莪连颗粒对胃癌种植瘤裸鼠肿瘤生长及维甲酸相关孤核受体γt表达的影响

目的:探讨莪连颗粒对胃癌种植瘤裸鼠肿瘤生长及维甲酸相关孤核受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptorγt,RORγt)表达的影响。方法:构建裸鼠人胃癌SGC-7901种植瘤模型,实验组予莪连颗粒灌胃,对照组予生理盐水灌胃。灌胃28天后处死小鼠并测定种植瘤体积及瘤重,计算抑瘤率。采用Western-Blot法检测肿瘤组织中RORγt表达。结果:实验组小鼠瘤重及肿瘤体积均低于对照组,抑瘤率为53.3%;实验组肿瘤组织RORγt表达较对照组减少。结论:莪连颗粒可抑制胃癌肿瘤生长,该作用可能与其抑制RORγt表达,减轻由辅助性T细胞17介导的免疫调节有关。

乙型肝炎肝硬化患者辅助性T淋巴细胞17和调节性T淋巴细胞及维甲酸相关核孤儿受体γt和叉状头/翅膀状螺旋转录因子3 mRNA表达水平的变化及其临床意义研究

目的通过对乙型肝炎肝硬化患者外周血辅助性T淋巴细胞17(Th17)、调节性T淋巴细胞(Treg)及其特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)和叉状头/翅膀状螺旋转录因子3(Foxp3)mRNA表达水平的检测探讨其临床意义。方法选取2015年7—12月昆明医科大学第一附属医院诊治的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者64例,其中慢性乙型肝炎(CHB)患者21例(CHB组)、代偿期肝硬化(CLC)患者21例(CLC组)、失代偿期肝硬化(DCLC)患者22例(DCLC组)。同期选取本院体检健康者20例为对照组。收集研究对象一般资料〔性别、年龄及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)〕;应用流式细胞术检测研究对象外周血Th17、Treg表达率,计算Th17/Treg比值;应用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-q PCR)法测定外周血RORγt、Foxp3 mRNA表达水平。结果 4组年龄、ALT、AST、TBIL比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组Th17、Treg表达率及Th17/Treg比值均高于对照组(P<0.05);DCLC组Th17、Treg表达率及Th17/Treg比值均高于CHB组,Th17表达率及Th17/Treg比值均高于CLC组(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05);DCLC组RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平均高于CHB组、CLC组(P<0.05)。CHB组、CLC组、DCLC组外周血Th17表达率与RORγt mRNA表达水平均呈正相关(P<0.05);CHB组、CLC组、DCLC组外周血Treg表达率与Foxp3 mRNA表达水平均呈正相关(P<0.05);CHB组、CLC组、DCLC组外周血Th17表达率、RORγt mRNA表达水平与ALT呈正相关(P<0.05);CHB组外周血Foxp3mRNA表达水平与ALT呈正相关(P<0.05);CHB组RORγt mRNA表达水平、Foxp3 mRNA表达水平与AST、TBIL呈正相关(P<0.05)。结论 Th17、Treg及其特异性转录因子RORγt、Foxp3可能与乙型肝炎肝硬化患者的疾病进展与肝功能有关。

白细胞介素-17和维甲酸相关核孤儿受体γt在小鼠真菌性角膜炎中的表达

背景CD4＋效应T细胞（Th1／Th2）的平衡模式以往常用于解释真菌感染性疾病的免疫机制。近年来发现，除Th1和Th2细胞亚群外，Th17细胞亚群也参与抗真菌感染的免疫应答，但其在真菌性角膜炎中的作用却鲜有研究。目的探讨白细胞介素-17（IL-17）及Th17特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）在真菌性角膜炎中的表达变化及其意义。方法将清洁级BALB／c小鼠96只按随机数字表法随机分为真菌性角膜炎模型组和损伤对照组，真菌性角膜炎模型组小鼠采用角膜表面镜术辅助上皮刮除并层间注入1×10^6CFU／ml真菌菌液5μl法建立小鼠茄病镰刀菌性角膜炎模型，损伤对照组在角膜表面镜术辅助上皮刮除后层间注入等体积（5111）的PBS液。采用质量分数10％KOH湿片法检查菌丝，部分用接种法进行真菌培养并鉴定菌种，另一部分进行细菌培养以排除细菌污染。于造模后第1、3、5、7天在裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜炎症的变化特点，参照Wu和Hu的方法对角膜炎症进行评分。分别于造模后第1、3、5、7天处死小鼠并获取角膜组织行苏木精一伊红染色，观察角膜组织的病理改变。采用real—timePCR技术检测IL-17mRNA及其特异性转录因子RORγtmRNA的表达水平，并用ELISA法检测IL-17蛋白在角膜组织中的表达。结果造模后第1、3、5、7天角膜的炎症评分分别为（3．2±0．8）、（6．6±1．1）、（9．4±1．1）、（6．8±0．8）分，差异有统计学意义（F=89．786，P=0．010），其中第3天和第7天角膜炎症评分明显高于第1天，但低于第5天，差异均有统计学意义（P〈0．05）；角膜的组织病理学检测炎性细胞浸润情况与角膜炎症评分变化趋势一致。造模后第3、5、7天，IL-17mRNA在真菌性角膜炎模型组小鼠角膜的表达分别为4．12±0．73、20．72±1．81、14．16±1．88，高于损伤对照组的0．35±0．17、0．28±0．09、0．22±0．09，差异均有统计学意义（P〈0．01），且组内比较第5天时表达量高于第1、3、7天值，差异有统计学意义（P〈0．01），真菌性角膜炎模型组IL-17蛋白在造模后第1、3、5、7天的表达量均明显高于损伤对照组，差异均有统计学意义（P〈0．叭）。真菌性角膜炎模型组各时间点RORγt mRNA在角膜组织中的表达变化与IL-17mRNA的表达趋势一致（P〈0．01）。结论IL-17及其特异性转录因子RORγt在真菌性角膜炎局部组织中的表达量均上调，其表达量变化的趋势与其炎症反应程度相关，推测Th17在真菌性角膜炎的免疫反应中发挥重要作用。

维甲酸相关核孤儿受体γt和4-1BB/4-1BBL在口腔扁平苔藓中的表达及意义

目的研究口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中维甲酸相关核孤儿受体γ(tRORγt)和4-1BB/4-1BBL mRNA的表达。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测30例OLP患者和30例健康人外周血中RORγt和4-1BB/4-1BBL的基因表达水平。结果在OLP患者中,RORγt、4-1BB、4-1BBL mRNA的表达水平显著高于对照组(P<0.05),结果经2-ΔΔCT转换后,OLP组3种基因mRNA表达水平分别是健康对照组的3.087、3.320和4.005倍。RORγt和4-1BB mRNA的表达水平无明显相关性(P>0.05),4-1BB和4-1BBL mRNA表达水平呈正相关(r=0.455 0,P<0.05)。结论RORγt和4-1BB/4-1BBL在OLP的发病中起了一定作用。

人胎盘间充质干细胞对呼吸道合胞病毒致毛细支气管炎大鼠肺组织视黄酸受体相关孤核受体γt基因的调控及意义

目的研究人胎盘间充质干细胞（hpMSCs）对呼吸道合胞病毒（RSV）致毛细支气管炎大鼠肺组织中视黄酸受体相关孤核受体γt（RORγt）的调控及其意义。方法将36只sD幼鼠随机分为正常对照组、RSV致毛细支气管炎组（RSV组）和hpMSCs组，每组12只。RSV组和hpMSCs组均采用RSV滴鼻法建立毛细支气管炎动物模型，hpMSCs组接种病毒后向大鼠尾静脉内注射hpMSCs进行干细胞移植治疗，正常对照组不制作模型。观察3组肺组织病理学变化；应用酶联免疫吸附试验检测血浆白细胞介素17（IL-17）、IL-23的含量；采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组外周血单个核细胞（PBMC）及肺组织中RORγtmRNA的水平；采用蛋白质印迹法检测3组肺组织中RORγt蛋白的表达。结果RSV组大鼠肺组织肺间质炎症明显，肺泡间隔增宽，肺泡腔变小，有大量嗜酸粒细胞、淋巴细胞浸润；与RSV组相比，hpMSCs组肺间质炎症明显减轻，肺泡腔相对增大，炎性细胞浸润减少；正常对照组大鼠肺组织无炎性改变。RSV组血浆IL-17、IL-23含量高于正常对照组[（56±6）ng／L比（27±4）ng／L、（61±5）ng／L比（19±3）ng／L]（P〈0．05）；hpMSCs组IL-17、IL-23含量[（30±4）ng／L、（40±6）ng／L]低于RSV组（P〈0．05）。RSV组大鼠PBMC及肺组织中RORTγt mRNA表达水平均高于正常对照组（PBMC：11．4±1．1比1．0±0．0，肺组织：8．1±0．7比1．0±0．0）（P〈0．05）；hpMSCs组PBMC及肺组织中RORγtmRNA表达水平（PBMC：4．4±0．7．肺组织：3．4±0．5）均低于RSV组（均P〈0．05）。RSV组肺组织中RORγt蛋白的表达水平高于正常对照组（1．26±0．12比0．72±0．12）（P〈0．05）；hpMSCs组肺组织中RORγt蛋白表达水平（0．88±0．14）低于RSV组（P〈0．05）。结论hpMSCs可以下调RSV致毛细支气管炎大鼠肺组织中特异性转录因子RORγt及相关细胞因子的表达水平，对减轻气道炎症有重要意义。

支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

红细胞膜相关蛋白通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中Th17细胞分化

目的探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响。方法流式细胞术验证不同浓度ERMAP-Ig融合蛋白功能;琼脂糖凝胶电泳鉴定ERMAP基因敲除小鼠。流式细胞术检测ERMAP-Ig融合蛋白在体外对Th17细胞分化影响。40只6周龄普通C57BL/6小鼠随机分为2组建立EAE模型:对照(control)-Ig和ERMAP-Ig组,每组20只;记录临床评分;流式细胞术检测EAE小鼠体内Th17细胞分化情况。40只6周龄已鉴定的野生型和ERMAP基因敲除小鼠分为2组建立EAE模型:ERMAP^(+/+)和ERMAP^(-/-)组,每组20只。记录临床评分;脊髓HE和固蓝(LFB)染色并进行组织学半定量评分。流式细胞术检测IL-17A+CD4+T细胞百分比;Western blotting检测IL-6、白细胞介素17(IL-17)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、ROR-γt蛋白水平表达;Real-time PCR检测IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、STAT3和ROR-γt的mRNA表达;ELISA检测细胞水平IL-17和TNF-α的表达。结果1.外源性ERMAP-Ig融合蛋白抑制体内外Th17细胞分化且减轻小鼠EAE症状。2.与对照组相比,ERMAP^(-/-)组EAE小鼠炎性浸润和脱髓鞘症状加重,Th17分泌IL-17A增加。3.内源性ERMAP基因敲除后,IL-17、TNF-α、IL-6、STAT3及ROR-γt表达均增加。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ERMAP可能通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路调控Th17细胞分化,参与小鼠EAE发生发展。

全真一气汤对肾气虚型哮喘大鼠转录因子FOXP3/RORγt及Th17/Treg免疫失衡的影响

目的 观察全真一气汤对肾气虚型哮喘大鼠Th17/Treg及相关细胞因子(IL-6、IL-17、IL-10、IL-35)和转录因子维甲酸相关孤独核受体-γt(OrPhan nuclear recePtor gamma t,RORγt)、叉头状转录因子(forkhead transcriPtion factor P3,FOXP3)的影响,探讨全真一气汤调控哮喘气道炎症的机制。方法 将24只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、全真一气汤低剂量治疗组(8.33g·kg^(-1))和全真一气汤高剂量治疗组(33.32 g·kg^(-1)),每组6只。模型组与低、高剂量治疗组予卵蛋白1mg、氢氧化铝凝胶10 mg的混悬液1 mL致敏,1%的卵清蛋白超声雾化吸入以激发哮喘,进行惊恐刺激,负重游泳直至力竭等进行肾气虚型哮喘大鼠造模,造模成功后开始药物干预。空白组和模型组予生理盐水3 mL灌服,治疗组按低、高剂量予全真一气汤3 mL灌服,每日1次,连服30 d。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time Quanti tative PCR,qRT-PCR)检测各组大鼠肺组织中FOXP3、RORγt mRNA水平,流式细胞术检测外周血Th17、Treg细胞百分比,酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测血清IL-6、IL-17、IL-10、IL-35细胞因子含量。结果 与空白组相比,模型组血Th17细胞比例、血清IL-6、IL-17含量及相关肺组织中RORγt mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),模型组Treg细胞比例、血清IL-10、IL-35含量及相关肺组织中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,全真一气汤低、高剂量组血Th17细胞百分比、血清IL-6、IL-17含量及肺组织RORγt mRNA和蛋白的表达明显减少(P<0.05),高剂量组血Treg细胞百分比显著升高(P<0.05),但全真一气汤低剂量组血Treg细胞百分比无显著变化(P>0.05),高剂量组血清IL-10含量增加(P<0.05),全真一气汤低剂量组IL-10含量亦增加,但差异无统计学意义(P>0.05),两组血清IL-35含量、FOXP3 mRNA及蛋白的表达同时明显升高(P<0.05);与全真一气汤低剂量组相比,高剂量组Th17细胞百分比明显降低(P>0.05),IL-17亦降低(P>0.05),IL-6含量及RORγt表达减少(P<0.05),高剂量组IL-35含量及Treg相关的FOXP3表达增加(P<0.05)。结论 全真一气汤低剂量组、全真一气汤高剂量组全真一气汤均可降低Th17细胞及相关促炎因子IL-6、IL-17的含量,抑制RORγt的表达;高剂量组可以升高Treg细胞百分比,而全真一气汤低剂量组对Treg细胞百分比影响则不明显,但都可以上调FOXP3的表达,促进相关抑炎因子IL-10、IL-35分泌。

Th17转录因子RORγt和BATF及Th17相关细胞因子在中性粒细胞亚型哮喘发病中的作用

目的:检测中性粒细胞亚型哮喘(NA)患者痰上清中辅助性T细胞17(Th17)特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、B细胞转录激活因子(BATF)及外周血中Th17细胞相关细胞因子白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素17(IL-17)和白细胞介素22(IL-22)表达水平,探讨其在NA发病中的作用。方法:以56例支气管哮喘患者为研究对象,4.5%生理盐水雾化诱导痰,经细胞MGG染色进行哮喘的炎症亚型分型,分为嗜酸性粒细胞亚型哮喘(EA)组(26例)和NA组(30例),以常规体检者为健康对照组(NC组,28人)。实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测痰上清中BATF和RORγt mRNA表达水平。空腹抽取各组研究对象肘静脉血10mL,Ficoll密度梯度离心后分离外周血单个核细胞(PBMC),ELISA法测定血清中IL-8、IL-17和IL-22蛋白表达水平,流式细胞术检测PBMC中Th17细胞(CD4+IL-17+细胞)的百分率。结果:与NC组和EA组比较,NA组患者血清中IL-8、IL-17和IL-22表达水平均明显升高(P<0.05);与NC组比较,EA组患者血清中IL-8、IL-17和IL-22表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与NC组和EA组比较,NA组患者痰上清中BATF和RORγt mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与NC组和EA组比较,NA组患者PBMC中Th17细胞百分率均明显升高(P<0.01);与NC组比较,EA组患者PBMC中Th17细胞百分率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-17转录因子RORγt和BATF参与了NA患者气道炎症发生过程,且Th17细胞及其相关细胞因子IL-17和IL-22的异常表达与NA的全身反应有关联。

沉默RORα通过活化Wnt/β-catenin通路靶基因促进人胃癌细胞增殖

目的探讨人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体(ROR)α与Wnt/β-连环素(catenin)通路的相互作用。方法噻唑蓝(MTT)实验验证沉默RORα对胃癌细胞系MGC803的增殖作用;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹与免疫共沉淀检测敲低RORα对Wnt/β-catenin通路相关分子与靶基因表达;荧光素酶报告检测c-Myc基因启动子活性。结果敲低RORα可显著促进胃癌细胞增殖(P<0.05)。当RORα被敲低时可显著上调Wnt1 mRNA和蛋白表达(P<0.05);但对β-catenin无明显影响(P>0.05)。免疫共沉淀提示敲低RORα可显著降低RORα与β-catenin的结合效率(P<0.05)。RORα敲低后,核内β-catenin与转录因子(TCF)-4表达水平明显升高(P<0.05)。Wnt通路下游基因Axin、c-Myc、c-Jun和基质金属蛋白酶(MMP)-9的mRNA和蛋白水平显著上调(P<0.05)。荧光素酶报告提示,敲低RORα可显著增强c-Myc启动子活性(P<0.05)。结论敲低RORα可活化Wnt/β-catenin信号通路从而促进胃癌细胞增殖。

哮喘患儿外周血单个核细胞瘦素与RORγt和Foxp3表达的关系

目的:探讨哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)分泌的瘦素水平变化及其与Th17特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体γt(RORγt)和Foxp3+调节性T细胞(Treg)特异性转录因子叉头状转录因子p3(Foxp3)表达的关系。方法:选取2018年6月-2020年6月本院收治的25例哮喘患儿设为哮喘组。根据哮喘组患儿疾病所处的时期不同,分为发作期和缓解期。对哮喘发作期儿童经规则联合吸入糖皮质激素/长效β2受体激动剂(ICS/LABA)治疗后定期随访,无症状和体征超过3个月以上作为缓解期。选取同期在本院体检25例的健康儿童为对照组。比较哮喘组发作期和缓解期及对照组的瘦素、FEV1%、RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平,并分析哮喘组发作期患儿瘦素与PBMC的FEV1%、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA及RORγt mRNA与Foxp3 mRNA的相关性。结果:对照组、哮喘组发作期和缓解期的瘦素、FEV1%、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。哮喘组发作期的瘦素、RORγt mRNA相对表达量均高于对照组和哮喘组缓解期,FEV1%、Foxp3 mRNA均低于对照组和哮喘组缓解期,差异均有统计学意义(P<0.01)。对照组和哮喘组发作期的瘦素、FEV1%、RORγt mRNA、Foxp3 mRNA比较,差异均无统计学意义(P>0.01)。哮喘组患儿发作期PBMC培养上清液瘦素浓度与PBMC的RORγt mRNA呈正相关(r=0.884,P<0.01);与PBMC的Foxp3 mRNA呈负相关(r=-0.926,P<0.01);与FEV1%呈负相关(r=-0.936,P<0.01);Foxp3 mRNA与RORγt mRNA呈负相关(r=-0.854,P<0.01)。结论:哮喘患儿PBMC分泌的瘦素与RORγt mRNA呈正相关,与Foxp3 mRNA呈负相关。

Th17/Treg相关因子在哮喘小鼠中的表达变化及其意义

目的检测哮喘模型小鼠辅助性T17细胞（Th17）和调节性T细胞（Treg）相关细胞因子及受体的表达变化,探讨Th17/Treg在哮喘发病机制中的作用。方法 20只清洁级BALB/C雌鼠,鼠龄6周,体质量18~20 g。随机分为对照组和哮喘组,每组10只。哮喘组小鼠腹腔注射卵白蛋白（OVA）与氢氧化铝的氯化钠混悬液3次后,给予雾化的OVA激发,建立哮喘小鼠模型。对照组给予等量的0.9%氯化钠溶液。末次激发后24 h处死小鼠,检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数和细胞分类计数;酶联免疫吸附分析（ELISA）、实时定量聚合酶链反应（Q-PCR）和Western blot法测定小鼠外周血和肺组织中的Th17/Treg细胞相关因子及受体的表达水平。结果哮喘组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性细胞比例、中性粒细胞比例、淋巴细胞比例显著高于对照组。哮喘组外周血和肺组织中白细胞介素（IL）-17和IL-18高于对照组[IL-17（124.36±2.14）pg/mL、（21.70±1.02）pg/mL vs（25.98±5.23）pg/mL、（19.95±3.21）pg/mL;IL-18（227.06±24.14）pg/mL、（413.97±32.01）pg/mL vs（120.38±10.32）pg/mL、（238.21±15.33）pg/mL],IL-10和转化生长因子β（TGF-β）低于对照组[IL-10（60.42±24.12）pg/mL、（65.14±15.11）pg/mL vs（61.07±14.36）pg/mL、（104.36±28.16）pg/mL;TGF-β（38.72±12.12）pg/mL、（58.65±24.21）pg/mL vs（30.19±10.16）pg/mL、（121.06±39.12）pg/mL];哮喘组维甲酸相关孤儿素受体γt（RORγt）水平高于对照组[（8.77±2.35）、（4.46±1.05）vs（3.03±1.02）、（3.45±1.25）],肺叉头蛋白3（FoxP3）水平低于对照组[（5.15±1.84）vs（12.35±3.21）];并且外周血和肺组织中相关细胞因子及受体的表达差异具有显著统计学意义（P〈0.01）。结论 Th17/Treg及其主要相关因子在哮喘的发病中具有重要作用。

Foxp3/Treg与RORγt/Th17失衡在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染期间可见到广泛的免疫介导的肝损伤. HBV免疫清除的失败从而导致慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB),并大大增加肝硬化和肝细胞癌的风险. T淋巴细胞在HBV感染中的免疫反应起重要作用,尤其是调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)和辅助性T细胞17(helper T cell 17, Th17)失衡的问题,二者的平衡失调是HBV持续感染与肝脏炎性损伤的重要机制.为了更好地揭示潜在的机制,在本综述中,我们系统地回顾了Treg和Th17,讨论了在HBV感染后Treg与Th17两者之间的关系,并对特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptorγt, RORγt)和叉头/翅膀状螺旋转录因子3(forkhead/winged helix family transcription factor 3, Foxp3)两者之间的变化,随着近几年对HBV免疫靶向治疗研究的不断深入,Foxp3/Treg与RORγt/Th17的平衡似乎对HBV的感染至关重要,以此为契机可以为CHB的治疗提供新的思路.

电针人迎、太冲穴对自发性高血压大鼠模型肾脏组织FoxP3和RORγt的影响

[目的]观察“活血散风”针刺法对高血压前期大鼠肾脏组织叉头转录因子(FoxP3)和维甲酸相关孤独核受体(RORγt)蛋白和mRNA表达的影响。[方法]将16只4周龄自发性高血压大鼠(SHRs)随机分为模型组(SHR组)和电针组(电针+SHR组),每组8只,另将8只同周龄WKY大鼠作为空白对照组(WKY组)。电针组给予针刺人迎、太冲治疗,每日1次,连续治疗2周。采用Softron无创血压仪测量干预前、干预1周、干预2周时的收缩压水平,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏结构形态,蛋白免疫印迹(Western blot)和聚合酶链反应(PCR)技术检测大鼠肾脏组织FoxP3、RORγt蛋白和mRNA表达情况。[结果]SHR大鼠收缩压水平明显高于WKY组(P<0.05),干预两周后,电针+SHR组收缩压水平明显低于SHR组(P<0.05);SHR组肾脏组织RORγt mRNA表达明显高于WKY组(P<0.05),FoxP3蛋白和mRNA的表达、FoxP3/RORγt比值明显低于WKY组(P<0.05);电针+SHR组肾脏组织RORγt mRNA表达明显低于SHR组(P<0.05),FoxP3蛋白表达、FoxP3/RORγt比值明显高于SHR组(P<0.05);电针干预后SHR大鼠未出现明显的肾脏形态改变。[结论]“活血散风”针刺法可调节FoxP3和RORγt的表达,其对高血压前期大鼠的降压作用可能与调节FoxP3和RORγt的平衡有关。

病毒性心肌炎小鼠不同时期心肌组织转录因子ROR-γt的表达

目的观察Th17细胞特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptorγt,ROR-γt)在柯萨奇病毒B3(coxsackie virus B3,CVB3)诱导的病毒性心肌炎小鼠不同时期心肌组织中的表达变化,初步探讨ROR-γt在病毒性心肌炎发病中的作用。方法雄性BALB/c小鼠腹腔注射CVB3建立病毒性心肌炎小鼠模型(实验组),对照组小鼠腹腔注射等量的磷酸盐缓冲液,按注射后第0、1、2、3、4、6周分为6个时点亚组,每个时点亚组至相应时间取小鼠心脏,苏木精-伊红染色观察心肌病理改变,半定量反转录聚合酶链反应测定小鼠心肌组织ROR-γt mRNA的表达,Western-Blotting测定小鼠心肌组织ROR-γt蛋白的表达。结果苏木精-伊红染色证实病毒性心肌炎模型构建成功。实验组小鼠中,1周亚组ROR-γt mRNA及其蛋白的表达较0周亚组升高,4周亚组表达最高,6周亚组表达低于4周亚组但仍高于0周亚组;实验组各亚组ROR-γt mRNA及其蛋白的表达与相应时间对照组各亚组比较,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论Th17细胞特异性转录因子ROR-γt在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中呈高表达,且其变化趋势与Th17细胞改变趋势一致,提示ROR-γt通过参与病毒性心肌炎中Th17细胞的分化,可能参与病毒性心肌炎的免疫发病过程。

扶正口服液通过STAT3-RORγt信号通路对胃癌小鼠T h17细胞的调控作用

目的:探讨扶正口服液通过信号转导与转录激活因子3(STAT3)-维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)信号通路对胃癌小鼠辅助性T细胞17(T h17)的调控作用。方法:将KM小鼠按随机数字表法分为空白组,阳性对照(5-FU)组,低、中、高剂量组(扶正口服液剂量分别为0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL/10 g),每组8只。皮下移植SCG-7901造模,干预28 d后,检测小鼠瘤体体积,肿瘤抑制率,肿瘤组织STAT3和RORγt信使RNA(mRNA)及蛋白的表达,血清白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-22(IL-22)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果:给药后,5-FU组,低、中、高剂量组瘤体体积均小于空白组,5-FU组瘤体体积均小于低、中剂量组,5-FU组瘤体生长抑制率均高于低、中剂量组(P<0.05)。中、高剂量组STAT3、RORγt mRNA表达量均低于空白组、5-FU组、低剂量组,(P<0.05)。中、高剂量组STAT3、RORγt蛋白表达均低于空白组(P<0.05)。低、中、高剂量组血清IL-17、IL-22、IL-6水平均低于空白组,中、高剂量组血清IL-17、IL-22、IL-6水平均低于5-FU组和低剂量组(P<0.05)。结论:高剂量扶正口服液可下调STAT3、RORγt的表达,进而抑制胃癌小鼠Th17的分化发挥抑瘤作用。

BATF、RORγt及IL-17在哮喘小鼠脾组织中的表达及意义

目的探讨B细胞活化转录因子(BATF)、维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素-17(IL-17)在哮喘小鼠脾组织中的表达及意义。方法将15只小鼠随机分为3组:生理盐水(NS)组、哮喘(AS)组和地塞米松(DXM)组,每组5只。利用卵清蛋白(OVA)造模。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)行白细胞分类计数;HE染色观察肺组织病理改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测脾组织中BATF、RORγt mRNA的表达量;并对上述指标的相关性进行分析。结果 1)与AS组相比,DXM组小鼠BALF白细胞(WBC)总数、中性粒细胞(NEU)数和嗜酸性粒细胞(EOS)数明显降低(P<0.01)。2)DXM组肺部炎症较AS组明显减轻。3)与AS组相比,DXM组脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度减低(P<0.05)。4)与AS组相比,DXM组脾组织中BATF、RORγt mRNA表达量减少(P<0.01)。5)脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度与BALF中WBC总数、NEU数、EOS数呈正相关(r=0.838、0.737、0.882,P均<0.005);脾组织BATF mRNA的表达量与RORγt mRNA表达量、脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度呈正相关(r=0.807、0.833,P均<0.005);脾组织RORγt mRNA的表达量与脾组织匀浆上清液IL-17的质量浓度呈正相关(r=0.890,P<0.005)。结论 1)在哮喘小鼠脾组织中BATF与RORγt可能共同调节IL-17的分泌,并通过IL-17的致炎作用参与哮喘气道炎症的发生发展。2)DXM可能通过BATF、RORγt途径部分阻止脾源性Th17细胞的分化,减少IL-17的分泌。

Notch1/ROR-γt通路在自身免疫性甲状腺炎发病过程中的作用研究

目的探讨果蝇双翅边缘缺刻同源基因1(Notch1)/维甲酸相关孤核受体γt(ROR-γt)通路在自身免疫性甲状腺炎(AIT)发病过程中的调控机制,为相关药物研发及临床治疗提供理论参考。方法免疫组化法测Notch1、ROR-γt分别在桥本氏甲状腺炎组织标本及正常甲状腺组织标本中表达水平。将免疫CBA/j小鼠随机分为正常对照组、模型组、Notch1通路阻断剂(DAPT)组(200 ng/kg),Notch通路激活剂(Jagged1)组(50 ng/kg),每组10只。皮下注射甲状腺球蛋白(mTg)+弗氏佐剂(CFA)建立AIT模型。连续给药3周,1次/周后,ELISA法测血清抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平;计算甲状腺指数;HE法观察组织形态学变化;TUNEL法测细胞凋亡率;免疫组化法测Notch1与ROR-γt阳性表达水平;Western blot法测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)、叉头状螺旋转录因子3(Foxp3)蛋白表达水平。结果桥本氏甲状腺炎组织中Notch1、ROR-γt蛋白表达高于正常甲状腺组织(P<0.05)。模型组小鼠甲状腺结构破坏严重,甲状腺指数、血清TGAb、TPOAb水平、滤泡上皮细胞凋亡率、Notch1、ROR-γt、TNF-α、IL-6、TRAIL表达升高(P<0.05),Foxp3表达降低(P<0.05)。激活Notch1/ROR-γt通路小鼠甲状腺结构损伤进一步加重,阻断Notch1/ROR-γt通路小鼠甲状腺结构损伤缓解,且上述相关指标变化差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Notch1/ROR-γt通路激活参与AIT炎症损伤及滤泡上皮细胞凋亡过程,抑制Notch1/ROR-γt通路激活,可缓解AIT小鼠甲状腺结构损伤。

右美托咪定通过降低IL-17和RORγt的表达降低脓毒症小鼠的肺损伤

目的观察盲肠结扎法对小鼠血液和肺组织中白细胞介素(IL-17)和维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)表达的影响和右美托咪定的干预作用。方法雄性C57BL/6小鼠32只,体重20～25g,随机分为四组:S组(n=8)为假手术组;Dex组(n=8)为假手术加右美托咪定40μg/kg腹腔注射;Sep组(n=8)为盲肠结扎穿孔组;Sep+Dex组(n=8)为盲肠结扎穿孔加右美托咪定40μg/kg腹腔注射。24h后用眼球放血处死小鼠,并收集小鼠的血液和肺组织。采用苏木精-伊红法(HE)染色后,在光镜下观察肺组织损伤评分;检测小鼠肺湿重/干重比(W/D);ELISA法检测血浆和肺组织中IL-17的浓度;Western blot法检测肺组织RORγt蛋白的含量。结果 S组和Dex组未见明显损伤,Sep组肺出血、充血、炎性细胞浸润明显,Sep+Dex组肺损伤程度明显减轻(P<0.01)。与S组比较,Sep组小鼠外周血和肺组织W/D明显升高,IL-17浓度明显升高,肺组织中RORγt蛋白含量明显升高(P<0.05)。与Sep组比较,Sep+Dex组上述指标都明显降低(P<0.05)。结论盲肠结扎模型可导致小鼠外周血和肺组织IL-17及肺组织RORγt的表达水平明显升高,而右美托咪定可通过降低IL-17和RORγt的表达减轻盲肠结扎致脓毒症小鼠肺损伤程度。

γ促分泌酶抑制剂MW167对毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞中Th17细胞比例的影响

目的观察γ促分泌酶抑制剂MW167对呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞比例、视黄酸受体相关孤核受体γt(RORγt)mRNA表达及细胞上清液中IL-17水平的影响。方法选择RSV毛细支气管炎30例患儿作为观察组,25例健康体检儿作为对照组,抽取患儿外周静脉血,分离PBMC。将对照组儿童外周血分离所得的PBMC作为正常组,观察组患儿外周血分离所得的PBMC作为RSV组、MW167组,MW167组加入MW167,培养48 h。采用流式细胞术检测三组Th17细胞比例,ELISA检测细胞培养上清液中IL-17水平,实时荧光定量PCR检测细胞中的RORγt mRNA表达。结果正常组、RSV组、MW167组PBMC中Th17细胞比例分别为0.49%±0.09%、1.56%±0.77%、0.84%±0.23%,RSV组与正常组相比P<0.01,MW167组与RSV组相比P<0.05。正常组、RSV组、MW167组PBMC细胞培养上清液中IL-17水平分别为(12.18±2.97)、(20.88±4.10)、(12.91±4.28)pg/mL,RSV组与正常组相比,MW167组与RSV组相比,P均<0.05。正常组、RSV组、MW167组PBMC中RORγt mRNA相对表达量分别为1.0、5.72±0.53、1.82±0.21,RSV组与正常组相比,MW167组与RSV组相比,P均<0.05。结论γ促分泌酶抑制剂MW167可降低RSV毛细支气管炎患儿PBMC中RORγt mRNA表达、Th17细胞比例及细胞培养上清液中IL-17水平。