绵羊卵丘细胞对卵母细胞减分恢复核成熟的影响

实验研究了卵丘细胞与卵母细胞通过间隙连接通道对绵羊卵母细胞核成熟的影响。采用抽吸法从2～6mm的卵巢上收集的卵丘-卵母细胞复合体COCs。将部分COCs脱去全部卵丘细胞,成为机械裸卵(DOs)后,分4种方式培养,即卵丘细胞包裹的卵母细胞(CEOs)的单独培养、DOs与COCs共培养(DOs(COCs))、DOs与卵丘颗粒细胞共培养的(DOs(CCs)),以及DOs单独培养,培养26h,用0.2%地衣红对绵羊卵母细胞进行染色检查。各组卵母细胞到达减数分裂2期的比率分别是79.6%、5.6%、9.9%和46.4%,4组间都有显著差异统计核成熟率(P<0.05)。表明卵丘细胞及间隙连接对卵母细胞减数分裂恢复核成熟有非常重要的作用。

猪卵丘扩展与卵母细胞核成熟关系的研究

以猪卵丘卵母细胞复合体（COC）为实验对象研究了猪卵丘扩展与卵母细胞核成熟之间的关系,结果表明,（1）全程培养均暴露于激素环境中不利于卵丘的扩展;（2）卵丘扩展良好与卵丘扩展不好的卵母细胞核成熟比例无统计学差异（P>005）;（3）去除卵母细胞的COC培养后,卵丘细胞仍然能发生扩展;（4）培养24h后去掉COC的卵丘细胞不仅不影响卵母细胞的核成熟,而且极体完整的卵母细胞数目还显著增多（P<0.01）;但去颗粒细胞组卵母细胞的质膜不如对照组光滑;（5）带有壁颗粒细胞（mural granulosa cell,MGC）的COC扩展情况明显优于不带MGC的,其中含有极体的成熟卵数也显著高于后者（P<0.01）。

卵丘细胞和细胞骨架稳定剂对绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响

[目的]为了提高绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻的效果。[方法]以未冷冻的卵母细胞为对照,研究卵丘细胞存在与否以及不同浓度的细胞骨架稳定剂对绵羊成熟卵母细胞冷冻保存的影响。[结果]卵丘细胞存在与否对绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻没有影响。在所有细胞松弛素B处理组中,用7.5、10.0μg/ml细胞松弛素B处理的绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻后获得较高的囊胚率(P<0.05),分别为8.1%、7.8%;在所有紫杉醇处理组中,用0.5μmol/L紫杉醇处理的绵羊成熟卵母细胞玻璃化冷冻后获得的囊胚率最高为10.1%(P<0.05)。[结论]细胞骨架稳定剂细胞松弛素B或紫杉醇可以提高绵羊成熟卵母细胞的玻璃化冷冻效果。

月份对绵羊卵母细胞采卵数及体外成熟的影响

为研究不同月份对绵羊卵母细胞采卵数及体外成熟的影响,采用切割法获得不同月份绵羊卵母细胞,统计分析可用卵母细胞数和体外培养成熟率。结果表明:随着月份的延续,卵母细胞获得数从5月的(3.53±0.27)(个/d)稳步增加到11月的(5.16±0.15)(个/d),差异极显著(P<0.01)。卵母细胞体外成熟率也显著提高,其中8月份成熟率极显著高于5月、6月、7月(P<0.01);9月、10月、11月卵母细胞成熟率又极显著的高于8月(P<0.01),同时季节和气温对绵羊卵母细胞采卵数和利用也有显著影响(P<0.01)。因此,不同月份采卵显著影响可用绵羊卵母细胞数和卵母细胞体外成熟水平。

GDF9与BMP15在绵羊腔前卵泡及卵母细胞体外成熟过程中的差异表达

为了探讨GDF9与BMP15在绵羊腔前卵泡发育及卵母细胞体外成熟过程中的作用,运用腔前卵泡的显微分离方法和RT-PCR技术,检测了GDF9、BMP15 m RNA在绵羊腔前卵泡及卵母细胞体外成熟过程中(0、8、16、24 h)的相对表达丰度。结果表明:绵羊COCs在体外培养的不同时期,卵丘细胞扩展呈现不同的形态学变化;腔前卵泡中GDF9、BMP15 m RNA表达量均低于体外成熟不同时期卵母细胞,且腔前卵泡中GDF9 m RNA表达量显著低于体外成熟不同时期卵母细胞。揭示GDF9和BMP15对卵巢卵泡发育和卵母细胞体外成熟发挥重要作用,在绵羊卵母细胞体外成熟过程中,这2个因子可能是独立或协同地影响卵丘细胞增殖扩散。

C型钠肽预处理对绵羊卵母细胞体外成熟及相关基因表达的影响

本实验旨在研究C型钠肽(CNP)预处理对绵羊卵母细胞体外成熟(IVM)及相关基因(Dnmt1、Zar1、Mater、HAS2、PTX3和PTGS2)表达的影响。以体外成熟24 h为对照组,研究CNP预处理组(200nmol/L CNP预处理4 h然后体外成熟24 h)中卵母细胞经孤雌激活(PA)后的发育情况,并通过RT-q PCR检测CNP预处理对成熟相关基因表达的影响。结果表明:200 nmol/L CNP可在4 h内有效抑制卵母细胞减数分裂进程。CNP预处理组中孤雌胚胎囊胚率显著高于对照组(P<0.05);绵羊卵母细胞成熟培养前,CNP预处理组中卵丘细胞扩展相关基因HAS2、PTGS2和PTX3表达量较对照组极显著上调(P<0.01);CNP预处理组中母源基因Dnmt1、Zar1和Mater表达量与对照组均无显著差异(P>0.05)。绵羊卵母细胞成熟培养后,CNP预处理组中PTX3表达量极显著高于对照组(P<0.01),而CNP预处理组中HAS2表达量较对照组极显著下调(P<0.01);CNP预处理组中母源基因Dnmt1、Zar1和Mater表达量均显著高于对照组(P<0.05)。综上表明,CNP预处理可影响绵羊卵丘细胞扩展相关基因HAS2、PTGS2、PTX3和母源基因Dnmt1、Zar1、Mater的表达,并提高绵羊卵母细胞成熟质量及早期胚胎发育能力。

哺乳动物的卵母细胞成熟机理

卵母细胞的成熟(包括细胞核成熟和细胞质成熟)是完成正常受精及早期胚胎发育所必须的,是指卵母细胞获得完成减数分裂、为受精及胚胎发育做好准备的能力。在哺乳动物,这一过程非常复杂,有许多问题至今仍没搞清。 一、卵母细胞减数分裂能力的恢复 在大多数哺乳动物,出生前后卵原细胞停止有丝分裂,进入减数分裂,并停滞于第一次减数分裂前期的双线期。性成熟以后,每一繁殖周期都有一批卵母细胞在迄今未知的某些信号的作用下,进入生长期,卵母细胞体积快速增加。接近生长期结束时,获得减数分裂的能力,但仍停滞于双线期。在许多动物,该期细胞核明显。

间隙连接介导的cAMP运输对小鼠卵母细胞成熟的调控机制

哺乳动物的卵泡体细胞通过间隙连接与卵母细胞形成了复杂的信号传递网络系统。间隙连接传递的重要物质包括第二信使cAMP和cGMP。cAMP在卵母细胞成熟过程中起着关键的作用,但卵母细胞成熟中cAMP峰的来源以及其运输方向尚不清楚。本研究主要利用小鼠卵泡包裹的卵母细胞(FEOs)体外成熟模型。

葡萄糖代谢与卵母细胞成熟

卵母细胞成熟所消耗的能量部分来源于卵丘细胞,但主要由卵母细胞线粒体产生;能量代谢的底物为葡萄糖,其次为脂质和氨基酸代谢。卵丘-卵母细胞复合物(cumulus-oocyte complex,COC)中葡萄糖代谢有四种途径,即糖酵解途径、磷酸戊糖途径、己糖胺生物合成途径和多元醇途径。糖酵解途径是卵丘细胞主要代谢途径,在无氧或低氧时的产能效率低;有氧条件下卵母细胞主要通过线粒体的氧化磷酸化途径代谢葡萄糖,产能效率最高。卵母细胞自身直接代谢葡萄糖的能力弱,需要利用卵丘细胞糖酵解所产生的丙酮酸作为能量代谢的底物。卵母细胞成熟包括核成熟和胞质成熟,都是能量依赖的过程。本文综述卵母细胞糖代谢及其对卵母细胞成熟、核质成熟同步化的作用,可望通过调节糖代谢方式实现优化卵母细胞体外成熟方案,有益于改善体外成熟卵母细胞的质量和发育潜能。