新疆一例牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染的病例初报

2021年8月17日,新疆托克逊县一头西门塔尔母牛出现高热、瘤胃胀气、肌肉震颤、呼吸急促、结膜黄染和血红蛋白尿等临床症状。为确认发病原因,采集该牛全血和体表蜱虫样品进行光学显微镜观察、血常规检测和聚合酶链式反应(PCR)检测。血涂片镜检结果显示,患牛疑似牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染;血常规检测显示,血红蛋白、血红细胞压积、平均血红蛋白浓度和中性粒细胞等指标下降,血小板和淋巴细胞百分比等指标上升,提示该牛机体存在贫血和炎症反应;血液样品PCR结果显示,牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体检测均呈阳性;蜱虫样品PCR结果显示,牛环形泰勒虫检测为阳性。综上,患牛最终被诊断为牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体混合感染。目前,此3种病原共同感染牛的案例极为少见。本研究为今后牛混合感染牛环形泰勒虫、念珠菌和绵羊无浆体的临床诊断提供了参考。

新疆革蜱源性绵羊无浆体病原DNA检测

【目的】探究新疆部分地区羊体表寄生的优势革蜱携带病原状况。【方法】采用形态学(借助显微镜)和分子生物学(革蜱种属特异性ITS-2F、ITS-2R引物进行扩增)方法,对采集于阿勒泰、巴音郭楞州等地州羊体表寄生的蜱虫(N=267)进行种属鉴定,对其携带的绵羊无浆体病原(MSP4基因为靶标)DNA进行PCR检测。【结果】当地羊体表寄生的优势种革蜱为草原革蜱(D.nuttalli)、森林革蜱(D.slivarum)和边缘革蜱(D.marginatus),均能携带病原MSP4基因,且这三种革蜱种特异基因扩增产物序列(820 bp)与已登录记载的同种革蜱的核苷酸同源性为99%。被革蜱叮咬的126份羊全血样品中34份为绵羊无浆体阳性,均能扩增出850 bp目的基因条带。【结论】新疆阿勒泰地区、巴音郭楞州等地州羊群感染了绵羊无浆体病,其阳性率为27%(34/126)。为进一步研究新疆革蜱的公害州及羊无浆体病的综合防治提供科学依据。

基于绵羊无浆体Groel基因的PCR方法的建立

利用绵羊无浆体(Anaplasma ovis)高度保守的Groel基因,建立了快速、特异、敏感的绵羊无浆体检测方法。根据GenBank上登录的绵羊无浆体Groel基因序列(FJ460438),设计1对特异性引物,建立了绵羊无浆体PCR检测方法,并对其进行特异性、敏感性、重复性试验及临床样品检测。结果显示,该方法能特异性地检测绵羊无浆体,与山羊无浆体、嗜吞噬细胞无浆体、牛无浆体、边缘无浆体、吕氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、羊附红细胞体、弓形虫基因组均无交叉反应;该方法检测下限可达到7.7×10-15 g·μL-1,比文献报道的PCR敏感10倍(77×10-15 g·μL-1);具有良好的重复性;对81份羊临床血液样品检测结果表明,绵羊无浆体感染率为32.1%(26/81),高于文献报道的PCR(MSP4基因)检测结果(18.5%,15/81)。

新疆南疆部分地区绵羊的绵羊无浆体病感染情况调查

为了解南疆地区绵羊感染绵羊无浆体感染状况,试验从南疆4个地区(喀什、和田、阿克苏、巴音郭楞蒙古自治州)的21个县市采取绵羊血液样品,进行流行病学调查。对采集的637份血液样品中绵羊无浆体的16S rRNA进行巣式PCR扩增,并分析584 bp片段的阳性样品。结果表明:巴州、喀什、和田和阿克苏地区的感染率分别为75.8%、34.8%、23.3%和23.0%,平均感染率为33.3%;采样点各县市中感染率最高的为巴楚县91.4%,最低为阿瓦提县感染率10.3%,各地区感染率差异性较大。调查说明,新疆南疆地区属于绵羊无浆体病高发地区,急需采取科学防控措施。

伊吾县部分养殖场感染绵羊无浆体病的流行病学调查

为了解2016~2018年伊吾县部分养殖场感染绵羊无浆体病的情况,实验采用统计学方法和分子生物学方法对羊体表媒介蜱进行种群结构分析,对疑似羊全血进行流行病学调查。结果表明,鉴定出硬蜱2属4种,璃眼蜱属为该地区羊体表寄生蜱的主要群落物种,残缘璃眼蜱和小亚璃眼蜱染蜱率、蜱指数较高,亚洲璃眼蜱蜱指数最低为0.15;吐葫芦乡种群结构较为丰富、多样,盐池镇、淖毛湖镇种群结构参数相似;蜱源性病原检测仅小亚璃眼蜱检测出携带绵羊无浆体,蜱源性无浆体病总阳性率为3.96%,血源性绵羊无浆体总阳性率为14.60%(87/596),其中淖毛湖镇绵羊无浆体阳性率最高为20.13%(30/149),1<n≤2年龄段的绵羊无浆体感染较高为7.55%(45/596)。本次调查结果为伊吾县媒介蜱和绵羊无浆体病的综合防控提供参考依据。

新疆部分地区优势种革蜱携带绵羊无浆体的检测及其进化关系

为了研究新疆部分地区优势种革蜱携带绵羊无浆体的情况及其进化关系,将2015—2016年在新疆部分地区共13个县市的试验点采集的4种优势种革蜱做为试验材料,通过PCR方法检测其是否携带绵羊无浆体,将目的条带送去测序,测序结果在NCBI上进行BLAST比对,进行同源性分析。结果显示,该序列与绵羊无浆体（KU497712.1）同源性达98%,确定为绵羊无浆体;蜱源性检测绵羊无浆体的携带率为14.4%,仅检测出银盾革蜱和边缘革蜱携带绵羊无浆体,其携带率分别为33.6%,24.0%,可确定银盾革蜱及边缘革蜱为绵羊无浆体的媒介蜱。结果表明,明确绵羊无浆体的媒介蜱,控制其传播范围,从而降低该病在新疆地区暴发流行的可能性,为新疆绵羊无浆体病原及其传播媒介蜱的研究提供理论参考。

昌吉市及周边地区散养牛绵羊无浆体的PCR检测及感染情况调查

为了了解昌吉市、阜康市和呼图壁县散养牛携带绵羊无浆体情况,试验于2017年在昌吉市、阜康市和呼图壁县等3个市(县)的试验点采集牛血样共90份,通过PCR方法检测,最后经测序确诊病原。结果表明:PCR检测可特异地扩增出322 bp的目的片段,该序列与绵羊无浆体(HQ456350.1、KJ782397.1、HM063433.1)的同源性达99%,确定为绵羊无浆体。阜康市、昌吉市和呼图壁县散养牛感染绵羊无浆体的阳性率为分别为63%(19/30)、10%(3/30)、0(0/30),总感染率为24%(22/90)。说明阜康市、昌吉市散养牛携带绵羊无浆体,应该加强防范。

新疆阿克苏地区蜱和羊感染无浆体的分子流行病学调查

[目的]了解新疆阿克苏地区蜱与羊感染无浆体的情况。[方法]共采集192只蜱和477份羊抗凝血样品;以线粒体16S rDNA和ITS-2为靶基因,采用PCR法对经过形态学鉴定的蜱虫进行分子生物学鉴定;利用特异性引物,分别采用普通PCR法及巢式PCR法检测绵羊无浆体(Ananlasma ovis,A.ovis)和嗜吞噬细胞无浆体(Ananlasma phagocytophilum,A.phagocytophilum)在蜱和羊抗凝血样品中的携带情况;采用统计学方法分析不同种类、性别蜱虫和不同区域、不同饲养模式下羊感染上述2种无浆体的情况。[结果]采集到的192只蜱虫包括雄蜱79只、雌蜱113只,共有2属3种,分别为扇头蜱属的图兰扇头蜱(Rhipicephalus turanicus,R.turanicus)以及璃眼蜱属的亚洲璃眼蜱(Hyalomma asiaticm,H.asiaticm)和小亚璃眼蜱(Hyalomma anatolicm,H.anatolicm),所占比例分别为52.60%、45.83%、1.56%。蜱样品中,感染2种无浆体的总体阳性率为7.29%,未检测到A.ovis和A.phagocytophilum混合感染;R.turanicus、H.asiaticm、H.anatolicm感染无浆体的阳性率分别为8.91%、5.68%、0,三者差异有统计学意义(χ^(2)=3.20,P<0.05);雄蜱和雌蜱感染无浆体的阳性率分别为6.33%、7.96%,二者差异无统计学意义(χ2=0.30,P>0.05)。羊抗凝血样品中,感染2种无浆体的总体阳性率为51.15%,与蜱样品的总体阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=111.35,P<0.05);A.ovis与A.phagocytophilum混合感染率为16.56%;舍饲羊和散养羊感染无浆体阳性率分别为28.16%和83.00%,二者差异有统计学意义(χ^(2)=139.81,P<0.05);库车市和沙雅县羊无浆体阳性率最低,为5.00%,温宿县阳性率最高,为64.83%,二者差异有统计学意义(χ^(2)=27.72,P<0.05)。[结论]阿克苏地区蜱和羊普遍感染无浆体,应该加强对无浆体病的防治工作。

羊蜱蝇及其携带部分病原体的研究概述

羊蜱蝇作为一种寄生于宿主体表并吸食宿主血液的体外寄生虫,可携带并传播多种病原微生物,包括立克次氏体、绵羊无浆体、巴尔通体等。新疆维吾尔自治区是我国西北畜牧区重要组成部分。目前,新疆面临较为严峻的羊蜱蝇及其携带病原体感染情况,但仍较缺乏具有针对性的综合报道。文章对几种羊蜱蝇携带的常见病原体以及羊蜱蝇的防控进行概述,以期为羊蜱蝇及其携带病原体的防控提供参考。