAE组和依达拉奉组大鼠发病前期、急性期和缓解期Th17相关细胞因子。评估大鼠临床发病情况;组化染色观察脊髓组织炎症细胞中RORγt阳性表达;ELISA法检测血清中IL-17、IL-6含量;实时定量PCR检测脊髓组织IL-17mRNA、HO-1mRNA含量。结果:依达拉奉组平均发病时间、发病率、急性期神经功能评分明显低于EAE组(P<0.05);免疫组化结果显示依达拉奉组各时期RORγt阳性细胞平均秩次均低于EAE组(P<0.05);ELISA结果显示依达拉奉组发病前外周血中IL-17、IL-6的含量低于EAE组(P<0.05),在急性期和缓解期依达拉奉组外周血中IL-17均含量低于EAE组(P<0.05);实时定量PCR发现依达拉奉组急性期IL-17mRNA表达低于EAE组(P<0.05),依达拉奉组不同时期HO-1mRNA含量均高于EAE组(P<0.05)。结论:依达拉奉可延迟EAE发病时间、减轻神经功能损伤、降低发病率;可能通过作用于HO-1起到抗氧化应激和抗炎作用。

Th17转录因子RORγt和BATF及Th17相关细胞因子在中性粒细胞亚型哮喘发病中的作用

目的:检测中性粒细胞亚型哮喘(NA)患者痰上清中辅助性T细胞17(Th17)特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、B细胞转录激活因子(BATF)及外周血中Th17细胞相关细胞因子白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素17(IL-17)和白细胞介素22(IL-22)表达水平,探讨其在NA发病中的作用。方法:以56例支气管哮喘患者为研究对象,4.5%生理盐水雾化诱导痰,经细胞MGG染色进行哮喘的炎症亚型分型,分为嗜酸性粒细胞亚型哮喘(EA)组(26例)和NA组(30例),以常规体检者为健康对照组(NC组,28人)。实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测痰上清中BATF和RORγt mRNA表达水平。空腹抽取各组研究对象肘静脉血10mL,Ficoll密度梯度离心后分离外周血单个核细胞(PBMC),ELISA法测定血清中IL-8、IL-17和IL-22蛋白表达水平,流式细胞术检测PBMC中Th17细胞(CD4+IL-17+细胞)的百分率。结果:与NC组和EA组比较,NA组患者血清中IL-8、IL-17和IL-22表达水平均明显升高(P<0.05);与NC组比较,EA组患者血清中IL-8、IL-17和IL-22表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与NC组和EA组比较,NA组患者痰上清中BATF和RORγt mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与NC组和EA组比较,NA组患者PBMC中Th17细胞百分率均明显升高(P<0.01);与NC组比较,EA组患者PBMC中Th17细胞百分率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-17转录因子RORγt和BATF参与了NA患者气道炎症发生过程,且Th17细胞及其相关细胞因子IL-17和IL-22的异常表达与NA的全身反应有关联。

转录因子RORγt对妊娠期哮喘模型小鼠Th17/Treg平衡的调节作用

目的观察妊娠期哮喘模型小鼠Th17细胞相关细胞因子和维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)的表达变化,探讨地塞米松(DXM)对小鼠气道炎症和Th17细胞分泌功能的影响。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为健康妊娠(HP)组、妊娠期哮喘(AP)组和地塞米松(DXM)组,每组10只。AP组和DXM组于实验当天(0d)和7、14d时分别给予OVA/Al(OH)3混悬液腹腔注射致敏,HP组仅给予单纯等量生理盐水(NS)。3组小鼠合笼交配至妊娠成功。于21d起,连续7d对AP组和DXM组给予50g/L OVA雾化激发(1次/d,40min/次);DXM组于雾化吸入OVA前30min给予1mg/kgDXM腹腔注射;HP组仅给予单纯等量NS进行雾化激发。各组小鼠于末次激发24h后进行气道反应性检测,结果以相应浓度乙酰胆碱(Mch)激发下增强的呼吸间歇(Penh)值与基线值的百分比[Penh值(%)]来表示;分析支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及分类计数;取肺组织行病理学观察;采用流式细胞仪检测外周血Th17和Treg细胞的比例并计算Th17/Treg比值;ELISA法测定外周血IL-17、IL-23、IFN-γ和RORγt含量,RT-PCR法检测前述因子在肺组织中的表达,Western blotting检测肺组织中RORγt的表达。结果雌性BALB/c小鼠以OVA致敏后气道反应性增加,BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞(Eos)、淋巴细胞(Lym)和中性粒细胞(Neu)比例增加,肺组织病理学改变符合哮喘的特征。外周血标本中,AP组Th17细胞显著升高,Treg细胞显著降低(P<0.05),Th17/Treg比值上升。DXM组Th17和Treg细胞变化趋势与AP组相同,Th17/Treg比值高于HP组,但低于AP组(P<0.05)。分别在肺组织和外周血标本中检测蛋白和mRNA表达水平,结果显示,AP组IL-17、IL-23及RORγt含量均高于HP组及DXM组(P<0.05),IFN-γ含量低于HP组及DXM组(P<0.05)。AP组肺组织RORγt蛋白的表达(61.27%±3.11%)明显高于DXM组(37.51%±1.93%,P<0.01)和HP组(22.39%±0.86%,P<0.01),后两者比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。相关分析表明,AP组肺组织RORγt蛋白表达量与Eos、Lym和Neu细胞绝对值呈显著正相关(r=0.879、0.759、0.802,P<0.01),与外周血IL-17含量、肺组织IL-17mRNA表达水平亦呈正相关(r=0.696、0.863,P<0.01)。结论 Th17细胞分泌功能及RORγt表达上调参与了妊娠期哮喘的发生发展。DXM干预在改善哮喘症状的同时可降低RORγt表达,使Th17分化和增殖功能受抑。

补肾平喘膏方对支气管哮喘大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的观察支气管哮喘(哮喘)大鼠肺组织中维甲酸受体相关孤儿受体(RORγt)和叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)的变化情况以及补肾平喘膏方对其的影响,以探讨补肾平喘膏方防治哮喘的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、膏方预防组、膏方治疗组和膏方防治(预防+治疗)组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠以卵蛋白(OVA)致敏并诱发哮喘模型。采用地塞米松或膏方治疗(正常组与模型组除外)后,RT-PCR法检测肺组织中RORγt和Foxp3的mRNA表达情况。结果模型组肺组织Foxp3 mRNA表达低于正常组(P<0.01),经膏方干预的各组大鼠肺组织Foxp3 mRNA表达升高(P<0.05),与正常组表达相似(P>0.05),膏方各组组间差异无统计学意义(P>0.05)。模型组肺组织RORγt mRNA表达高于正常组(P<0.01),经膏方干预的各组大鼠肺组织RORγt mRNA明显降低(P<0.05),膏方各组组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾平喘膏方可以通过调节哮喘大鼠RORγt/Foxp3平衡,改善Th17/Treg的失衡状态,从而防治哮喘。

低氧促进Th17细胞浸润于肺组织并与肺血管改建相关

目的:观察低压低氧时肺组织中维甲酸相关孤儿受体(ROR)γt的mRNA表达水平及白细胞介素17(IL-17)水平的变化,探讨Th17细胞与缺氧肺血管改建的关系。方法:50只雄性BALB/c小鼠按低氧时间随机分为0 d、3 d、7 d、14 d和28 d组,每组10只。低压低氧组小鼠均置入模拟海拔6 000 m的低压舱内饲养3 d、7 d、14 d和28 d。常氧组置常压常氧环境下饲养(即0 d组)。于相应时点通过心导管检测右室收缩压,随后快速处死取材,测量右心室重量指数,用流式细胞术检测脾脏组织Th17细胞(CD4+IL-17+RORγt+)的比例,用ELISA法检测血清中IL-4、IL-6、IL-17水平及肺组织中IL-17水平,采用real-time PCR法检测肺组织RORγt的mRNA表达水平。结果:与对照组(0 d组)相比,低压低氧7 d、14 d和28 d组小鼠右心室收缩压力、右心肥厚指数和血清IL-17含量均升高,其差异有统计学意义(P<0.05);脾脏组织中IL-17+RORγt+CD4+T细胞的百分比随缺氧时间延长呈上升趋势,14 d和28 d组与对照组相比差异显著(P<0.01);7 d、14 d和28 d组肺组织中RORγt的mRNA表达与对照组相比显著升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);14 d和28 d组肺组织中IL-17水平与对照组相比显著升高(P<0.01)。肺组织中RORγt的mRNA表达水平、IL-17表达量与心室收缩压、右室肥厚指数呈显著正相关。结论:低压低氧促进脾脏T0细胞向Th17细胞分化,肺组织中RORγt的mRNA表达水平及IL-17水平显著升高,提示Th17细胞可能参与缺氧性肺动脉高压及肺血管改建的发生。

哮喘患者外周血Th17细胞水平及功能的研究

目的探讨Th17细胞在哮喘发病机制中的作用。方法以10例哮喘患者和10例健康志愿者为研究对象,分别留取外周血标本。利用RT-PCR技术检测外周血中淋巴细胞所表达的维甲酸相关较孤儿受体γt(RORγt)mRNA的相对量,流式细胞仪检测外周血中Th17细胞的比例,ELISA法检测血浆中白细胞介素(IL)-17的水平。结果 RORγt mRNA在哮喘组的表达水平(0.46±0.07)高于对照组(0.15±0.02),差异有统计学意义(P<0.01)。Th17细胞在哮喘组的比例(28.53±7.20)%高于对照组(14.72±2.33)%,差异有统计学意义(P<0.01)。IL-17在哮喘组的水平(102.31±11.45)pg/mL明显高于对照组(59.68±8.85)pg/mL。结论 Th17细胞与哮喘具有相关性,可能通过分泌以IL-17为主的细胞因子来上调炎症反应,加重哮喘病情。