转录因子RORγt对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用

目的:探讨转录因子维A酸相关孤独受体γt(RORγt)对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用。方法:健康成人外周血单个核细胞用CD3单克隆抗体和IL-2激活和扩增T细胞,活化T细胞用脂质体法转染人工合成的RORγt基因特异性短干扰RNA(siRNA)序列3个片段(RORγt-siRNA-982,-1026,-1197),RT-PCR半定量法检测活化T细胞转染siRNA后RORγt基因表达,流式细胞仪检测不同T细胞亚群产生IFN-γ细胞的比例。结果:活化T细胞转染RORγt-siRNA后,对RORγt基因表达的检测显示,RORγt-siRNA-982序列无抑制作用,而RORγt-siRNA-1026和-1197序列均有明显抑制作用。活化T细胞转染RORγt-siRNA-1026后,产生IFN-γ细胞百分数在CD4+T细胞(32.78±3.41)中,明显低于未转染组(44.54±1.75)(P<0.01)。结论:转录因子RORγt对T细胞,特别是对CD4+T细胞产生IFN-γ有正调控作用。

紫草素对鼻咽癌CNE1细胞免疫逃逸的影响

【目的】探讨紫草素对鼻咽癌细胞的治疗作用及机制。【方法】(1)体外研究:将人鼻咽癌CNE1细胞分为阴性对照组,紫草素1.2、2.4、3.6μmol/L组及紫杉醇2.5μmol/L组。采用四甲基偶氮唑盐(MMT)法检测CNE1细胞活性,Hoechst法检测CNE1细胞凋亡情况,Western Blot法检测CNE1细胞叉头样转录因子3(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)蛋白表达。(2)体内研究:将48只裸鼠分为正常组,模型组,紫草素低、中、高剂量组及紫杉醇组,每组8只。除正常组外,其余各组裸鼠建立鼻咽癌模型。紫草素低、中、高剂量组分别给予1.0、2.0、3.0 mg/kg紫草素灌胃,紫杉醇组腹腔注射2.0 mg/kg的紫杉醇。测量瘤体质量,计算抑瘤率,提取巨噬细胞采用流式细胞仪检测程序性死亡受体1配体(PD-L1)表达,Western Blot法检测Foxp3、RORγt蛋白表达。【结果】与阴性对照组比较,紫草素1.2、2.4、3.6μmol/L组及紫杉醇2.5μmol/L组的细胞活性均降低,细胞凋亡率增加(均P<0.05),并存在紫草素浓度依赖性,且Foxp3蛋白表达水平升高、RORγt蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与正常组比较,模型组裸鼠巨噬细胞中PD-L1、肿瘤组织RORγt蛋白表达水平升高,肿瘤组织Foxp3蛋白表达水平降低(均P<0.05);与模型组比较,紫草素低、中、高剂量组及紫杉醇组肿瘤质量减小,PD-L1、RORγt蛋白表达水平降低,Foxp3蛋白表达水平升高(均P<0.05);紫草素高剂量组各指标与紫杉醇组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】紫草素可以抑制鼻咽癌细胞增殖,抑制瘤体生长,其机制可能与降低肿瘤微环境巨噬细胞的PD-L1活性,激活Foxp3并抑制RORγt表达,进而减少肿瘤细胞免疫逃逸有关。

艾拉莫德治疗胶原诱导性关节炎模型大鼠的作用研究

目的研究艾拉莫德对胶原诱导性关节炎大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响及其可能作用机制。方法选取50只Wistar雌性大鼠,用Ⅱ型胶原诱导法建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组、甲氨蝶呤组和艾拉莫德低、中、高剂量组,每组各10只,另设对照组10只。艾拉莫德低、中和高剂量组大鼠分别灌胃3、6、12 mg·kg^(-1)·d^(-1)艾拉莫德混悬液(生理盐水配制);甲氨蝶呤组灌胃1 mg·kg^(-1)甲氨蝶呤混悬液,每周1次;对照组及模型组给予等量生理盐水,连续4周。观察大鼠足跖肿胀度;以酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清白细胞介素-17(IL-17)、IL-10水平;以流式细胞术检测大鼠外周血中Th17/Treg细胞比例;以实时荧光定量聚合酶链反应法检测大鼠踝关节滑膜中维A酸相关孤独受体γt(RORγt)、叉头转录因子3(Foxp3)mRNA的表达情况。结果对照组、模型组、甲氨蝶呤组和艾拉莫德低、中、高剂量组治疗4周的足跖肿胀度分别为0、(36.81±3.32)%、(5.81±0.60)%、(9.35±0.89)%、(6.57±0.64)%和(3.36±0.30)%;血清IL-17水平分别为(58.47±2.33)、(176.57±9.50)、(83.27±3.87)、(153.82±8.09)、(88.44±4.64)和(64.20±3.49)pg·mL^(-1);血清IL-10水平分别为(102.35±9.45)、(39.35±3.18)、(78.55±7.85)、(72.55±6.92)、(107.27±9.31)和(124.63±13.36)pg·mL^(-1);外周血中Th17亚群比例分别为(1.34±0.31)%、(5.43±0.59)%、(3.03±0.34)%、(4.35±0.40)%、(3.14±0.30)%和(1.66±0.23)%;外周血中Treg亚群比例分别为(12.53±0.47)%、(8.76±0.23)%、(11.82±0.34)%、(10.56±0.30)%、(11.77±0.39)%和(12.87±0.47)%。上述指标,模型组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);甲氨蝶呤组和艾拉莫德低、中、高剂量组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。艾拉莫德高剂量组与艾拉莫德低、中剂量组及甲氨蝶呤组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论艾拉莫德通过调控Th17/Treg平衡,减轻炎症反应发挥对CIA大鼠踝关节保护作用,其机制可能与调节其特异性转录因子RORγt、Foxp3表达有关。

寻常型银屑病患者三大基本中医证型外周血Th细胞分化与JAK/STAT信号通路的关系

目的:研究寻常型银屑病血热、血瘀、血燥证形成与Th分化、JAK/STAT信号通路关系。方法:收集寻常型银屑病患者33例(血热证15例、血瘀证10例、血燥证8例),正常组健康人10名,运用流式细胞术检测各组受试者外周血Th1、Th17细胞的分化比例差异,运用Western bolt法检测pSTAT4/STAT4、pSTAT3/STAT3表达差异,运用qPCR法检测T-bet、ROR-γt表达差异。结果:受试者外周血Th1、pSTAT4/STAT4、T-bet表达及Th17、pSTAT3/STAT3、ROR-γt表达互为正相关(P<0.01,P<0.05);血热证患者外周血Th1、Th17、pSTAT4/STAT4、pSTAT3/STAT3、T-bet、ROR-γt显著高于正常组(P<0.01),Th1血热证高于血燥证(P<0.05),Th17、pSTAT4/STAT4、pSTAT3/STAT3、T-bet、ROR-γt血热证高于血瘀证、血燥证(P<0.05,P<0.01)。结论:在Th细胞异常分化过程中,JAK/STAT信号转导通路的异常活跃可能是银屑病血热证形成的物质基础,且JAK/STAT信号通路可能与血热证向血瘀、血燥证转变的过程相关。