干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19在小鼠植入前胚胎中的表达

目的研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)在小鼠植入前胚胎中的表达情况,探讨GRIM-19在早期胚胎发育中的动态变化。方法采用Western blot分析和Real-time PCR检测小鼠植入前胚胎(2-细胞期、4-细胞期、8-细胞期、桑葚胚和囊胚期)中GRIM-19蛋白和mRNA水平。结果 GRIM-19在小鼠植入前各期胚胎中均有表达,其蛋白和mRNA水平从2-细胞期逐渐增高,至8-细胞期达高峰,随后呈下降趋势。结论小鼠植入前胚胎中GRIM-19的表达量随发育时程的改变而改变,提示GRIM-19在早期胚胎发育过程中具有一定的作用。

干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其作用

目的探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19（GRIM-19）在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其与胚胎着床的关系。方法收集早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织,采用免疫组织化学法检测GRIM-19蛋白在子宫内膜上皮细胞中的表达及定位情况;收集早期妊娠、假孕和雌孕激素处理小鼠子宫组织,采用Western blotting和Real-time PCR检测GRIM-19蛋白和mRNA水平;TUNEL方法检测早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织细胞凋亡情况;采用p EGFP GRIM-19质粒GRIM-19-siRNA转染技术使RL95-2细胞系过表达或低表达GRIM-19,检测其对RL95-2-Be Wo共培养体外着床模型球状体黏附率的影响,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡,线粒膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体跨膜电位;采用Western blotting和Real-time PCR检测转染后信号转导子和转录激活因子3（STAT3）、肿瘤坏死因子（TNF）-α及白细胞介素（IL）-11蛋白和mRNA水平。结果 GRIM-19在早期妊娠第1~6天小鼠子宫腔上皮和腺上皮均有表达,妊娠第4天GRIM-19蛋白和mRNA水平减低,细胞凋亡减少;假孕第1~6天小鼠子宫内膜GRIM-19表达无明显差异;雌激素处理组小鼠子宫内膜GRIM-19表达减弱;过表达GRIM-19后,RL95-2-Be Wo共培养球状体黏附率降低,细胞凋亡增加,线粒体膜电位减低,RL95-2细胞系中STAT3及IL-11蛋白和mRNA水平减低,TNF-α蛋白和mRNA水平升高。结论 GRIM-19在胚胎着床中发挥重要作用,可能是通过调节细胞凋亡和免疫耐受为胚胎着床提供保障。

维甲酸/干扰素联合诱导的细胞凋亡相关基因-19在恶性肿瘤中的研究进展

维甲酸/干扰素联合诱导的细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)是一种由干扰素和维甲酸联合诱导表达的细胞凋亡调节基因,通过降低细胞内GRIM-19蛋白水平,可抑制干扰素及维甲酸联合诱导的细胞凋亡。GRIM-19不仅通过与多种因子相互作用参与炎症因子相关的病理生理过程,而且在细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭等方面也发挥了重要作用。GRIM-19可能成为肿瘤的潜在治疗靶点,以GRIM-19为基础靶向治疗肿瘤可能是未来的研究方向。本文就GRIM-19在恶性肿瘤中的研究进展进行综述。

GRIM-19及其靶基因产物STAT3在胃癌组织中的表达及其意义

目的:探讨维甲酸-干扰素诱导死亡相关基因-19(GRIM-19)及其靶基因产物STAT3在胃癌组织中的表达及其临床意义,阐明其在胃癌发生和发展过程中的作用。方法:应用RT-PCR、免疫组织化学染色法和Western blotting法检测48例胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中GRIM-19和STAT3的mRNA及蛋白表达水平,并分析其蛋白的表达情况与临床病理特征的关系。结果:GRIM-19 mRNA及蛋白表达水平在胃癌及癌旁组织较正常胃组织表达减弱(P<0.01),且GRIM-19蛋白表达水平与胃癌分化程度和临床分期有关联(P<0.01);STAT3 mRNA及蛋白表达水平在胃癌及癌旁组织较正常胃组织表达增强(P<0.01),且STAT3蛋白表达水平与胃癌分化程度、淋巴结转移及临床分期有关联(P<0.01);GRIM-19与STAT3在胃癌组织中表达水平呈负相关关系(r=-0.396,P<0.01)。结论:在胃癌组织中有STAT3持续高表达和GRIM-19低表达共存现象,可能与正常细胞发生恶性转化和异常增殖有关,促进了胃癌的发生和发展。

GRIM-19及其靶基因产物STAT3在胰腺癌组织中的表达及相关性研究

应用RT-PCR和Western Blotting法检测干扰素/维甲酸联合诱导细胞死亡相关基因-19(GRIM-19)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)mRNA及蛋白在26例胰腺癌组织及癌旁组织中的表达,分析两者的相关性。结果显示,胰腺癌组织中GRIM-19mRNA及蛋白表达水平低于癌旁组织(P<0.01);胰腺癌组织中STAT3mRNA及蛋白表达水平高于癌旁组织(P<0.01);两者的表达呈负相关(r=-0.426,P<0.01)。因此,GRIM-19在胰腺癌中呈低表达,而STAT3呈高表达,这种异常表达与胰腺癌的发生发展密切相关。

维甲酸-干扰素联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19在子宫颈癌中表达及作用研究

目的探讨维甲酸-干扰素联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)在子宫颈癌组织中的表达水平,进一步揭示其在肿瘤生长中的作用及分子机制。方法选取自2014年9月至2016年7月西安市第四医院妇产科收治的30例子宫颈癌患者的活检组织标本为肿瘤组;另选取同期收治的20例子宫肌瘤患者或宫颈肌瘤患者,并在进行子宫肌瘤手术过程中,取得正常的子宫颈组织样本作为对照组。另外,选取HeLa细胞珠作为体外实验对象。运用免疫组化方法和Western blot分析GRIM-19在子宫颈癌细胞株及临床组织中的表达水平;细胞增殖实验探讨干涉GRIM-19后肿瘤细胞的生长情况及机制。结果与对照组的组织比较,肿瘤组的组织中GRIM-19 mRNA的表达水平显著增加,组间比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。低表达GRIM-19基因后,HeLa细胞的增殖活力显著降低。GRIM-19基因低表达后,HeLa细胞凋亡相关蛋白P53也受到抑制。结论在抑制HeLa细胞中的GRIM-19基因表达后,细胞的存活及抗凋亡作用能力显著降低,提示GRIM-19基因对肿瘤细胞起到了保护作用。

GRIM-19及其靶基因产物STAT3在十二指肠癌中的表达及其意义

目的:研究干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)及其靶基因产物信号转导和转录活化因子3(STAT3)在十二指肠癌中的表达,探讨其在十二指肠癌发生和发展中的作用。方法:32例十二指肠癌组织和30例十二指肠炎及溃疡对照组织,采用免疫组织化学方法检测其GRIM-19及STAT3蛋白表达情况。结果:十二指肠癌组织GRIM-19蛋白表达水平较十二指肠炎及溃疡组织表达减弱(P<0.05),且与十二指肠癌的分化程度有关(P<0.01);十二指肠癌组织STAT3蛋白表达水平较十二指肠炎及溃疡组织表达增强(P<0.01),且与十二指肠癌的分化程度及淋巴结转移有关(P<0.01);十二指肠癌组织中GRIM-19与STAT3表达呈负相关(r=-0.470,P<0.01)。结论:GRIM-19蛋白在十二指肠癌组织中的低表达或缺失与十二指肠癌的发生和发展密切相关。十二指肠癌组织中有GRIM-19低表达与STAT3高表达共存现象。

食管鳞癌组织中GRIM-19的表达及意义

目的探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19(GRIM-19)蛋白在食管鳞癌组织中的表达及意义。方法运用免疫组化技术检测68例食管鳞癌、35例癌旁不典型增生及68例正常食管黏膜组织中GRIM-19蛋白表达;采用TUNEL方法检测食管鳞癌组织中的细胞凋亡。结果 1)GRIM-19蛋白在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中的阳性表达率分别为80.9%(55/68)、34.3%(12/35)和11.8%(8/68),两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05);2)食管鳞癌组织中肿瘤细胞的凋亡与GRIM-19蛋白表达有关,GRIM-19蛋白阳性表达组中肿瘤细胞AI为(5.06±0.93)%,显著高于阴性表达组的(1.12±0.06)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GRIM-19蛋白的低表达可能与食管鳞癌的细胞凋亡有关。

GRIM-19与泌尿男生殖系肿瘤发生发展关系的研究进展

维甲酸和干扰素诱导的死亡相关基因19(GRIM-19)是线粒体膜呼吸链烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶复合物(Ⅰ)的亚基,参与细胞能量代谢,并能够通过负调控信号转导及转录活化因子3(STAT3)发挥抑癌作用。GRIM-19作为抑癌基因,其表达水平在前列腺癌(PCa)组织中明显降低,与存活素(Survivin)、STAT3及特定microRNA相互作用共同调控PCa细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭;在肾癌(RCC)组织中GRIM-19表达水平明显降低,与RCC的病理分级有关联,影响STAT3转录活性及表达水平,发挥抑制细胞增殖、迁移、侵袭和促进细胞凋亡的作用;在多数中国人膀胱癌(BC)组织中GRIM-19表达水平明显降低且与STAT3表达呈负相关关系,并可能与BC的病理分级、临床分期、转移情况和顺铂类化疗药物抵抗有关联。GRIM-19还可能与肾盂癌、肾血管平滑肌脂肪瘤和肾母细胞瘤等有关联。GRIM-19在多数泌尿男生殖系肿瘤组织中低表达,参与肿瘤的发生发展,但目前尚无相关综述,故本文作者针对GRIM-19在泌尿男生殖系肿瘤中的研究进展作一综述。

全反式维甲酸联合干扰素-β对人骨肉瘤细胞株MG-63的生长抑制作用

目的观察全反式维甲酸（ARTA）联合干扰素（IFN）-13对人骨肉瘤细胞株MG-63的生长抑制试验以及对干扰素／维甲酸联合应用诱导凋亡的相关基因19（GRIM-19）和原癌基因信号转导与转录激活因子-3（STAT3）的表达的影响。方法噻唑蓝（MTF）比色法检测不同药物浓度的ATRA／IFN-13，单用或联合应用对MG-63的增殖抑制率；流式细胞仪AnnexinV—FITC／PI法检测MG-63的凋亡；逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测MG-63中STAT3与GRIM．19基因的扩增情况；Westernblot检测MG-63中STAT3与GRIM-19蛋白的表达。结果ARTA和IFN．B单用或联合应用均可抑制MG．63的增殖，呈浓度依赖性并与作用时间有关；联合应用抑制作用明显增强，与其他组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。ARTA、IFN．B单独作用，可诱导MG-63凋亡；联合应用时，诱导凋亡作用显著增强。ARTA联合IFN-B作用，GRIM-19mRNA的表达明显增强（1．620±0．095），GRIM-19蛋白明显升高（1．850±0．060），与其他组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。STAT3mR-NA的表达明显降低（0．120±0．032），STAT3蛋白明显降低（0．540±0．075），与其他组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论ARTA／IFN．13作用，可明显抑制MG-63的增殖并诱导其凋亡，其机制可能是诱导GRIM-19高表达，特异性结合于STAT3的转录活性区域，使原癌基因STAT3的表达降低。

GRIM-19基因对肺腺癌耐药细胞株A549/DDP药物敏感性及相关基因表达的影响

目的:本研究旨在探讨干扰素/维甲酸诱导凋亡相关基因19(gene-associated with retinoid-interferon-induced mortality19,GRIM-19)对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP化疗药物敏感度及相关基因表达的影响。方法:采用脂质体法将重组质粒PIRES-Puro2-GRIM-19-Myc和空载体PIRES-Puro2-Myc分别转染顺铂(cisplatin,DDP)耐药的人肺腺癌细胞株A549/DDP。蛋白免疫印迹法检测亲本A549、耐药A549/DDP、转染GRIM-19基因的A549/DDP及转染空载体的A549/DDP细胞中GRIM-19蛋白的表达。MTT法检测稳定转染GRIM-19基因后A549/DDP细胞对多种化疗药物敏感度的改变。实时荧光定量-PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)法检测GRIM-19、信号转导子与转录激活子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)mRNA在稳定转染GRIM-19基因后A549/DDP细胞中的表达情况。结果:蛋白质印迹法检测结果显示,A549/DDP细胞转染GRIM-19基因后GRIM-19蛋白的表达上调;A549/DDP细胞较亲本A549细胞对DDP的耐药指数为16.86±1.32;A549/DDP细胞转染GRIM-19基因后,较转染空载体组A549/DDP细胞耐药性降低,耐药逆转倍数为3.70±0.91。转染GRIM-19基因后,A549/DDP细胞中STAT3、P-gp和VEGFmRNA表达均下调。结论:GRIM-19能增强DDP耐药细胞A549/DDP对化疗药物的敏感度,这可能与下调STAT3、VEGF和P-gp的表达具有相关性,GRIM-19可能成为逆转A549/DDP细胞耐药性的一条有效途径。

信号转导和转录激活因子3及调控基因与卵巢癌

信号转导和转录激活因子3(STAT3)是细胞因子和生长因子受体信号的下游基因,不仅参与人体的正常生理过程,而且与肿瘤的生长、转移、浸润有关。研究发现,STAT3受到维甲酸-干扰素诱导的死亡相关基因19(GRIM-19),SOCS3,PTEN和PIAS3等基因的调控,其调控基因的异常表达将引起STAT3的持续激活和表达升高,导致肿瘤的发生、发展。在卵巢癌的发病机制中STAT3信号转导通路的持续性激活至关重要,其激活并且有基质金属蛋白酶类、Bcl-2家族成员、血管内皮生长因子、Her2基因的参与,在肿瘤的细胞抗凋亡、血管重建、浸润转移、药物耐药等过程中起重要作用,为卵巢癌免疫治疗方面提供新策略。

Na^(+)/K^(+) ATPase β1亚基对乙型肝炎病毒复制的影响及其作用机制

目的探讨Na^(+)/K^(+) ATPaseβ1亚基(ATP1B1)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响及其作用机制。方法将稳定表达HBV的质粒pHBV1.3分别与质粒VR1012-ATP1B1及siRNA ATP1B1序列共转染Hep G2细胞,ELISA法检测细胞培养上清中HBs Ag的含量,qRT-PCR法检测细胞中HBV DNA及RNA含量。Western blot法检测过表达ATP1B1的Hep G2细胞中维甲酸诱导基因蛋白-Ⅰ(retinoic acid-inducible gene-Ⅰ,RIG-Ⅰ)和黑色素瘤分化相关抗原5(melanoma differentiation-associated 5,MDA5)蛋白的表达,qRT-PCR法检测细胞因子(IFNα、IFNβ、IFNγ、IL-28a、IL-29)及IFN诱导基因(interferon-stimulated gene,ISG)mRNA含量,以转染载体VR012为对照。结果过表达ATP1B1可显著降低HepG2细胞培养上清中HBs Ag及HBV DNA、RNA含量(P <0.01);沉默ATP1B1可显著升高HepG2细胞培养上清中HBsAg及HBV DNA、RNA含量(P <0.01)。与VR012组比较,过表达ATP1B1的Hep G2细胞中RIG-Ⅰ和MDA5蛋白表达升高;IFNα、IFNβ和IL-29 mRNA含量明显升高(P <0.05),IFNγ和IL-28A mRNA含量差异无统计学意义(P> 0.05):ISG15、ISG56、OAS2和BST-2 mRNA含量显著升高(P <0.01),GBP-1 mRNA含量差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 ATP1B1可抑制HBV的复制,可能是通过上调细胞内RIG-Ⅰ及MDA5蛋白,诱导Ⅰ型IFN表达,激活下游抗病毒因子ISG发挥作用。